韓繼新，李占軍，曹天澤，徐紅穎

（1.內(nèi)蒙古化工職業(yè)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010070；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010010）

液/質(zhì)-質(zhì)色譜法測定蔬菜中氟蟲腈殘留含量

韓繼新1，李占軍1，曹天澤2，*，徐紅穎1

（1.內(nèi)蒙古化工職業(yè)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010070；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010010）

對樣品進(jìn)行氟蟲腈的含量測定。采用液/質(zhì)-質(zhì)法測定氟蟲腈含量，采用石墨化碳作為吸附劑，多壁碳納米管凈化的方式。此方法具有靈敏度高、重復(fù)性好、分離效果徹底完全，可操作性好等優(yōu)點(diǎn)，適合蔬菜中氟蟲腈殘留含量的測定。

液質(zhì)-質(zhì)色譜法；氟蟲腈；多壁碳納米管；蔬菜

Abstract：The fluorine content determination of worm nitrile for samples.LC/MS-MS（liquid mass spectrometry-mass spectrometry）method was used to determine fluorine content of nitrile，used the graphitized carbon as an adsorbent，purification of multi-walled carbon nanotubes.This method has high sensitivity，good repeatability，thoroughly completely separation effect，as well as good operability，suitable for the determination of fluorine worm cyanide residue content in vegetables.

Key words：LC/MS-MS；fipronil；multi-walled carbon nanotube；vegetables

氟蟲腈是苯基吡啶類新型高活性殺蟲劑，上世紀(jì)90年代后期在我國大范圍推廣及使用，用于防治多種農(nóng)業(yè)害蟲。由于氟蟲腈對甲克類生物和蜜蜂具有高風(fēng)險(xiǎn)，在水和土壤中降解慢等原因，我國于2009年開始對該農(nóng)藥禁用[1-4]。隨著人們生活水平和食品安全意識的提高，氟蟲腈等農(nóng)藥在蔬菜水果中的殘留引起了人們的高度重視。

目前，氟蟲腈最普遍的檢測方法有超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[3]、分散液液微萃取-氣相色譜質(zhì)譜法[4]、氣相色譜-電子轟擊質(zhì)譜法[5]、氣相-電子捕獲法[6]、高壓液相色譜法[7]、氣相色譜法[8]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[9]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[10]、UPLC-MS/MS（超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜，Ultra high performance liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry）[11]。隨著LC/MS-MS（液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜，Liquid Chromatography/mass spectrometry-mass spectrometry）聯(lián)用檢測技術(shù)興起，由于其靈敏度高、樣品用量少、分析速度快等優(yōu)點(diǎn)，此方法也逐漸應(yīng)用于農(nóng)藥殘留的檢測。本文采用了LC/MS-MS方法測定蔬菜中的氟蟲腈殘留含量，參考文獻(xiàn)[12-13]，基于 QuEChERS（Quick，Easy，Cheap，Effective，Rugged，Safe的縮寫，一種用于農(nóng)產(chǎn)品檢測的快速樣品前處理技術(shù)）萃取的基礎(chǔ)上，加以了改進(jìn)，采用石墨化碳和PSA（N-丙基乙二胺固相吸附劑，primary secondary amine）為吸附劑，多壁碳納米管凈化的方式。QuEChERS的快速富集和多壁碳納米管的徹底凈化，以及LC/MS-MS的高分辨能力相結(jié)合，具有靈敏度高、重復(fù)性好、分離效果徹底完全，可操作性好等優(yōu)點(diǎn)，適合蔬菜中氟蟲腈殘留含量的測定。

1 儀器與試劑

1.1 樣品及其來源

芹菜、菠菜、韭菜、白菜、油麥菜、芥菜：呼和浩特東瓦窯菜市場。

1.2 儀器

XEVO TQS-Smicro相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀：沃特世科技（上海）有限公司；TGL-16G高速離心機(jī)：北京佳緣興業(yè)科技有限公司；JJ-2B搗碎機(jī)：金壇市金南儀器制造有限公司；EL104電子天平：梅特勒-托利多儀器有限公司；HH-4恒溫水浴鍋（50℃～80℃）：金壇市華城潤華實(shí)驗(yàn)儀器廠；多炭壁納米管；氮吹儀（型號為ND2001）：杭州瑞誠儀器有限公司。

1.3 試劑

乙腈（光譜純）：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；甲醇、甲酸、乙酸胺、N-丙基乙二胺、石墨化碳、四氯化碳、丙酮、氯化鈉：天津大茂化學(xué)試劑廠；試驗(yàn)用水均為超純水；氟蟲腈標(biāo)準(zhǔn)品：農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所。

2 方法

2.1 色譜條件

2.1.1 液相色譜條件

色譜柱ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；柱溫 40℃；進(jìn)樣體積 1.0 μL；流速：0.3 mL/min。流動相A甲醇，流動相B（0.1%甲酸+0.1%乙酸銨的水溶液），梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序Table 1 Gradient elution program

2.1.2 質(zhì)譜條件

電離模式：ESI負(fù)離子；毛細(xì)管電壓：2.0 KV；錐孔電壓：20.0 V；離子源溫度：140℃；脫溶劑溫度：550℃；脫溶劑氣體流速：650 L/h，錐孔氣體流速：50 L/h。離子對條件見表2。

表2 離子對條件Table 2 Ion pair condition

2.2 溶液配制及其樣品的預(yù)處理

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精確稱取氟蟲腈標(biāo)準(zhǔn)品0.100 0 g適量，用甲醇溶解并定容到100 mL，配置成濃度為10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.2.2 樣品預(yù)處理

取樣品中可食用部分，縮分，切碎，混勻，放入粉碎機(jī)中粉碎，制成溶液，于-20℃冰箱中保存。

2.2.2.1 氟蟲腈的提取

稱取處理過的樣品20 g于80 mL具塞離心管中，加入40 mL乙腈，用均質(zhì)器以12 000 r/min，均質(zhì)2 min，加入5 g氯化鈉，振蕩，離心機(jī)上以5 000 r/min離心5 min，取上層清液20 mL于100 mL燒杯中，加入100 mg PSA（N-丙基乙二胺）和75 mg石墨化碳作為吸附劑，渦旋5 min，于5 000 r/min離心5 min。取上層清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至1 mL，于離心式管中，加入5 mL純化水，再加入 30 μL 四氯化碳，振蕩 30 s，5 000 r/min 離心使之分層，用注射器吸取底部有機(jī)溶液于1.5 mL離心管中，60℃的水浴條件下用氮?dú)獯抵两?，再加入乙腈?fù)溶，待凈化。

2.2.2.2 氟蟲腈的凈化

將提取好的樣品中加入2 mL丙酮，溶解后，再加入20 mg多壁炭納米管凈化，蓋上蓋子振蕩5 min，將上層清液經(jīng)過0.2 μm濾膜，待進(jìn)樣。

3 結(jié)果與討論

3.1 提取液的選擇

比較甲醇、丙酮和乙腈的提取效果，結(jié)果乙腈提取的效果最好。甲醇的提取效果雖然能達(dá)到要求，但是不能使有機(jī)相和水相有效的分離；丙酮提取效果也可以，但是必須通過二氯甲烷等溶劑萃取，增加了提取步驟；乙腈極性大，穿透力強(qiáng)，并且可以通過鹽析使有機(jī)相和水相完全分離，更容易通過后續(xù)加入吸附劑除去基質(zhì)物質(zhì)的干擾。

3.2 吸附劑的選擇

吸附劑選擇石墨化碳和PSA，加入后可更加有效地去除基質(zhì)中的干擾物質(zhì)對待測物出峰的影響，同時可以減少雜質(zhì)對儀器和色譜柱的損耗。

3.3 凈化試劑的選擇

凈化時選擇多壁碳納米管凈化的方式，因其能夠有效地去除色素，而且回收率在96.32%～99.35%之間。比較了加入20、25、30、35 mg，回收率由高到低的順序?yàn)?25 mg＞30 mg＞20 mg＞35 mg，考慮到節(jié)約試劑的原則，選擇了加入25 mg。比較結(jié)果見表3。

3.4 線性關(guān)系

將氟蟲腈標(biāo)準(zhǔn)品溶液逐級稀釋成濃度為0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)使用液，對照 2.1色譜條件進(jìn)行測定，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1，其線性回歸方程為Y=14.632X+143.22，R為0.999 8。該測定條件下，氟蟲腈的標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖見圖2，保留時間為3.98 min。

表3 凈化試劑量的選擇Table 3 Selection of the quality of the purifying agent

圖1 氟蟲腈標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 The standard curve of fipronil

圖2 氟蟲腈色譜圖Fig.2 The chromatogram of fipronil

3.5 精密度

精密吸取氟蟲腈的使用液濃度為0.04、0.06、0.08 μg/mL分別進(jìn)樣5次，RSD分別為1.6%、2.1%、2.3%、3.2%、2.5%；2.1%、2.7%、1.4%、1.9%、3.0%；2.8%、3.1%、1.4%、2.9%、3.2%；1.2%、2.0%、1.5%、2.3%、3.2%，均小于5%，說明此方法的精密度好。

3.6 回收率

吸取一定體積 80、120、160 μL 的 10 μg/mL 的氟蟲腈標(biāo)準(zhǔn)溶液加入20 g樣品中，即添加的濃度點(diǎn)為0.004、0.008、0.012 mg/kg，分別加入到芹菜的樣品中，經(jīng)預(yù)處理按2.1色譜條件進(jìn)行測試，計(jì)算回收率，結(jié)果表明，不同加標(biāo)量的回收率均在96.67%～100.02%之間，RSD（n=3）均小于5.0%，滿足檢測的需要，表明本法準(zhǔn)確性好，回收率高?；厥章式Y(jié)果見表4。

表4 回收試驗(yàn)結(jié)果Table 4 Results of recovery rate

3.7 結(jié)果

將所有的樣品，按照試驗(yàn)條件分別配制供試溶液，按色譜條件分別進(jìn)樣、計(jì)算，結(jié)果表明，樣品中均未有氟蟲腈檢出。

4 結(jié)論

采用了LC/MS-MS方法測定蔬菜中的氟蟲腈殘留含量，基于QuEChERS萃取的基礎(chǔ)上，加以改進(jìn)，采用石墨化碳作為吸附劑，凈化時采用多壁碳納米管凈化的方式。結(jié)果QuEChERS的快速富集和多壁碳納米管的徹底凈化，以及LC/MS-MS的高分辨能力相結(jié)合，具有靈敏度高、重復(fù)性好、分離效果徹底完全，可操作性好等優(yōu)點(diǎn)，適合蔬菜中氟蟲腈殘留含量的測定。

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Determination of Fipronil Residues in Vegetables by LC/MS-MS

HAN Ji-xin1，LI Zhan-jun1，CAO Tian-ze2，*，XU Hong-ying1
（1.Inner Mongolia Vocational College of Chemical Engineering，Hohhot 010070，Inner Mongolia，China；2.The Inner Mongolia People's Hospital，Hohhot 010010，Inner Mongolia，China）

2017-03-07

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.19.032

韓繼新（1983—），女（蒙古），講師，碩士，研究方向：天然藥物化學(xué)與功能食品研究。

*通信作者：曹天澤（1973—），副主任醫(yī)師，研究方向：抗腫瘤與功能食品研究。