石瑜 朱雅寧 袁雪濤（天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心300402）

畜禽衣原體病垂直傳播阻斷技術(shù)示范應(yīng)用

石瑜 朱雅寧 袁雪濤（天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心300402）

鑒于天津地區(qū)畜禽衣原體病已廣泛存在，給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失，為有效防控衣原體病的發(fā)生，我們引進(jìn)新技術(shù)對(duì)衣原體從垂直傳播途徑上進(jìn)行阻斷，從而降低發(fā)病率，減少死淘率。

衣原體病;藥物阻斷;示范應(yīng)用

衣原體（Chlamydia）是感染人和多種畜禽的病原體,現(xiàn)已遍布世界各地,主要引起豬、牛流產(chǎn)和禽的產(chǎn)蛋下降,是一種接觸性傳染病。本研究采取藥物阻斷技術(shù),阻斷種公畜禽精液衣原體傳播技術(shù),從而有效防控衣原體病的發(fā)生,降低發(fā)病率,死淘率,取得良好的經(jīng)濟(jì)效益。

引進(jìn)中國農(nóng)業(yè)大學(xué)提供的 “畜禽衣原體綜合防治技術(shù)與應(yīng)用研究”項(xiàng)目中的衣原體垂直傳播阻斷技術(shù)在天津市進(jìn)行技術(shù)轉(zhuǎn)化,為衣原體的防治提供新的技術(shù)途徑,對(duì)畜禽衣原體從垂直傳播途徑上進(jìn)行阻斷,從而有效防控畜禽衣原體的發(fā)生,降低養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)損失和公共衛(wèi)生危害。

1 藥物阻斷技術(shù)

1.1 材料

1.1.1 樣品來源及種類

（1） 禽樣品

選取天津市3個(gè)區(qū)縣3個(gè)養(yǎng)殖場,每場采集100枚種蛋,阻斷技術(shù)應(yīng)用前、后各采集一次,共計(jì)采集樣本600份,具體信息見表1。

表1 禽場采樣信息表

（2）豬、牛樣品

選取天津市5個(gè)區(qū)縣5個(gè)養(yǎng)殖場（其中豬場2個(gè),牛場3個(gè)）,每場采集新生犢牛血清樣本50份、仔豬血清樣本100份,阻斷技術(shù)應(yīng)用前、后各采集一次,共計(jì)采集樣本700份,具體信息見表2。

1.1.2 試劑

表2 豬、牛養(yǎng)殖場采樣信息表

衣原體間接血凝 (IHA)試驗(yàn)試劑,由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所提供,抗原批號(hào)130524,稀釋液130524,陽性血清130403,陰性血清130524。

1.2 阻斷方法

1.2.1 雞胚藥物阻斷技術(shù)

（1） 藥物

鹽酸強(qiáng)力霉素和鹽酸環(huán)丙沙星原料藥：購自天津恒基利得科技發(fā)展有限公司,批號(hào)分別為20130603,20130518。

（2）藥物的配制

鹽酸強(qiáng)力霉素：稱取2mg強(qiáng)力霉素,加入2ml滅菌蒸餾水, 配成1mg/ml的原液 (即1000μg/ml)。

鹽酸環(huán)丙沙星注射液：稱取2.5mg,加入2.5ml蒸餾水,配成 lmg/ml的原液 (即1000μg/ml)。以上藥物均用0.22μm的針頭濾器過濾除菌,置于-20℃冰箱保存。

（3）接種劑量和方法

接種劑量分別為：鹽酸強(qiáng)力霉素：100.0μg/枚,鹽酸環(huán)丙沙星：100.0μg/枚,接種7～8d雞胚的卵黃囊腔,0.2ml胚（50ml卵黃液/枚）,石蠟封口,在37～38℃孵育。接種后每天進(jìn)行燈檢,直到雞胚孵化,觀察雞胚發(fā)育特點(diǎn)和每100枚種蛋的孵化率以及健康雛雞的數(shù)量。

1.2.2 精液藥物阻斷技術(shù)

（1） 藥物

注射用乳糖酸紅霉素 (0.3g,30萬單位),購自哈藥集團(tuán)制藥總廠,批號(hào)20130219。

（2）藥物的配制

乳糖酸紅霉素針劑的配制：加滅菌注射用水10ml至0.5g乳糖酸紅霉素粉針瓶,用力震搖至溶解。然后加生理鹽水稀釋,紅霉素濃度在1～5%以內(nèi)。

（3）精液阻斷方法

精液加入生理鹽水進(jìn)行1：1稀釋,每0.25ml精液加入0.25ml已配制好的藥物溶液,混勻后,分別對(duì)待配種的母畜進(jìn)行人工授精。

1.3 檢測方法

間接血凝 (IHA)試驗(yàn),IHA凍干衣原體抗原、標(biāo)準(zhǔn)陽性和陰性血清均由蘭州獸醫(yī)研究所提供。

（1） 每孔加入75μl稀釋液。

（2）在第一孔加入25μl被檢血清,4倍遞增稀釋3孔（1：4～1：16）, 第3孔棄去25μl。 同一板上同時(shí)設(shè)陽性、 陰性和空白對(duì)照各2孔。

（3）每孔加入稀釋的抗原 25μl,37℃作用2h后判定結(jié)果。

判定標(biāo)準(zhǔn)：在對(duì)照孔成立的條件下,觀察各待檢血清孔,被檢血清1：16孔為++及以上凝集者為陽性,1：4孔為++及以下者為陰性。

2 示范應(yīng)用

將藥物阻斷方法應(yīng)用于全市3個(gè)種雞場、3個(gè)奶牛場和2個(gè)豬場,使用IHA方法對(duì)未應(yīng)用藥物阻斷技術(shù)和應(yīng)用藥物阻斷技術(shù)種蛋的孵化率和血清陽性率進(jìn)行比較,結(jié)果顯示,應(yīng)用該阻斷技術(shù)后種蛋的孵化率明顯提高,仔豬和犢牛的血清陽性率明顯降低,具體結(jié)果見表3和表4。

3 討論和結(jié)論

將藥物阻斷方法應(yīng)用于天津市的8個(gè)畜禽養(yǎng)殖場,對(duì)未應(yīng)用和應(yīng)用該技術(shù)后衣原體病的檢測結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果顯示,3個(gè)示范禽場未應(yīng)用藥物阻斷技術(shù)時(shí)種蛋的孵化率平均為92%,應(yīng)用阻斷技術(shù)后種蛋的孵化率平均為95%,平均提高3%；5個(gè)家畜示范場應(yīng)用該技術(shù)后,配種成功率明顯提高,懷孕母畜的流產(chǎn)率大大降低。此外,未應(yīng)用藥物阻斷技術(shù)的仔畜的血清樣本抗體陽性檢出率為9.14%,應(yīng)用該技術(shù)后的仔畜血清樣本抗體陽性率為6.57%,下降2.57%。仔豬和犢牛的血清抗體陽性率有明顯降低,健康狀況有效提高。

由于藥物阻斷技術(shù)對(duì)操作人員技術(shù)熟練程度要求較高,雞胚接種操作時(shí)會(huì)增加種蛋破損,造成一定的經(jīng)濟(jì)損失；此外,如果連續(xù)進(jìn)行藥物阻斷,衣原體產(chǎn)生的耐藥性可能會(huì)影響阻斷效果,雖然藥物阻斷在禽衣原體的垂直傳播上是安全有效的,綜合考慮其風(fēng)險(xiǎn)因素,不適合在種禽養(yǎng)殖場進(jìn)行大面積推廣。

表3 種蛋的孵化率比較

表4 犢牛和仔豬血清陽性檢出率比較