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        let-7 miRNA 基因標(biāo)志物在甲狀腺癌中的表達(dá)分析

        2017-10-14 06:00:14
        關(guān)鍵詞:研究進(jìn)展意義檢測(cè)

        馮 琨

        let-7 miRNA 基因標(biāo)志物在甲狀腺癌中的表達(dá)分析

        馮 琨

        目的 探討let-7 miRNA 基因標(biāo)志物在甲狀腺癌組織中的表達(dá)及診斷意義。方法 選取臨床確診的26例甲狀腺癌患者, 提取患者的甲狀腺癌組織和甲狀腺癌旁組織, 并采用Real-time PCR檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)患者的甲狀腺癌組織和甲狀腺癌旁組織中l(wèi)et-7 miRNA基因標(biāo)志物的含量, 并進(jìn)行比較。結(jié)果 應(yīng)用Real-time PCR檢測(cè)技術(shù)發(fā)現(xiàn), 甲狀腺癌組織中的平均let-7 miRNA表達(dá)為(0.71±0.19), 顯著低于甲狀腺癌旁組織的(1.35±0.32), 比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=8.769, P<0.05)。結(jié)論 let-7 miRNA在甲狀腺癌發(fā)生中具有重要意義, 可成為甲狀腺癌新的基因診斷標(biāo)記物以及基因治療靶點(diǎn)。

        let-7 miRNA;基因標(biāo)志物;甲狀腺癌

        甲狀腺癌作為內(nèi)分泌系統(tǒng)最為常見(jiàn)的惡性腫瘤臨床上多表現(xiàn)為甲狀腺結(jié)節(jié), 占甲狀腺結(jié)節(jié)的5%~15%[1]。在臨床中,甲狀腺癌患者首選手術(shù)治療, 鑒于甲狀腺結(jié)節(jié)的高發(fā)病率,而甲狀腺惡性腫瘤僅占其中極小部分, 又難以在術(shù)前進(jìn)行明確的診斷, 這往往導(dǎo)致兩種不良后果:①手術(shù)適應(yīng)證和手術(shù)范圍被擴(kuò)大, 甲狀腺被無(wú)辜切除;②這種診斷性手術(shù)的目的性不明確, 不能等同于惡性腫瘤的根治術(shù), 留下復(fù)發(fā)隱患。因此, 在手術(shù)前甲狀腺結(jié)節(jié)的病理性質(zhì)明確診斷, 減少不良反應(yīng)的發(fā)生具有重要意義。本文通過(guò)對(duì)比分析甲狀腺癌組織以及癌旁組織中l(wèi)et-7 miRNA基因標(biāo)志物的含量, 探討let-7 miRNA 基因標(biāo)志物在甲狀腺癌組織中的表達(dá)及診斷意義。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 選取2016年8月~2017年5月在本院內(nèi)分泌科臨床確診的26例甲狀腺癌患者中的癌組織以及癌旁組織作為研究資料, 其中男12例, 女14例, 年齡25~69歲, 平均年齡(49.36±9.83)歲。

        1.2 組織中l(wèi)et-7 miRNA基因的檢測(cè) 取26例甲狀腺癌患者的蠟塊標(biāo)本, 將標(biāo)本進(jìn)行純化, 并通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)進(jìn)行擴(kuò)增后, 對(duì)其序列進(jìn)行直接測(cè)量, 所得出的結(jié)果與BRAF基因組DNA正常序進(jìn)行比對(duì)分析, 確定是否存在有點(diǎn)突變的情況發(fā)生。通過(guò)Real-time PCR檢測(cè)技術(shù), 檢測(cè)上述患者的癌組織以及癌旁組織中l(wèi)et-7 miRNA基因標(biāo)志物的含量。在實(shí)驗(yàn)中, 為明確PCR產(chǎn)物中是否存在有本研究的目標(biāo)DNA片段, 研究者選取5.0 μl PCR產(chǎn)物與1.0 μl DNA加樣緩沖液進(jìn)行混合后, 通過(guò)加樣處理, 將1.0 μl DNA標(biāo)記物作為研究的分子對(duì)照, 在濃度為6%的聚丙烯酞胺凝膠采用電泳處理,并進(jìn)行染色。將通過(guò)電泳最終確定的PCR產(chǎn)物通過(guò)純化并進(jìn)行測(cè)序, 而后測(cè)定癌組織以及癌旁組織中l(wèi)et-7 miRNA基因標(biāo)志物的含量。

        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差s)表示, 采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        應(yīng)用Real-time PCR檢測(cè)技術(shù)發(fā)現(xiàn), 甲狀腺癌組織中的平均let-7 miRNA表達(dá)為(0.71±0.19), 顯著低于甲狀腺癌旁組織的(1.35±0.32), 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=8.769, P<0.05)。見(jiàn)表1。

        表1 let-7 miRNA基因標(biāo)志物在甲狀腺癌中的表達(dá)情況比較s)

        表1 let-7 miRNA基因標(biāo)志物在甲狀腺癌中的表達(dá)情況比較s)

        注:與甲狀腺癌組織比較,aP<0.05

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        3 討論

        甲狀腺細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)檢查(FNA)在我國(guó)也正在逐步開(kāi)展, 然而遠(yuǎn)未普及, 國(guó)內(nèi)多數(shù)醫(yī)院仍未將FNA 采納為一種常規(guī)的術(shù)前檢查項(xiàng)目。目前文獻(xiàn)報(bào)道許多基因表達(dá)產(chǎn)物可作為FNA良、惡性結(jié)節(jié)診斷及鑒別診斷的標(biāo)志物。甲狀腺癌最常見(jiàn)的標(biāo)志物包括BRAF突變和ras基因及RET/ PTC。這些基因表達(dá)產(chǎn)物被發(fā)現(xiàn)超70%乳頭和濾泡甲狀腺癌中存在[2], 國(guó)內(nèi)外研究顯示, 這些分子標(biāo)志物已用于甲狀腺癌的FNA的分子診斷技術(shù)。甲狀腺癌的激活編碼通常位于細(xì)胞內(nèi)膜表面G相關(guān)蛋白質(zhì), 傳導(dǎo)細(xì)胞膜受體酪氨酸激酶和G偶聯(lián)蛋白產(chǎn)生的信號(hào), 參與MAPK、PI3K/AKT和其他受體信號(hào)通路激活[3]。

        近幾年, 大量研究顯示, 幾種miRNA在BRAF與RAS陽(yáng)性的腫瘤和甲狀腺乳頭狀癌中高表達(dá), 而miRNA在RAS基因突變的腫瘤中也有表達(dá)。同樣在甲狀腺濾泡狀癌中也有幾種miRNA呈陽(yáng)性表達(dá)。有關(guān)let-7 miRNA功能的新近研究顯示[4]:在肺腫瘤以及甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞增殖中, let-7 miRNA的作用與RAS蛋白表達(dá)水平下降有關(guān)。研究者發(fā)現(xiàn)將let-7 miRNA轉(zhuǎn)入RET基因突變的甲狀腺癌細(xì)胞系TPC-1后該細(xì)胞的增殖收到抑制, 并且MAPK蛋白活性也被下調(diào)[5]。另一重要發(fā)現(xiàn)是let-7 miRNA能夠增加甲狀腺細(xì)胞的分化標(biāo)志物的表達(dá), 說(shuō)明let-7 miRNA在甲狀腺細(xì)胞的成熟和分化中起關(guān)鍵作用, RET基因突變后let-7 miRNA表達(dá)的降低是細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榘┘?xì)胞的重要環(huán)節(jié)[6]。本研究結(jié)果顯示, 甲狀腺癌組織中的平均let-7 miRNA表達(dá)為(0.71±0.19), 顯著低于甲狀腺癌旁組織的(1.35±0.32), 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=8.769, P<0.05)。表明let-7 miRNA 在甲狀腺癌發(fā)生中具有重要意義, let-7 miRNA可成為甲狀腺癌新的基因診斷標(biāo)記物以及基因治療靶點(diǎn)[7]。換言之, let-7 miRNA是存在于甲狀腺細(xì)胞中的重要的抑癌基因, 在正常甲狀腺組織中表達(dá),在甲狀腺癌組織中表達(dá)下降[8]。目前為止有關(guān)let-7 miRNA在甲狀腺癌乃至于其他腫瘤中作用的研究仍然處于基礎(chǔ)研究層面, 鑒于miRNA相對(duì)于以往的腫瘤標(biāo)志物有上述諸多優(yōu)勢(shì), 并且出于對(duì)let-7 miRNA在甲狀腺癌的診斷以及治療方面有巨大潛力的認(rèn)識(shí), 作者認(rèn)為let-7 miRNA很可能成為新的甲狀腺癌標(biāo)志物和新的治療靶點(diǎn)。

        [1] 閆慧嫻, 谷偉軍, 呂朝暉, 等.結(jié)節(jié)大小與甲狀腺癌風(fēng)險(xiǎn)的臨床研究.中華內(nèi)分泌代謝雜志, 2015, 31(1):10-13.

        [2] 胡早秀, 趙永和, 陳亞娟.乳腺癌再發(fā)甲狀腺癌與單發(fā)甲狀腺癌ER表達(dá)的研究.診斷病理學(xué)雜志, 2016, 23(2):124-126.

        [3] 霍美蓉, 劉欣.甲狀腺癌分子診斷標(biāo)志物的研究進(jìn)展.醫(yī)學(xué)與哲學(xué), 2017, 38(12):67-71.

        [4] 劉文靜.以PGC為靶標(biāo)的leT-7miRNA血清表達(dá)與胃癌及其癌前疾病的關(guān)系.中國(guó)醫(yī)科大學(xué), 2014.

        [5] 陳烈鉗, 邱明寧, 譚國(guó)斌,等.MicroRNA let-7家族與腫瘤的研究進(jìn)展.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué), 2015, 23(4):571-575.

        [6] 葉蕾, 苗立云.MicroRNA let-7與肺癌的研究進(jìn)展及展望.中華肺部疾病雜志:電子版, 2015, 8(2):92-94.

        [7] 陳方園, 陳清勇.MicroRNA let-7與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展.醫(yī)學(xué)綜述, 2011, 17(12):1797-1800.

        [8] 顧超.MiRNALet-7在氡致大鼠肺損傷中的表達(dá)改變.蘇州大學(xué), 2014.

        10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.19.020

        2017-08-09]

        150030 黑龍江省醫(yī)院內(nèi)分泌科

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