王 歡，梁沛余，劉金鋒，吳 穹，4※

(1.青海大學醫(yī)學院，青海 西寧 810001；2.蘇州大學研究生院，江蘇 蘇州 215000； 3.武漢大學研究生院，湖北 武漢 430071；4.西北農(nóng)林科技大學，陜西 楊凌 712100)

藏藥尼阿措水提取物對X射線輻射小鼠的保護作用*

王 歡1，2，梁沛余1，3，劉金鋒1，吳 穹1，4※

(1.青海大學醫(yī)學院，青海 西寧 810001；2.蘇州大學研究生院，江蘇 蘇州 215000； 3.武漢大學研究生院，湖北 武漢 430071；4.西北農(nóng)林科技大學，陜西 楊凌 712100)

目的探討藏藥尼阿措水提取物對X射線輻射損傷小鼠的保護作用。方法藥物預處理14 d后，小鼠接受5 Gy的X射線一次性的全身均勻照射(造模)，觀測各組小鼠外周血紅細胞、白細胞、血小板計數(shù)，測定肝組織超氧化物歧化酶活力、丙二醛含量，并計算胸腺、脾臟臟器指數(shù)。結(jié)果藏藥尼阿措水提取物可顯著回升輻射小鼠血象(P<0.05)，增強肝組織超氧化物歧化酶活力(P<0.05)，降低丙二醛含量(P<0.05)，升高胸腺、脾臟臟器指數(shù)(P<0.05)，并以中劑量抗輻射效果最佳(P<0.05)。結(jié)論藏藥尼阿措水提取物對X射線輻射損傷小鼠具有一定的保護作用。其機制可能與提高機體造血、免疫等功能關系密切。

藏藥 尼阿措 X-射線 抗輻射

輻射對人體的損傷主要體現(xiàn)在免疫系統(tǒng)、造血系統(tǒng)[1]，在治療方面，價格昂貴的造血因子、細胞因子及各種含-SH基的化合物往往是人們的首選，但療效尚未認可[2]。天然產(chǎn)物含有許多具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化和清除自由基等作用的化學成分，可減緩輻射對人體的損傷，且具有毒副作用小的優(yōu)點，已成為輻射防護藥物研究的熱點。藏藥尼阿措即鮮卑花，亦稱柳茶，屬薔薇科植物，主要分布于甘肅、青海等地，生長在3 000～4 000 m海撥的灌木叢中或沙灘上，其以窄葉鮮卑花嫩枝及葉入藥，是藏族民間傳統(tǒng)用藥之一。初步研究證實，尼阿措具有抗氧化、抗腫瘤、增強免疫力、調(diào)節(jié)脂代謝等作用[3]，以此推測其與輻射防護作用密切相關。故本研究擬對尼阿措的抗輻射作用予以初步探討，為研發(fā)抗輻射藏藥提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材與試劑

尼阿措(由蘭州大學藥學院生藥學研究所贈送，經(jīng)青海大學醫(yī)學院藥理學教研室鑒定)；氨磷汀(批號：130306，天津中瑞藥業(yè)股份有限公司)；超氧化物歧化酶試劑盒(SOD，批號：20140414，南京建成生物工程研究所)；丙二醛試劑盒(MDA，批號：20140412，南京建成生物工程研究所)；血液細胞分析儀用溶血劑(批號：2013111101)；血液細胞分析儀用稀釋液(批號：2013110701，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)。

1.1.2 儀器

醫(yī)用電子直線加速器(青海大學附屬醫(yī)院)；恒溫振蕩器(SHZ-82國華企業(yè))；大容量低速離心機(上海安亭科學儀器廠)；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；DK-2000ⅢL型電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)；RT-2100C酶標儀(深圳雷杜生命科學股份有限公司)；臺式煎藥機(北京東華原醫(yī)療設備有限責任公司)；800克搖擺式高速中藥粉碎機(溫嶺市林大機械有限公司)；XW-80A渦旋混合器(上海醫(yī)科大學儀器廠)；BC-2300全自動血細胞分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)；BT224S電子天平(賽多利斯科學儀器有限公司)；UV-2550型紫外分光光度儀(美國LabTech公司)。

1.1.3 動物

清潔級雄性昆明種小鼠120只，體重(25±2)g，購自蘭州大學實驗中心，動物合格證號：SCXK(甘)2015-0004。動物于實驗前適應環(huán)境1周，自由攝食、飲水，自然光照，室溫24 ℃±2 ℃。

1.2 方法

1.2.1 水提物制備

1.2.2 分組

120只小鼠隨機等量分成6組：空白組，模型組，陽性對照組，尼阿措高、中、低劑量組。

1.2.3 給藥

空白組和模型組小鼠分別灌胃0.5 mL的純化水；尼阿措水提取物高劑量組、中劑量組、低劑量組小鼠分別灌胃高、中、低濃度尼阿措水溶液(即將制備好的尼阿措浸膏溶于純化水中，相當于原藥材12、8、4g/kg·BW[4])，連續(xù)灌胃14 d；陽性對照組小鼠于照射前30 min腹腔注射150 mg/kg的氨磷汀溶液。

1.2.4 造模

將每只小鼠單獨放在自制模具中，用電子直線加速器X-Ray行一次性全身照射，照射劑量5 Gy，吸收劑量率300 cGy/min，照射時間100 s，視野40 cm×40 cm，源皮距100 cm。

1.2.5 指標測定

1.2.5.1 外周血象測定

輻射后第5 d，眼球取血于有抗凝劑的10 mL離心管中，及時加入稀釋液，用BC-2300全自動血細胞分析儀計數(shù)紅細胞、白細胞、血小板。

1.2.5.2 SOD活力、MDA含量測定

輻射后第5 d，頸椎脫臼處死，立即解剖取肝臟，稱重，精密稱取0.3 g肝組織，用電動玻璃勻漿機制備勻漿(10%)，離心，取上清夜，SOD、MDA檢測參照試劑盒說明書。

1.2.5.3 臟器指數(shù)測定

輻射后第5 d稱重，頸椎脫臼處死，立即解剖取胸腺、脾臟，除去血漬，濾紙吸干，用分析天平稱重。計算相應臟器指數(shù)：臟器質(zhì)量(mg)/動物體重(g)。

1.2.6 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 尼阿措對X線輻射小鼠外周血象的影響

如表1所示，尼阿措高、中、低劑量組的紅細胞、白細胞和血小板計數(shù)均顯著高于模型組(均P<0.05)，且以中劑量效果最好(P<0.05)。

Influence of Niacuo on peripheral hemogram in mice injured by radiation(±s)

#：與空白組相比P<0.05；＊：與模型組相比P<0.05；*：與陽性對照相比P<0.05；▲：與低劑量組相比P<0.05；■：與中劑量組相比P<0.05.

2.2 尼阿措對X線輻射小鼠肝組織SOD活力和MDA含量的影響

如表2所示，尼阿措高、中、低劑量均可顯著提高輻射小鼠肝臟SOD活力(P<0.05)，減少MDA含量(P<0.05)，且以中劑量效果最好(P<0.05)。

Table 2 Influence of Niacuo on viability of SOD and the levels of MDA in mice injured by radiation(±s)

#：與空白組相比P<0.05；＊：與模型組相比P<0.05；*：與陽性對照相比P<0.05；▲：與低劑量組相比P<0.05；■：與中劑量組相比P<0.05.

2.3 尼阿措對X線輻射小鼠免疫臟器指數(shù)的影響

如表3所示，尼阿措高、中、低劑量組的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均高于模型組(均P<0.05)且以中劑量效果最好(P<0.05)。

Table 3 Influence of Niacuo on thymus and spleen indexes in mice injured by radiation(±s)

#：與空白組相比P<0.05；＊：與模型組相比P<0.05；*：與陽性對照相比P<0.05；▲：與低劑量組相比P<0.05；■：與中劑量組相比P<0.05.

3 討論

本研究通過觀察藏藥尼阿措水提取物對X線輻射小鼠的外周血象、免疫臟器指數(shù)和SOD活力及MDA含量的影響，探究藏藥尼阿措水提取物對X射線輻射損傷小鼠的保護作用。

X線輻射會對機體的造血系統(tǒng)產(chǎn)生影響，射線作用于骨髓造血干細胞，使得細胞增殖能力下降，致造血功能受阻，表現(xiàn)為外周血象降低，而動物實驗顯示：藏藥尼阿措高、中、低劑量組較模型組、對照組，紅細胞、白細胞和血小板的數(shù)量增加，提示藏藥尼阿措水提取物對造血系統(tǒng)有一定的保護作用。

自由基是機體生命活動中各種生化反應的中間產(chǎn)物，過多的自由基會使細胞膜上的脂質(zhì)過氧化，破壞細胞膜的脂質(zhì)雙分子層，還會損傷DNA和蛋白質(zhì)[5]。輻射能使機體產(chǎn)生大量的氧自由基，自由基作為生物信號分子，誘導相關基因表達，并產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化和生物級聯(lián)反應，最終造成生物結(jié)果的改變和細胞功能的缺失[6-8]。機體有一套完整抗氧化酶系，包括內(nèi)源性酶：SOD、GSH-PX、CAT等，這些酶相互協(xié)助，清除體內(nèi)過剩的自由基[9-10]，對延緩人體衰老進程和預防各種疾病的發(fā)生有著重要作用。SOD作為細胞內(nèi)一種重要的抗氧化物，其活性的高低間接地反映機體清除氧自由基的能力，藏藥尼阿措可顯著提升輻射小鼠SOD的活力、降低MDA的含量。由此可見，藏藥尼阿措具有抗氧化功能。

脾臟和胸腺是機體兩個重要的免疫器官，因此脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)廣泛被用于檢測免疫功能指標。從實驗數(shù)據(jù)可知，藏藥尼阿措高、中、低劑量組的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均高于模型組且中劑量效果最好，提示藏藥尼阿措能夠保護胸腺和脾臟。也就是說，藏藥尼阿措對免疫系統(tǒng)有一定的保護作用，但是細胞水平的機制尚不清楚，需進一步研究。

綜上所述，藏藥尼阿措水提取物對X線輻射小鼠的造血系統(tǒng)有一定保護作用，能保護輻射小鼠的內(nèi)臟器官，提高機體免疫力。

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ProtectiveeffectsofTibetanMedicinalherbNIACUOonX-rayradiationinjuredmice*

WANG huan1，2，LIANG Pei-yu1，3，LIU Jin-feng1，WU qiong1※

(1.Qinghai University Medical Collage，Qinghai，Xining，810001； 2.Graduate School of Suzhou University，Suzhou，Jiangsu，215000； 3.Graduate School of Wuhan University，Wuhan，Hubei，430071；4.Northwest A&F University，712100)

ObjectiveTo explore the protective effects of the extract of Tibetan medicinal herb NIACUO on X-ray radiation injured mice.MethodsAfter 14 days of drugs pretreatment，the groups of mice，including the positive control group，were

5 Gy of X-ray radiation.Red blood cell count，white blood cell count，platelet count，viability of SOD，levels of MDA and the indexes of thymus and spleen were observed at 5d after radiation.ResultsThe extract of Tibetan medicinal herb NIACUO can notably increase the quantity of hemogram(P<0.05)，viability of SOD(P<0.05)，thymus and spleen indexes(P<0.05)，and decreased levels of MDA(P<0.05).ConclusionThe results show that the extract of Tibetan medicinal herb NIACUO against mice injured by X-ray radiation has a protective effect in some degree.The mechanism is closely related to improving body，s functions involving hemopoiesis and immunity.

Tibetan medicinal herb NIACUO X-ray Anti-radiation

R96

A

10.13452/j.cnki.jqmc.2017.03.009

2017-4-22

*：教育部“春暉計劃”合作科研項目(No.Z2012079)；青海大學大學生科技創(chuàng)新基金項目(2014-QX-02) 王歡(1992～)，男，漢族，江蘇籍，在讀碩士 ※：通訊作者，副教授，在讀博士，E-mail：13997126828@163.com