胡文娟， 范夢(mèng)雪， 陳曉芳， 姜云晶， 朱電鋒， 李 玉， 馮士彬， 吳金節(jié)， 王希春

(安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院， 合肥 230036)

AFB1和DON對(duì)小鼠的聯(lián)合毒性研究

胡文娟， 范夢(mèng)雪， 陳曉芳， 姜云晶， 朱電鋒， 李 玉， 馮士彬， 吳金節(jié)， 王希春

(安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院， 合肥 230036)

旨在研究黃曲霉毒素B1(AFB1)和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)對(duì)小鼠的單獨(dú)及聯(lián)合毒性作用。選取21日齡昆明系雄性小鼠96只，隨機(jī)分為4組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8只。試驗(yàn)期間各組小鼠飼喂相同的飼料，第Ⅰ組為對(duì)照組，每天灌服生理鹽水，第Ⅱ組灌服200 μg·kg-1AFB1，第Ⅲ組灌服500 μg·kg-1DON，第Ⅳ組灌服200 μg·kg-1AFB1+ 500 μg·kg-1DON。試驗(yàn)期為30 d。分別于試驗(yàn)的第15天和第30天，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選擇4只小鼠經(jīng)眼球采血，用于測(cè)定血清生化指標(biāo)，同時(shí)剖檢小鼠，取肝臟和脾臟，計(jì)算臟器指數(shù)，并觀察肝臟病理變化。結(jié)果顯示，在試驗(yàn)第15天時(shí)，與對(duì)照組相比，第Ⅳ組小鼠肝臟、脾臟相對(duì)指數(shù)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)活性、丙二醛(MDA)含量顯著升高，總蛋白(TP)和白蛋白(ALB)含量顯著降低；同時(shí)，第Ⅳ組小鼠肝臟、脾臟相對(duì)指數(shù)、AST活性和MDA含量顯著高于第Ⅱ、Ⅲ兩組。試驗(yàn)至30 d時(shí)，與對(duì)照組相比，第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組小鼠的增重量均顯著降低；第Ⅳ組小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)和r-谷氨?；D(zhuǎn)移酶(r-GT)活性顯著升高，超氧化物歧化酶(SOD)活性和TP、ALB含量顯著降低；與第Ⅱ、Ⅲ組相比，第Ⅳ組小鼠血清ALP、r-GT活性和MDA含量顯著升高，而SOD活性顯著降低。試驗(yàn)表明，AFB1和DON可顯著降低小鼠的增重量、肝臟與脾臟指數(shù)、改變血清生化指標(biāo)，且兩者聯(lián)合毒性作用大于任一毒素的單獨(dú)毒性。

黃曲霉毒素B1；脫氧雪腐鐮刀菌烯醇；聯(lián)合毒性；生化指標(biāo)；小鼠

AbstractAn experiment was conducted to study the individual or joint toxicity of aflatoxin B1(AFB1) and deoxynivalenol (DON) in mice. Ninety-six Kunming male mice (21-day-old) were randomly divided into four groups, three replicates per group and eight per replicate. All mice were fed with the same feedstuff during the experiment. Mice in group Ⅰ were gavaged with the physiological saline every day; the mice in group Ⅱ were gavaged with 200 μg·kg-1AFB1; the mice in group Ⅲ were gavaged with 500 μg·kg-1DON and the mice in group Ⅳ were gavaged with 200 μg·kg-1AFB1+ 500 μg·kg-1.The trial was conducted for 30 days. On the 15thand 30thday, four mice from each replicate were selected randomly and blood samples were taken from the eyeball for measuring serum biochemical indexes. Meanwhile, the selected mice were slaughtered and the liver and spleen were taken for calculating the organ relative indexes, and the pathologic changes of liver tissues were observed. The results showed that, compared with the control group, the relative organ indexes of liver and spleen, serum AST activities and MDA contents of mice in Group Ⅳ were significantly increased , the ALB and TP contents were significantly decreased on the 15thday. Compared with Group Ⅱ and Group Ⅲ, the relative organ indexes of liver and spleen, serum AST activities and MDA contents of mice in Group Ⅳ were significantly increased. On the 30thday, compared with the control group, weight gain of mice in Group Ⅱ, Ⅲ, and Ⅳ were significantly decreased; serum ALT, ALP, r-GT activities of mice in Group Ⅳ were significantly increased, but SOD activities, and TP, ALB contents were significantly decreased. Compared with Group Ⅱ and Group Ⅲ, serum ALP and r-GT activities, and MDA contents of mice in Group Ⅳ were significantly increased, while serum SOD activities were significantly decreased. These experimental results suggest that AFB1and DON can decrease the weight gain, liver and spleen relative indexes, and alter the biochemical indexes; the joint toxic effects of AFB1and DON are higher than any of the individual toxicology.

Keywordsaflatoxin B1; deoxynivalenol; joint toxicity; biochemical index; mice

霉菌毒素(Mycotoxin)是霉菌在特定環(huán)境下產(chǎn)生的一類天然致癌物質(zhì)，主要存在于農(nóng)產(chǎn)品及飼料中[1]。據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織估算，每年的糧食作物約有20%因霉菌毒素污染而被棄用，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。此外，霉菌毒素進(jìn)入機(jī)體，可使酶類、蛋白質(zhì)等合成受到抑制，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)引起人和動(dòng)物中毒[2]。目前，由于國(guó)內(nèi)外關(guān)于多種霉菌毒素的報(bào)道很多，而毒素聯(lián)合毒性的研究較少。在制定飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，往往只考慮單一毒素的危害，忽略了多種霉菌毒素混合污染而引起的聯(lián)合作用的問(wèn)題。因此，開(kāi)展多種毒素的聯(lián)合毒性研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1, AFB1)和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol, DON)是常見(jiàn)的霉菌毒素污染物，也是日常農(nóng)產(chǎn)品和飼料中檢出率和檢出量最高的兩種霉菌毒素[3-4]。AFB1主要是由黃曲霉菌(Aspergillusflavus)和寄生曲霉菌(Aspergillusparasiticus)產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物[5]。AFB1被認(rèn)為是致癌力最強(qiáng)的天然物質(zhì)，已被國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)確定為人類的Ⅰ類致癌物，而肝臟是其作用的主要靶器官[6]。AFB1進(jìn)入機(jī)體后可干擾蛋白質(zhì)的合成，影響細(xì)胞代謝，甚至造成胸腺發(fā)育不良和大腦皮質(zhì)損傷[7]，最終造成動(dòng)物全身性的損害[8-10]。DON主要由禾谷鐮刀菌(Fusariumgraminearum)和黃色鐮刀菌(Fusariumculmorum)產(chǎn)生，是一種B型單端孢霉烯族類真菌毒素[11]。與AFB1相比，DON的毒性相對(duì)弱一些，但它在飼料中的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于AFB1，是一種全球性谷物污染物。DON可引起動(dòng)物機(jī)體不同程度的嘔吐、腹瀉、發(fā)燒等急性中毒癥狀，但臨床上基本以低濃度DON導(dǎo)致的采食量下降、免疫抑制、反應(yīng)遲鈍等慢性中毒居多[12-13]。此外，據(jù)報(bào)道食管癌等疾病也與DON有著密切的聯(lián)系[14]。為進(jìn)一步了解AFB1和DON在臨床上的危害，本試驗(yàn)將兩種毒素單獨(dú)或聯(lián)合作用于小鼠，通過(guò)對(duì)小鼠增重量、臟器相對(duì)指數(shù)、血清生化指標(biāo)及肝臟器官病理變化的影響，研究?jī)煞N毒素的聯(lián)合作用及其可能的毒性機(jī)制。本研究旨在通過(guò)小鼠體內(nèi)攻毒試驗(yàn)，探索AFB1和DON的聯(lián)合毒性，為今后畜牧業(yè)生產(chǎn)中霉菌毒素危害的有效解除提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

昆明系雄性小鼠(20±1)g，購(gòu)于愛(ài)爾麥特科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)材料

AFB1和DON標(biāo)準(zhǔn)品，購(gòu)于美國(guó)Sigma公司；血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、r-谷氨?；D(zhuǎn)移酶(r-GT)、總蛋白(TP)和白蛋白(ALB)檢測(cè)試劑盒購(gòu)于長(zhǎng)春匯力生物技術(shù)有限公司；超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)檢測(cè)試劑盒，蘇木素、伊紅染購(gòu)于南京建成生物科技有限公司；其他試劑購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司。

1.3 AFB1和DON標(biāo)準(zhǔn)品試劑的配置

將1 mg AFB1標(biāo)準(zhǔn)品，用1 mL色譜級(jí)甲醇溶于1 mg AFB1棕色瓶中，配成1 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，備用。

將1 mg DON標(biāo)準(zhǔn)品，用1 mL色譜級(jí)甲醇溶于1 mg DON棕色瓶中，配成1 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，備用。

1.4 試驗(yàn)動(dòng)物分組與管理

選擇21日齡健康的96只昆明系雄性小鼠，隨機(jī)分為4組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8只。小鼠預(yù)飼7 d，自由采食、飲水。從第8天開(kāi)始，每天9:00—11:00之間各組小鼠按照分組情況進(jìn)行灌胃處理。試驗(yàn)期為30 d。試驗(yàn)動(dòng)物分組與管理情況見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)動(dòng)物分組與管理

1.5 樣品的采集與處理

每天觀察各組小鼠的精神狀態(tài)，于試驗(yàn)的第1天早晨空腹稱重作為小鼠的初始體質(zhì)量，在試驗(yàn)第15天和第30天，每次剖殺小鼠前，早晨空腹稱重作為小鼠的終末體質(zhì)量。每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選4只小鼠，采用眼球采血法，分離血清，于-20℃冰箱保存，待測(cè)。采用頸椎脫臼法處死小鼠后進(jìn)行剖檢，肉眼觀察有無(wú)病理變化，取肝臟和脾臟稱重，計(jì)算臟器相對(duì)指數(shù)；然后將肝臟組織放置于10%的福爾馬林中，進(jìn)行常規(guī)石蠟切片制作。

肝臟指數(shù)(%)=肝質(zhì)量/體質(zhì)量×100%

脾臟指數(shù)(%)=脾質(zhì)量/體質(zhì)量×100%

1.6 生化指標(biāo)的測(cè)定

血清生化指標(biāo)包括AST、ALT、ALP、r -GT、TP和ALB，按試劑盒說(shuō)明書，采用GF-D200型半自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測(cè)定。

1.7 氧化與抗氧化指標(biāo)的測(cè)定

血清氧化與抗氧化指標(biāo)包括SOD和MDA，按試劑盒說(shuō)明書，采用GF-D200型半自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測(cè)定。

1.8 肝臟組織病理變化的觀察

1.8.1 石蠟切片的制備 從福爾馬林溶液中取出肝組織，切取適當(dāng)大小的組織塊，用解剖刀修至平整，單層紗布包裹，細(xì)繩結(jié)扎并標(biāo)記相應(yīng)組織和組別，然后置于燒杯中，用流水沖洗過(guò)夜。經(jīng)石蠟包埋后，采用YD-1508R輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)切片(厚度為4 μm)。

1.8.2 HE染色 將制備好的切片進(jìn)行常規(guī)HE染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察組織的病理變化。

1.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠的生長(zhǎng)狀態(tài)

試驗(yàn)期間，對(duì)照組小鼠生長(zhǎng)狀況良好，飲食正常，體重增重較快。第Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組小鼠灌服毒素后偶有抱團(tuán)現(xiàn)象，精神沉郁，未有死亡。試驗(yàn)后期，可見(jiàn)第Ⅳ組小鼠明顯消瘦。試驗(yàn)結(jié)束，剖檢小鼠，肉眼可見(jiàn)第Ⅳ組小鼠肝臟腫大，個(gè)別有出血點(diǎn)，其他的組織臟器未見(jiàn)明顯的病理癥狀。

2.2 小鼠增重量

第15天和第30天時(shí)，各組小鼠增重量如表2所示。

表2不同處理組小鼠增重量的比較

同一行比較，上標(biāo)字母相同者表示差異不顯著(P>0.05)，上標(biāo)字母不同者表示差異顯著(P<0.05)；下同

由表2可知，在第15天時(shí)，與第Ⅰ組相比，第Ⅳ組小鼠增重量顯著降低(P<0.05)，第Ⅱ、Ⅲ組差異不顯著(P>0.05)；雖然第Ⅳ組小鼠增重量低于第Ⅱ、Ⅲ組，但差異不顯著(P>0.05)。在第30天時(shí)，與第Ⅰ組相比，第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組小鼠增重量均顯著降低(P<0.05)；而第Ⅳ組小鼠增重量又略低于第Ⅱ和第Ⅲ組(P>0.05)。

2.3 肝臟和脾臟器官相對(duì)指數(shù)

第15天和第30天時(shí)，各組小鼠肝臟和脾臟器官相對(duì)指數(shù)如表3所示。

由表3可知，在15 d時(shí)，與第Ⅰ組相比，第Ⅳ組肝臟和脾臟相對(duì)指數(shù)顯著升高(P<0.05),第Ⅱ、Ⅲ組肝臟和脾臟相對(duì)指數(shù)差異不顯著(P>0.05)；而第Ⅳ組肝臟和脾臟相對(duì)指數(shù)顯著高于第Ⅱ和第Ⅲ組(P<0.05)。在30 d時(shí)，第Ⅳ組肝臟相對(duì)指數(shù)顯著高于第Ⅰ組(P<0.05)，而其他各組之間差異不顯著(P>0.05)；第Ⅱ、Ⅳ組脾臟相對(duì)指數(shù)顯著高于第Ⅰ組(P<0.05)，同時(shí)第Ⅳ組脾臟相對(duì)指數(shù)顯著高于第Ⅲ組(P<0.05)，其他各組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表3 不同處理組小鼠肝臟和脾臟器官相對(duì)指數(shù)的比較

2.4 血清生化指標(biāo)

第15天和第30天時(shí)，各組小鼠血清生化指標(biāo)如表4所示。

表4 不同處理對(duì)小鼠血清生化指標(biāo)的比較

由表4可知，在15 d時(shí)，各試驗(yàn)組小鼠血清ALT、ALP、r-GT活性差異均不顯著(P>0.05)，與第Ⅰ組相比，第IV組顯著高于其他3組(P<0.05)，3組間無(wú)顯著差異(P>0.05)；而第Ⅳ組顯著高于第Ⅱ、Ⅲ兩組(P<0.05)。與第Ⅰ組相比，第Ⅳ組小鼠血清TP含量顯著降低(P<0.05)，第Ⅱ、Ⅲ組差異不顯著(P>0.05)。與第Ⅰ組相比，第Ⅱ、Ⅳ組小鼠血清ALB含量顯著降低(P<0.05)，第Ⅲ組差異不顯著(P>0.05)；第Ⅳ組顯著低于第Ⅲ組(P<0.05)。

在30 d時(shí)，與第Ⅰ組相比，第Ⅳ組小鼠血清AST活性顯著升高(P<0.05)，第Ⅱ、Ⅲ組差異不顯著(P>0.05)；雖然第Ⅳ組數(shù)值上高于第Ⅱ、Ⅲ組，但差異不顯著(P>0.05)。與第Ⅰ組相比，第Ⅲ、Ⅳ組小鼠血清ALT活性顯著升高(P<0.05)，第Ⅱ組差異不顯著(P>0.05)，第Ⅳ組與Ⅱ、Ⅲ組相比有升高的趨勢(shì)，但差異不顯著(P>0.05)。與第Ⅰ組相比，第Ⅳ組小鼠血清中ALP活性顯著升高(P<0.05)，第Ⅱ、Ⅲ組差異不顯著(P>0.05)，而第Ⅳ組顯著高于第Ⅱ、Ⅲ兩組(P<0.05)。與第Ⅰ組相比，第Ⅲ、Ⅳ組小鼠血清中r-GT活性顯著升高(P<0.05)，第Ⅱ組差異不顯著(P>0.05)，第Ⅳ組顯著高于第Ⅱ、Ⅲ兩組(P<0.05)。與第Ⅰ組相比，第Ⅱ、Ⅳ組小鼠血清中TP含量顯著降低(P<0.05)，第Ⅳ組低于第Ⅱ、Ⅲ組，差異不顯著(P>0.05)。與第Ⅰ組相比，第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組小鼠血清中ALB含量顯著降低(P<0.05)，第Ⅳ組顯著低于第Ⅲ組(P<0.05)。

2.5 血清SOD活性和MDA含量

第15天和第30天時(shí)，各組小鼠血清SOD活性和MDA含量如表5所示。

表5 不同處理組小鼠血清SOD活性和 MDA含量的比較

由表5可知，在15 d時(shí)，各組小鼠血清SOD活性差異不顯著(P>0.05)；與第Ⅰ組相比，第Ⅳ組小鼠血清MDA含量顯著升高(P<0.05)，第Ⅱ、Ⅲ組差異不顯著(P>0.05)，而第Ⅳ組顯著高于第Ⅱ、Ⅲ兩組(P<0.05)。在30 d時(shí)，與第Ⅰ組相比，第Ⅳ組小鼠血清中SOD活性顯著降低(P<0.05)，而MDA產(chǎn)量顯著升高(P<0.05)，第Ⅱ、Ⅲ組SOD活性和MDA含量差異不顯著(P>0.05)，而第Ⅳ組血清SOD活性顯著低于第Ⅱ、Ⅲ兩組(P<0.05)，MDA含量顯著高于第Ⅱ、Ⅲ兩組(P<0.05)。

2.6 肝組織病理切片

15 d 時(shí)各組小鼠肝臟組織病理變化如圖1所示。

圖1 肝組織切片圖(HE染色，400×)

A:第Ⅰ組； B:第Ⅱ組； C:第Ⅲ組； D:第Ⅳ組

30 d 時(shí)各組小鼠肝臟組織病理變化如圖2所示。

圖2 肝組織切片圖(H·E染色，400×)

A:第Ⅰ組； B:第Ⅱ組； C:第Ⅲ組； D:第Ⅳ組

由圖1可知，在試驗(yàn)的15 d時(shí)，各組小鼠肝組織病理切片顯示，第Ⅳ組肝細(xì)胞有輕微水泡變形情況，而其他3組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，無(wú)損傷及異常情況。試驗(yàn)至30 d時(shí)，各試驗(yàn)組肝細(xì)胞形態(tài)由圖2可知，第Ⅰ組小鼠肝組織形態(tài)基本正常，未見(jiàn)明顯變化，第Ⅱ組有少量肝細(xì)胞水泡變性(圖2-B中箭頭標(biāo)注)，偶見(jiàn)瘀血(圖2-B中三角形標(biāo)注)，第Ⅲ組肝細(xì)胞有輕微水泡變性(圖2-C中箭頭標(biāo)注)，而第Ⅳ組水泡變性的肝細(xì)胞數(shù)量及情況較第Ⅱ、Ⅲ組而言，情況明顯加重(圖2-D中箭頭標(biāo)注)。

3 討論

3.1 AFB1和DON單獨(dú)及聯(lián)合作用對(duì)小鼠血清生化指標(biāo)的影響

霉菌毒素進(jìn)入機(jī)體后，可對(duì)肝臟造成傷害，引起細(xì)胞的損傷，增強(qiáng)細(xì)胞膜的通透性，造成了細(xì)胞內(nèi)酶大量釋放到血液中，從而導(dǎo)致血清中酶的活性增高[15,17]。因此，可通過(guò)測(cè)定血清肝功能敏感指標(biāo)來(lái)反映肝細(xì)胞受損情況及損傷程度。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各染毒組小鼠血清ALT、AST、ALP和r-GT 4種酶活性均有不同程度升高，但數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析可見(jiàn)，AFB1和DON聯(lián)合染毒組小鼠的血清酶活性變化更強(qiáng)。TP和ALB兩種蛋白是由肝臟合成，其含量是反映肝功能的重要指標(biāo)[18]。肝臟合成功能的下降，會(huì)使血液中這兩種蛋白的濃度降低。本試驗(yàn)30 d時(shí)，各染毒組小鼠血清TP、ALB均出現(xiàn)下降，這與Li[19]報(bào)道的試驗(yàn)結(jié)果具有一定的相似性，AFB1和DON聯(lián)合染毒組小鼠血清中這兩種蛋白含量降低程度明顯大于毒素單獨(dú)作用的程度。何成華等[20]試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，AFB1和DON聯(lián)合作用于錦鯉時(shí)可引起ALP、ALT活性的顯著升高，不論毒素單獨(dú)或聯(lián)合作用時(shí)，都能引起TP、ALB含量的降低。總之，AFB1和DON聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)小鼠的血清生化指標(biāo)影響更為明顯，表明這兩種毒素存在協(xié)同或相加作用。

3.2 AFB1和DON單獨(dú)及聯(lián)合作用對(duì)臟器相對(duì)指數(shù)及組織病理變化的影響

本試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，不論AFB1、DON單獨(dú)或聯(lián)合作用小鼠時(shí)，對(duì)小鼠的肝臟、脾臟相對(duì)指數(shù)都有影響，其中兩種霉菌毒素聯(lián)合作用時(shí)對(duì)小鼠臟器相對(duì)指數(shù)的影響比單獨(dú)作用時(shí)更顯著，通過(guò)肝臟病理切片觀察也發(fā)現(xiàn)相似的結(jié)果，AFB1和DON聯(lián)合染毒組小鼠的肝臟水泡變性程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其單獨(dú)作用時(shí)的程度。說(shuō)明AFB1和DON對(duì)小鼠的脾臟相對(duì)指數(shù)、肝臟相對(duì)指數(shù)和組織病理學(xué)的影響表現(xiàn)為協(xié)同或相加作用。Casado等[21]在研究伏馬菌素B1(FB1)和AFB1聯(lián)合毒性時(shí)發(fā)現(xiàn)，兩種霉菌毒素聯(lián)合作用時(shí)對(duì)小鼠臟器的病理變化更強(qiáng)烈。

3.3 AFB1和DON單獨(dú)及聯(lián)合作用對(duì)SOD活性與MDA含量的影響

SOD是體內(nèi)重要的抗氧化酶之一，MDA是SOD脂質(zhì)氧化產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，它們共同詮釋機(jī)體的氧化損傷情況[22]。霉菌毒素會(huì)降低抗氧化劑的保護(hù)作用。李榮佳等[23]用含有AFB1和DON的霉變飼料飼喂蛋雞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這兩種毒素可引起蛋雞血清SOD活性降低，而MDA含量升高。Jie等[24]用被霉菌污染的日糧飼喂大鼠后，血清SOD活性顯著降低。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AFB1和DON單獨(dú)作用時(shí)，沒(méi)有引起小鼠血清SOD、MDA的變化，而聯(lián)合作用時(shí)，顯著降低了血清SOD活性，提高了MDA含量。另外，雷明彥[25]試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，AFB1和DON同時(shí)作用于小鼠時(shí)，能協(xié)同提高血清MDA含量，加劇了肝臟細(xì)胞的損害，這與本試驗(yàn)結(jié)果也是一致的。表明AFB1和DON聯(lián)合作用對(duì)小鼠造成的危害明顯大于兩種毒素的單獨(dú)作用。

[1]JUAN C, RAIOLA A, MAES J, et al. Presence of mycotoxin in commercial infant formulas and baby foods from Italian market [J]. Food Control, 2014, 39:227-236.

[2]HUSSEIN H S, BRASEL J M. Toxicity, metabolism, and impact of mycotoxins on humans and animals [J]. Toxicology, 2001, 167(2):101-134.

[3]龔阿瓊, 李文華, 戴晉軍.2015年國(guó)內(nèi)市場(chǎng)玉米霉菌毒素污染情況分析[J].中國(guó)飼料,2016(4):38-42.

[4]李雅伶, 王建萍, 李 云,等.我國(guó)西南地區(qū)肉禽配合飼料中霉菌毒素的污染分布規(guī)律[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2016,28(2):531-540.

[5]REDDY K R N, FARHANA N I, SALLLEH B. Occurrence ofAspergillusspp. and aflatoxin B1, in Malaysian foods used for human consumption [J]. J Food Sci, 2011, 76(4):99-104.

[6]KANG M S, NKURUNZIZA P, MUWANIKA R, et al. Longitudinal evaluation of aflatoxin exposure in two cohorts in south-western Uganda[J]. Food Addit Contam: Part A, 2015, 32(8):1322-1330.

[7]BAHEY N G, ELAZIZ H O A, GADALLA K K. Toxic effect of aflatoxin B1and the role of recovery on the rat cerebral cortex and hippocampus[J]. Tissue Cell, 2015, 47(6):559-566.

[8]SKIPPER P L, TANNENBAUM S R. Protein adducts in the molecular dosimetry of chemical carcinogens [J]. Carcinogenesis, 1990, 11(4):507-518.

[9]ASTORECA A,VAAMONDE G,DALCERO A, et al. Modelling the effect of temperature and water activity ofAspergillusflavusisolates from corn [J]. Int J Food Micro, 2012, 156(1):60-67.

[10]SMITH L E, STOLTZFUS R J, PRENDERGAST A. Food chain mycotoxin exposure, gut health, and impaired growth: a conceptual framework [J]. Adv Nutrition, 2012, 3(4):526-531.

[11]REN Z, WANG Y, DENG H, et al. Deoxynivalenol induces apoptosis in chicken splenic lymphocytes via the reactive oxygen species-mediated mitochondrial pathway [J]. Environ Toxicol Pharmacol, 2015, 39(1):339-346.

[12]GHAREEB K, AWAD W A, NITSCH S, et al. Effects of transportation on stress and fear responses of growing broilers supplemented with prebiotic or probiotic[J]. Int J Poultry Sci, 2008, 7(7):678-685.

[13]WANG X C, XU W, FAN M X, et al. Deoxynivalenol induces apoptosis in PC12 cells via the mitochondrial pathway [J]. Environ Toxicol Pharmacol, 2016, 43:193-202.

[14]SCHOLLENBERGER M, MULLER H M, RüFLE M, et al. Survey of Fusarium toxins in foodstuffs of plant origin marketed in Germany [J]. Int J Food Micro, 2005, 97(3):317-326.

[15]HE C H, FAN Y H, WANG Y, et al. The individual and combined effects of deoxynivalenol and aflatoxin B1 on primary hepatocytes of Cyprinus carpio[J]. Int J Mole Sci, 2010, 11(10):3760-3768.

[16]MARIN S, RAMOS A J, CANO-SANCHO G, et al. Mycotoxins: occurrence, toxicology, and exposure assessment [J]. Food Chem. Toxicol, 2013, 60:218-237.

[17]SWAMY H V, SMITH T K, MACDONALD E J. Effects of feeding a blend of grains naturally contaminated withFusariummycotoxinson brain regional neurochemistry of starter pigs and broiler chickens [J]. J Animal Sci, 2004, 82(7): 2131-2139.

[18]RENSBURG C J V, RENSBURG C E J V, RYSSEN J B J V, et al.Invitroandinvivoassessment of humic acid as an aflatoxin binder in broiler chickens [J]. Poultry Sci, 2006, 85(9):1576-1583.

[19]LI Z. Effects of feed-borneFusariummycotoxinswith or without yeast cell wall adsorbent on organ weight, serum biochemistry,and immunological parameters of broiler chickens [J]. Poultry Sci, 2012, 91(10):2487-2495.

[20]何成華,樊彥紅,王 瑩,等.飼料中黃曲霉毒素B1和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇對(duì)鯉魚的聯(lián)合毒性研究[J]. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2010,33(6):85-89.

[21]CASADO J M,THEUMER M, MASIH D T, et al. Experimental subchronic mycotoxicoses in mice: individual and combined effects of dietary exposure to fumonisins and aflatoxin B1[J]. Food Chem Toxicol, 2001, 39(6):579-586.

[22]耿芳芳, 許 偉, 郭利偉,等.復(fù)合吸附劑對(duì)AFB1和DON暴露雞血清生化指標(biāo)的影響[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2015,35(3):507-511.

[23]李榮佳, 李治忠, 周 闖,等. 新型復(fù)合吸附劑HG對(duì)黃曲霉毒素B1和嘔吐毒素的吸附脫毒研究[J].南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2015, 38(1):113-119.

[24]JIE Y U, CHEN D, BING Y U. Protective effects of selenium and vitamin E on rats consuming maize naturally contaminated with mycotoxins[J]. Front Agric China, 2009, 3(1):95-99.

[25]雷明彥.飼料中常見(jiàn)霉菌毒素對(duì)小鼠的聯(lián)合毒性作用及機(jī)制的研究[D]. 武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2013.

Study on joint toxic effects of AFB1and DON in mice

HU Wen-juan, FAN Meng-xue, CHEN Xiao-fang, JIANG Yun-jing, ZHU Dian-feng, LI Yu, FENG Shi-bin, WU Jin-jie, WANG Xi-chun

(College of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China)

S816.7

A

2095-1736(2017)05-0034-05

2016-09-21；

2016-10-19

安徽省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目(KJ2013A119)；安徽省生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系資助項(xiàng)目(2016-2020)

胡文娟，碩士研究生，從事畜禽中毒病研究，E-mail：1299791970@qq.com

王希春，副教授，從事動(dòng)物中毒病與食品安全研究，E-mail：wangxichun@ahau.edu.cn

doi∶10.3969/j.issn.2095-1736.2017.05.034