王 鶴，肖星蕾，趙方曉，陳幼楠，林彩霞

（北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，北京，100029）

振腹干預(yù)對(duì)2型糖尿病大鼠血糖的調(diào)節(jié)作用與對(duì)其HPA軸影響的相關(guān)性

王 鶴，肖星蕾，趙方曉，陳幼楠*，林彩霞

（北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，北京，100029）

目的 研究振腹干預(yù)對(duì)2型糖尿病大鼠血糖的調(diào)節(jié)與對(duì)其HPA軸的影響是否具有相關(guān)性。方法 將60只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組10只、模型組50只，對(duì)模型組以鏈脲佐菌素（STZ）腹腔注射合并高糖高脂飼料喂養(yǎng)的方式進(jìn)行造模，后將符合納入標(biāo)準(zhǔn)的模型組大鼠分為模型組12只，治療組12只。對(duì)治療組大鼠行振腹干預(yù)，干預(yù)結(jié)束后將大鼠處死，取材并進(jìn)行相應(yīng)檢測(cè)，對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析。結(jié)果 治療結(jié)束后，治療組與模型組相比，F(xiàn)BG水平明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），腎上腺指數(shù)水平明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），腎上腺CORT濃度明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），下丘腦CRH濃度明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。治療組與對(duì)照組相比，F(xiàn)BG水平及腎上腺指數(shù)仍較高（P＜0.05）。結(jié)論 振腹干預(yù)能有效降低2型糖尿病大鼠的FBG水平，且其腎上腺皮質(zhì)分泌功能、HPA軸活性也相應(yīng)降低，說(shuō)明振腹法調(diào)節(jié)2型糖尿病大鼠糖代謝可能與其改善了腎上腺皮質(zhì)分泌功能及HPA軸功能有關(guān)。

2型糖尿病；振腹干預(yù)；HPA軸；FBG；CORT；CRH

Abstract:?Objective Study on whether the regulation of vibration abdominal intervention on type 2 diabetes mellitus rats of blood sugar and the effects on the HPA axis is relevant or not.Methods 60 rats were randomly divided into normal control group 10 and model group 50.Make models with STZ injection combining with high sugar and high fat feeding in the model group.And pick out the rats which comply with the inclusion criteria to divide 12 into model group and 12 into treatment group.Give vibration abdominal intervention to the treatment group rats, then kill them for test.Collect and analyze the data.Results 1.After the treatment, compared with model group, the FBG level of treatment group significantly reduced (P＜0.05), the adrenal index level of treatment group significantly reduced(P＜0.05), the adrenal CORT concentration of treatment group significantly decreased (P＜0.05) and the hypothalamus CRH concentration of treatment group significantly decreased (P＜0.05).2.Compared with normal control group,the FBG level of treatment group is still higher (P＜0.05) and the adrenal index level of treatment group is still higher(P＜0.05).Conclusion Vibration abdominal intervention can effectively reduce the level of FBG in type 2 diabetic rats.It means Vibration abdominal intervention has therapeutic effect on type 2 diabetic rats.The level of secretion of adrenocortical function and activity of HPA axis of the type 2 diabetic rats also reduced accordingly, which means that the regulating effect of type 2 diabetic rats glucose metabolism may be related to improve the secretion of adrenocortical function and the function of HPA axis.

Keywords:?type 2 diabetes mellitus; vibration abdominal intervention; HPA axis; FBG; CORT; CRH

北京中醫(yī)藥大學(xué)臧?？平淌谠谏蟼€(gè)世紀(jì)80年代提出振腹療法(vibration abdominal Intervention)，其方法是以神闕穴為中心，用手掌置于腹部并釋放腕痙攣?zhàn)饔糜诟共?。中醫(yī)認(rèn)為振腹法通過刺激任脈、帶脈、脾經(jīng)、胃經(jīng)、腎經(jīng)的經(jīng)穴達(dá)到滋補(bǔ)陰津、強(qiáng)腎健脾的功效。振腹手法覆蓋的穴位包括神闕、天樞、氣海、關(guān)元，神闕穴居中下焦之間，具有氣通百脈，布五臟六腑的功能，天樞、氣海、關(guān)元各穴也均有不同作用[1]，經(jīng)振腹刺激，能夠激發(fā)經(jīng)氣，調(diào)和百脈，培元固本，強(qiáng)運(yùn)化、促輸布，又可調(diào)和臟腑，調(diào)理腸胃、理氣和營(yíng)、溫腎助陽(yáng)、化氣生血，使經(jīng)絡(luò)通暢，氣機(jī)調(diào)達(dá)，陰陽(yáng)平衡[2]。臨床報(bào)道[3-12]表明，振腹法能夠通過糾正內(nèi)分泌而對(duì)多種疾病起效，其對(duì)糖尿病的治療效果也得到了臨床研究證實(shí)[5-6]。本課題組前期的試驗(yàn)研究也已證明振腹法對(duì)T2DM大鼠脂代謝及血糖水平均有顯著調(diào)節(jié)作用，血清游離脂肪酸、三酰甘油、血糖水平及胰島素指數(shù)均得到明顯改善[13-15]。研究還發(fā)現(xiàn)，T2DM患者常伴有不同程度的下丘腦－垂體－腎上腺軸（HPA軸)功能失調(diào)，具體表現(xiàn)以基礎(chǔ)活性增加、促糖皮質(zhì)激素晝夜節(jié)律紊亂、皮質(zhì)醇分泌性亢進(jìn)為主。本實(shí)驗(yàn)即由HPA軸入手，研究振腹法對(duì)2型糖尿病大鼠血糖的調(diào)節(jié)作用與其對(duì)HPA軸的影響是否具有相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 選用健康7周齡SPF級(jí)雄性Wistar大鼠60只，體質(zhì)量（250±10）g，北京斯貝福實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司提供，合格號(hào)：SCXK（京）2011-0004。飼養(yǎng)條件：溫度18～25 ℃，濕度50%～60 %，日光燈光照，自由飲用自來(lái)水。普通飼料：清潔級(jí)普通大鼠飼料（北京科澳協(xié)力有限公司）。高糖高脂飼料[16]：主要成分為66 %基礎(chǔ)飼料、15 %豬油、10 %白糖、6 %酪蛋白、3 %蛋黃粉（北京科澳協(xié)力有限公司）。

1.1.2 主要試劑 鏈脲佐菌素（STZ）：美國(guó)Sigma公司提供。STZ溶液配制方法：一水合檸檬酸、二水合檸檬酸鈉配制成0.1 mmol/L檸檬酸－檸檬酸鈉緩沖液，調(diào)節(jié)pH至4.4，高壓蒸汽滅菌后4 ℃冷藏保存，注射前在避光狀態(tài)下與STZ配制成2%的STZ溶液，于配置30 min內(nèi)使用完畢。羅氏全活力型血糖儀及配套血糖試紙：北京健力園醫(yī)療器械有限公司提供。ELISA皮質(zhì)酮試劑盒：德國(guó)DRG公司生產(chǎn)，批號(hào)：61K025。

1.1.3 儀器設(shè)備 振腹治療儀：課題組根據(jù)振腹法原理進(jìn)行設(shè)計(jì)，北京拓普斯樂有限公司提供技術(shù)支持。儀器構(gòu)成：振子、束縛帶、主機(jī)盒、電源線。振子上下振動(dòng)幅度約2 mm，振動(dòng)頻率為300次/min，220 v交流電源供電。

1.2 方法

1.2.1 分組與造模 60只大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，采用隨機(jī)分組法分為對(duì)照組10只和模型組50只。對(duì)照組大鼠采用普通飼料飼養(yǎng)，模型組大鼠采用高糖高脂飼料飼養(yǎng)，6周后，進(jìn)行藥物造模，所有大鼠禁食不禁水12 h，模型組大鼠腹腔一次性快速注射STZ溶液 30 mg/kg，對(duì)照組大鼠腹腔注射同等體積的檸檬酸－檸檬酸鈉緩沖液。對(duì)照組大鼠采用普通飼料飼養(yǎng)，模型組大鼠仍然采用高糖高脂飼料飼養(yǎng)，其中，模型組大鼠給予飲用葡萄糖水，以避免低血糖，降低死亡率。造模3 d后檢測(cè)模型組大鼠隨機(jī)血糖，對(duì)不符合成模標(biāo)準(zhǔn)的大鼠再次腹腔注射STZ 25 mg/kg，方法同上。1周后，所有大鼠禁食不禁水12 h，檢測(cè)空腹血糖(FBG)，將符合成模標(biāo)準(zhǔn)的大鼠納入分組。

1.2.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)照組：空腹血糖在正常范圍內(nèi)的大鼠。模型組：1）參考美國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)（ADA）人類糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)[17]，隨機(jī)血糖≥16.7 mmol/L且穩(wěn)定7 d及以上；2）禁食不禁水12 h后測(cè)量大鼠空腹血糖，并對(duì)大鼠進(jìn)行OGTT測(cè)試?？崭寡呛筒秃笱蔷黠@升高者納入造模組。納入完成后，將符合模型標(biāo)準(zhǔn)的大鼠隨機(jī)分為模型組12只，治療組12只。

1.2.3 振腹干預(yù) 對(duì)照組始終給予普通飼料喂養(yǎng)，不進(jìn)行振腹干預(yù)。模型組始終給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，不進(jìn)行振腹干預(yù)。治療組始終給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》選取臨床振腹法作用部位，將儀器的振子覆蓋于腹部任脈、左右胃經(jīng)、腎經(jīng)循行部位，包括神闕、關(guān)元、下脘、滑肉門、大橫穴等穴位，以束縛帶固定，進(jìn)行振腹干預(yù)。治療隔日1次，持續(xù)15 min/次，連續(xù)治療6周。

1.3 取材及指標(biāo)檢測(cè)

1.3.1 空腹血糖 測(cè)量時(shí)間：飲食造模前、藥物造模后干預(yù)開始前、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，分別測(cè)量1次。測(cè)量方法：20：00撤食，禁食不禁水12 h后，采血針在大鼠尾靜脈距末端0.5～1 cm處點(diǎn)刺取第2滴血，用羅氏血糖儀及血糖檢測(cè)試紙快速檢測(cè)，具體操作按說(shuō)明書要求進(jìn)行。

1.3.2 腎上腺皮質(zhì)醇（ CORT） 治療周期結(jié)束后，早8：00 — 8：30將大鼠處死，在冰盤上取出完整左側(cè)腎上腺，迅速置于液氮中冷藏，測(cè)量時(shí)使用ELISA皮質(zhì)酮試劑盒，采用ELISA平衡競(jìng)爭(zhēng)法進(jìn)行檢測(cè)（由北京北方生物技術(shù)研究所代為檢測(cè)）。

1.3.3 下丘腦促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH） 治療周期結(jié)束后，早8：00 — 8：30將大鼠處死，破壞顱底骨，將下丘腦作為一團(tuán)塊取出，前面限制在視交叉2 mm，后面至乳頭體，側(cè)面從下丘腦裂紋至離其底3 mm的組織，迅速置于液氮中冷藏，測(cè)量時(shí)使用CRH試劑盒，采用RIA法進(jìn)行檢測(cè)（由北京北方生物技術(shù)研究所代為檢測(cè)）。

1.3.4 腎上腺指數(shù) 治療周期結(jié)束，早8：00—8：30將大鼠處死，在冰盤上取出右側(cè)腎上腺，將脂肪等組織剝離干凈，且不破壞腎上腺皮質(zhì)，稱重。根據(jù)腎上腺指數(shù)公式計(jì)算出結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用軟件SPSS 20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x± s ）描述。組間比較，若數(shù)據(jù)符合正態(tài)性分布且方差齊，則采用F檢驗(yàn)，若方差不齊，則進(jìn)行Welch檢驗(yàn)或者K個(gè)獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)，若不符合正態(tài)性分布，則采用K個(gè)獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)；組內(nèi)比較，若差值d符合正態(tài)性分布，則進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，若不符合正態(tài)性分布，則進(jìn)行Wilcoxon檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果以P＜0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 振腹干預(yù)對(duì)各組大鼠FBG的影響 見表1。

表1 各組大鼠FBG比較(x± s ） mmol/L

2.2 振腹干預(yù)對(duì)各組大鼠腎上腺CORT的影響 見表2。

表2 各組大鼠腎上腺CORT濃度比較(x± s ）ng/mg

2.3 振腹干預(yù)對(duì)各組大鼠下丘腦CRH的影響 見表3。

表3 各組大鼠下丘腦CRH濃度比較(x± s ） pg/mg

2.4 振腹干預(yù)對(duì)各組大鼠腎上腺指數(shù)的影響 見表4。

表4 各組大鼠腎上腺指數(shù)比較(x± s ） mg/g

3 討論

各組大鼠FBG的結(jié)果表明，振腹法能有效的降低2型糖尿病大鼠的FBG，對(duì)其糖代謝紊亂具有一定的調(diào)節(jié)作用。但治療后與對(duì)照組相比，治療組大鼠的FBG仍然較高，說(shuō)明雖然振腹法具有一定的降糖作用，但不能完全將血糖恢復(fù)至正常水平。

各組大鼠腎上腺CORT、下丘腦CRH的結(jié)果顯示，2型糖尿病大鼠存在HPA基礎(chǔ)功能亢進(jìn)，治療后，治療組大鼠的腎上腺CORT濃度、下丘腦CRH濃度較模型組明顯降低，進(jìn)一步表明了振腹法可以調(diào)節(jié)T2DM大鼠CORT、CRH的合成分泌，對(duì)其HPA軸的活性具有調(diào)節(jié)作用。研究表明，慢性應(yīng)激時(shí)存在腎上腺增大，當(dāng)HPA軸功能亢進(jìn)時(shí)，CORT分泌增加，腎上腺皮質(zhì)功能活動(dòng)增強(qiáng)，從而造成組織肥大、重量增加，而當(dāng)腎上腺皮質(zhì)的功能活動(dòng)減弱時(shí)，會(huì)出現(xiàn)組織萎縮、重量減輕，因此，腎上腺重量的改變，可以粗略地反映腎上腺皮質(zhì)功能的情況及HPA軸活性改變。本實(shí)驗(yàn)選用腎上腺重量與體質(zhì)量比，即腎上腺指數(shù)來(lái)大體衡量HPA軸功能的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組腎上腺指數(shù)明顯高于對(duì)照組，說(shuō)明該實(shí)驗(yàn)中2型糖尿病大鼠模型腎上腺皮質(zhì)功能活動(dòng)增強(qiáng)，存在HPA功能紊亂的現(xiàn)象，治療后，治療組大鼠腎上腺指數(shù)較模型組明顯降低，表明治療組大鼠的腎上腺皮質(zhì)功能活動(dòng)下調(diào)，HPA軸功能得到改善，在一定程度上說(shuō)明振腹法對(duì)HPA軸活性具有調(diào)節(jié)作用。

綜上所述，振腹干預(yù)能有效降低2型糖尿病大鼠的FBG水平，且其腎上腺皮質(zhì)分泌功能、HPA軸活性也相應(yīng)降低，推測(cè)振腹法調(diào)節(jié)2型糖尿病大鼠糖代謝可能與其改善了腎上腺皮質(zhì)分泌功能及HPA軸功能有關(guān)，但該機(jī)制尚不明確，還需進(jìn)一步研究。

[1]蔡明亨.振腹療法治療糖耐量低減的臨床研究[D].北京： 北京中醫(yī)藥大學(xué), 2013.

[2]蘇波.中醫(yī)振腹對(duì)2型糖尿病大鼠血糖和GLP-1分泌影響的實(shí)驗(yàn)研究[D].北京： 北京中醫(yī)藥大學(xué), 2013.

[3]林彩霞.振腹法臨床應(yīng)用體會(huì)[J].世界中醫(yī)藥, 2009, 4(3)：157-158.

[4]宏達(dá), 臧?？?大成推拿術(shù)[M].北京： 中國(guó)中醫(yī)藥出版社,1998： 694.

[5]王金濤.松振法為主推拿治療糖尿病18例[J].山東中醫(yī)雜志 , 1999, 18(11)： 502.

[6]郭俊海.振腹法治療糖尿病初探[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2010, 16(6)： 224-225.

[7]許英姝.臟腑推拿手法治療原發(fā)性痛經(jīng)的臨床療效觀察[D].北京： 北京中醫(yī)藥大學(xué), 2013.

[8]楊國(guó)帥.掌振法為主推拿治療慢性淺表性胃炎(脾胃虛寒型)的臨床研究[D].濟(jì)南： 山東中醫(yī)藥大學(xué), 2014.

[9]彭亮, 李江山, 李鐵浪, 等.不同推拿手法對(duì)原發(fā)性痛經(jīng)患者血清PGF_(2α)含量及疼痛癥狀的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào) , 2012, 32(7)： 66-74.

[10]于長(zhǎng)生, 于曉光.振腹配合推拿治療頑固性心絞痛臨床觀察 [J].按摩與導(dǎo)引 , 2005, 21(9)： 3-4.

[11]丁海安, 嚴(yán)先貴.淺談?wù)窀怪委熗唇?jīng)[J].按摩與導(dǎo)引,2005, 21(3)： 34.

[12]成為品.淺談?wù)窀怪委焹?nèi)分泌紊亂[J].按摩與導(dǎo)引,1999, 15(6)： 3.

[13]陳鵬輝, 楊冰, 季然, 等.振腹對(duì)2型糖尿病大鼠血清游離脂肪酸和三酰甘油的影響[J].環(huán)球中醫(yī)藥, 2015, 8(9)：1070-1074.

[14]張?jiān)?振腹法對(duì)2型糖尿病大鼠糖脂代謝的影響[D].北京： 北京中醫(yī)藥大學(xué), 2015.

[15]趙方曉, 張?jiān)? 范德宇, 等.振腹法對(duì)2型糖尿病大鼠血糖和胰高血糖素樣肽-1分泌的影響[J].世界中醫(yī)藥,2015, 10(5)： 749-756.

[16]YE D, ZHANG ZF, DAI XQ.et al.grape seed proanthocyanidins ameliorate pancreatic beta-cell dysfunction and death in lowdose streptozotocin and high-carbohydrate/high-fat diet-induced diabetic rats partially by regulating endoplasmic reticulum stress[J].nutr metab (Lond), 2013, 10(51)： 1-12.

[17]AMERICAN, DIABETES, ASSOCIATION.Standards of medical care in diabetes-2012 [J].Diabetes Care, 2012, 35(1)： 11-63.

Regulating effect of vibration abdominal intervention on type 2 diabetic rats’blood glucose and the correlation study of the impact of the HPA Axis

WANG He, XIAO Xinglei, ZHAO Fangxiao, CHEN Younan*, LIN Caixia
（School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina, Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100029, China）

R285.5

A

1003-5699(2017)09-0699-04

2017-02-13）

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.05.004

國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目“振腹法振頻對(duì)HPA軸的調(diào)節(jié)作用及其對(duì)Ⅱ型糖尿病兔血糖的影響”（81202772）。

王 鶴（1990 -），女，碩士研究生，主要從事推拿學(xué)治療內(nèi)科疾病機(jī)理研究。

*通信作者：陳幼楠，女，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，電話-13810123910，電子信箱- chenyounan2010@163.com