代一航 趙崇軍 田敬歡 倪媛媛 李二文 楊冉冉 馮丹 劉雯雪 王昭懿 喬藝涵 馬志強 林瑞超 鄒迪新

·論著·

香加皮水提取物對斑馬魚幼魚肝臟毒性的初步研究

代一航 趙崇軍 田敬歡 倪媛媛 李二文 楊冉冉 馮丹 劉雯雪 王昭懿 喬藝涵 馬志強 林瑞超 鄒迪新

目的 研究香加皮水提取物對斑馬魚幼魚肝臟的毒性作用。方法 將受精后發(fā)育4天的斑馬魚幼魚暴露于不同濃度的香加皮水提取物中,24小時后,統(tǒng)計幼魚的死亡率,計算量毒曲線;選取低于LC10的三個藥物暴露組和空白組,以幼魚肝臟形態(tài)和面積變化、轉(zhuǎn)基因幼魚肝臟熒光面積和熒光強度以及幼魚肝臟細胞凋亡、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽過氧化酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(aspartic transaminase,AST)活性為毒性評價指標。結(jié)果 香加皮水提取物對幼魚的量-毒回歸曲線y=-1.0843+0.0014x(R2=0.9524,r=0.97590,P＜0.001),LC10為845.9286μg/mL;與空白組相比,幼魚肝臟形態(tài)異常、透明度降低,肝臟面積隨藥物暴露濃度增加而劑量依賴性增加(P＜0.05);轉(zhuǎn)基因幼魚肝臟熒光面積隨暴露濃度增加而增大,但在高濃度組減小,熒光強度隨暴露濃度的增加而減小(P＜0.05);高濃度暴露組幼魚肝臟區(qū)域顯示了細胞凋亡;藥物暴露組幼魚SOD、GSH-Px活力顯著下降,ALT、AST活力顯著上升(P＜0.05)。結(jié)論 香加皮水提取物對斑馬魚幼魚的肝臟毒性可能是通過破壞其體內(nèi)氧化應(yīng)激平衡,進而誘導肝臟細胞凋亡實現(xiàn)的。

香加皮; 水提取物; 斑馬魚模型; 肝臟毒性

香加皮為蘿摩科植物杠柳Periploca sepium Bge的干燥根皮,始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,歸為下品,其性溫,味辛苦,有毒,歸肝腎心經(jīng);具有利水消腫、祛風濕、強筋骨之功效;用于治療心悸氣短、風寒濕痹、腰膝酸軟等癥[1]。現(xiàn)代藥物化學和藥理學研究發(fā)現(xiàn),香加皮中含有多種化學成分,包括C21甾體類、三萜類、醛類等,具有強心、抗腫瘤、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等多種作用[2-3]。2015版《中華人民共和國藥典》收載含有香加皮的成方制劑有8種,其中口服藥物有3種,主要用于強心、消腫;外用藥物有5種,主要用于祛風除濕、活血止痛。但在臨床運用時發(fā)現(xiàn)其具有一定的毒性,嚴重限制了它的廣泛應(yīng)用,并且現(xiàn)代研究對其毒性靶器官和毒性成分的研究較少,缺乏相關(guān)毒性評價的數(shù)據(jù)[4]。目前文獻報道的主要為其含有的杠柳毒苷和杠柳次苷等強心苷類成分所產(chǎn)生的心臟毒性作用[5],但香加皮水提取物的肝臟毒性未見有詳細明確的報道,其毒性成分的種類尚不明確,毒性作用與目前較為認同的功效與毒性成分——杠柳毒苷是否具有相關(guān)性,以及產(chǎn)生肝毒性時藥物在體內(nèi)的吸收、分布、代謝、排泄過程和其肝臟損傷的機制,有待進一步深入研究。

斑馬魚作為近年來新穎的模式生物,在胚胎發(fā)育生物學、環(huán)境毒理學等領(lǐng)域展現(xiàn)出獨特的優(yōu)勢[6]。至今,斑馬魚在藥物安全性評價中已有了較廣泛的應(yīng)用,從一般毒性評價到發(fā)育毒性、心臟毒性、肝臟毒性、神經(jīng)毒性、視覺系統(tǒng)毒性的評價,甚至到耳毒性、軟骨毒性、胃腸毒性評價[7]?？傊?斑馬魚模型彌補了體外細胞實驗缺少藥物代謝內(nèi)環(huán)境、體內(nèi)實驗周期長、成本資源較高的缺陷,成為體外細胞實驗和體內(nèi)動物實驗的橋梁,并且斑馬魚對藥物的毒性反應(yīng)與哺乳動物相似[8];因此,運用斑馬魚模型進行中藥毒性評價不失為一種新穎的評價方法。

本文選取斑馬魚為模型,探討香加皮水提取物對斑馬魚幼魚的肝臟毒性作用,以期為建立以斑馬魚為模型的毒性快速評價體系提供參考數(shù)據(jù),并為臨床安全用藥提供實驗數(shù)據(jù)和文獻參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 斑馬魚養(yǎng)殖與繁育 斑馬魚親本購于中國科學院武漢水生生物研究所,實驗所用野生(wildtype)AB系和肝臟熒光蛋白轉(zhuǎn)基因斑馬魚Tg(fabp10a：dsRed;ela31：EGFP)幼魚由本實驗室斑馬魚養(yǎng)殖系統(tǒng)繁育。斑馬魚的養(yǎng)殖繁育參照Zebrafish Book[9]。實驗的操作遵循OECD標準。養(yǎng)殖條件：水溫(28±0.5)℃,pH值7～7.2,電導率450～550μs/cm,黑暗與光照周期為10 h/14 h,成年斑馬魚每日喂食豐年蝦幼蟲3次。繁育：于暗周期開始時,選取成年斑馬魚雌魚和雄魚,按照1∶1的比例放入帶隔板的產(chǎn)卵缸中,暗周期結(jié)束后,將隔板抽出,打開光源,在光照的刺激下,雄魚開始追逐雌魚,雌魚開始產(chǎn)卵,待受精完成后,收集受精卵。在顯微鏡下將受精卵挑出并轉(zhuǎn)入含有適量胚胎培養(yǎng)水的無菌培養(yǎng)皿中,清洗數(shù)次,放入生化培養(yǎng)箱中孵育96小時,每24小時更換一次胚胎培養(yǎng)水。

1.1.2 試驗材料與儀器藥材 香加皮(安國圣山藥業(yè)有限公司)經(jīng)北京中醫(yī)藥大學劉春生教授鑒定為蘿藦科植物杠柳Periploca sepium Bge的干燥根皮。 試劑：NaCl、KCl、Na2HPO4、K2HPO4、MgSO4、NaHCO3(分析純,北京化工),CaCl2、吖啶橙(sigma)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽過氧化酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶 (alanine aminotransferase,AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(aspartic transaminase,ALT)、考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒：南京建成生物工程研究所。儀器：斑馬魚循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)(北京愛生科技公司);蔡司熒光顯微鏡(NIKON);1 mL、5 mL 移液器(eppendorf);恒溫培養(yǎng)箱 LRH-250Z(廣州瑞明儀器有限公司);DZF-6050B真空干燥箱(上海一恒科學儀器有限公司);R-1001-VN旋蒸儀(鄭州長城科工貿(mào)有限公司);15 cm玻璃培養(yǎng)皿(北京百諾威生物科技有限公司);PHS-3C酸度計(上海佑科,DDS-307);電導率儀(上海一恒科技有限公司),UV-2000紫外-可見分光光度計(尤尼柯上海儀器有限公司)。斑馬魚胚胎培養(yǎng)液：按照Zebrafish Book標準,配制每升含有 0.137 mol NaCl、5.4 mol KCl、0.25 mol Na2HPO4、0.44 mol K2HPO4、1.3 mol CaCl2、1.0 mol MgSO4、4.2 mol NaHCO3的水溶液。

1.2 香加皮水提取物藥液的配制

取香加皮飲片,粉碎后過40目篩,精密稱取50 g香加皮粉末,加入10倍量的蒸餾水回流提取2次,每次2小時,提取液抽濾后濃縮,減壓干燥,研磨均勻后干燥保存。精密稱取一定量的香加皮提取物粉末,溶于一定量的胚胎培養(yǎng)水中,超聲助溶30分鐘,根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果,配置成一定濃度的儲存液,實驗前使用胚胎培養(yǎng)水稀釋至所需濃度。

1.3 斑馬魚幼魚24小時急性毒性試驗

選取發(fā)育正常、無畸形的受精后4天(4 dpf)的AB系野生和轉(zhuǎn)基因斑馬魚幼魚,分別隨機放置于12孔細胞培養(yǎng)板中,每孔20條,并加入適量等體積胚胎培養(yǎng)水。

1.3.1 藥物暴露濃度的選取 根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果,設(shè)計不同暴露濃度的藥液,按照上述藥液的配置原則,配置成 700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500 μg/mL的藥液。

1.3.2 給藥方式 將裝有幼魚的12孔板中的培養(yǎng)水依次吸出,并依次加入不同濃度的藥液,每孔4 mL,每個濃度兩個復(fù)孔,空白對照組加入等體積的新鮮胚胎培養(yǎng)水。加蓋標記后,將孔板置于可控溫光照培養(yǎng)箱中(28.5℃)24小時(黑暗與光照時間比為5∶7),實驗重復(fù)三次。

1.3.3 實驗終點處理方法 在實驗終點,統(tǒng)計各個濃度組死亡的斑馬魚數(shù)目,并計算死亡率,運用統(tǒng)計軟件SAS 8.2計算藥物暴露濃度與死亡率相關(guān)性和線性回歸方程。

1.4 AB系野生斑馬魚幼魚肝臟形態(tài)表型觀察和肝臟面積測定

1.4.1 藥物暴露濃度選取和暴露處理選取 低于LC10的三個藥物濃度,分為高濃度組、中濃度組、低濃度組,并設(shè)置空白對照組,參照1.3.2項進行暴露處理。

1.4.2 表型觀察 藥物暴露結(jié)束后,去除藥液,使用胚胎培養(yǎng)水清洗幼魚3次后,將幼魚固定于涂布有3%的甲基纖維素凝膠的載玻片上,并擺放成側(cè)躺姿態(tài)(便于觀察幼魚肝臟的形態(tài)特征),在顯微鏡下依次觀察各個藥物暴露組和空白組中幼魚的肝臟表型,并在相同光學條件下進行拍照。使用顯微鏡軟件(ZEN lite)統(tǒng)計各組幼魚的肝臟面積。

1.5 肝臟轉(zhuǎn)基因斑馬魚幼魚肝臟形態(tài)學觀察、熒光面積和平均熒光強度的測定

1.5.1 藥物暴露濃度選取和暴露處理藥物 暴露濃度選取和暴露處理同1.4.1項。

1.5.2 表型觀察 表型觀察的處理方法同1.4.2項,并使用顯微鏡軟件(ZEN lite)統(tǒng)計各組幼魚肝臟熒光面積和肝臟平均熒光強度。

1.6 AB系野生斑馬魚幼魚肝臟吖啶橙染色

1.6.1 吖啶橙染色液的配置方法 參照文獻[10]的配置方法,精密稱取一定量的吖啶橙粉末,放入棕色容量瓶中,加入斑馬魚胚胎培養(yǎng)水,配置成2.5μg/mL的染色液,4℃環(huán)境避光保存。

1.6.2 細胞凋亡評價 按照上述1.4.1項方法進行藥物暴露,在實驗終點,用胚胎培養(yǎng)水、PBS依次清洗各個濃度藥物暴露組幼魚三次,去除PBS后每孔加入2 mL的吖啶橙染液,28℃避光處理20分鐘進行染色。隨后加入PBS反復(fù)清洗幼魚3次,將幼魚側(cè)位放置于含有3%甲基纖維素的載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察斑馬魚肝臟細胞凋亡的情況。

1.7 斑馬魚幼魚SOD、GSH-Px、AST和ALT活力測定

按照上述1.4.1項下方法進行藥物暴露,在實驗終點,將12孔板中的斑馬魚幼魚用斑馬魚胚胎培養(yǎng)水清洗3次,轉(zhuǎn)入1.5 mL預(yù)先稱重的離心管中,每個濃度80條幼魚,PBS清洗3次,移除PBS,迅速稱重并冷凍(-20℃)處理,隨后按照試劑盒的相關(guān)步驟進行酶活性測定。

1.8 統(tǒng)計學處理

使用統(tǒng)計分析軟件SAS 8.2進行數(shù)據(jù)分析,所有計量資料均采用均數(shù)±標準差(x±s)形式,各組正態(tài)性和方差齊性檢驗結(jié)果顯示符合正態(tài)分布且方差齊,因此運用單因素方差分析(One-way ANOVA)和LSD法進行組間多重比較,P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 斑馬魚幼魚24小時急性毒性實驗結(jié)果

經(jīng)SAS 8.2統(tǒng)計軟件的相關(guān)回歸分析,在一定范圍內(nèi),藥液濃度與幼魚的死亡率成正相關(guān)關(guān)系,回歸方程為y=-1.0843+0.0014x(R2=0.9524,P＜0.05),相關(guān)性較好,相關(guān)系數(shù)為0.9759(P＜0.05)。由線性回歸方程計算出LC50=1131.6427μg/mL,LC10=845.9286μg/mL,LC0=774.5 μg/mL。

圖1 斑馬魚幼魚經(jīng)香加皮水提取物不同濃度藥物處理24小時后濃度-死亡率線性回歸曲線

2.2 香加皮水提取物暴露處理對野生斑馬魚幼魚肝臟表型和肝臟面積的影響

結(jié)果顯示,空白組斑馬魚肝臟成透明狀,無畸形,肝臟形態(tài)完整清晰,而藥物暴露組斑馬魚肝臟透明度降低,形態(tài)膨大,并且隨暴露濃度增加,肝臟進一步膨大,成暗灰色狀,肝臟區(qū)域邊緣逐漸模糊;其中,600μg/mL暴露組肝臟透明度降低,700μg/mL暴露組中斑馬魚肝臟區(qū)域成整體灰暗狀,800μg/mL暴露組除肝臟成灰暗狀外,卵黃囊發(fā)育遲緩,表明肝臟損傷進一步擴大。肝臟面積統(tǒng)計結(jié)果顯示,各濃度藥物暴露處理組中斑馬魚的肝臟面積呈劑量依賴性增加,并與空白組均具有顯著性差異(P＜0.05)。如圖2所示。

表1 斑馬魚幼魚(4dpf)經(jīng)香加皮水提取物不同濃度藥物處理24小時后肝臟面積變化(x±s)

圖2 斑馬魚幼魚(4dpf)經(jīng)香加皮水提取物不同濃度藥物處理24小時后肝臟形態(tài)學變化

2.3 香加皮水提取物暴露處理對轉(zhuǎn)基因斑馬魚肝臟形態(tài)、熒光面積和平均熒光強度的影響

形態(tài)觀察結(jié)果表明,空白組斑馬魚肝臟形態(tài)完整,產(chǎn)生了強烈的紅色熒光;而給藥組斑馬魚肝臟形態(tài)異常,肝臟熒光面積增大,熒光強度有下降的趨勢;其中,600μg/mL暴露組斑馬魚肝臟熒光面積增大,熒光強度減弱,700μg/mL暴露組中斑馬魚肝臟熒光面積進一步增加,800μg/mL暴露組肝臟熒光面積較700μg/mL組減小,但與空白組斑馬魚肝臟相比,仍顯示增大的趨勢。肝臟面積統(tǒng)計結(jié)果顯示,斑馬魚的肝臟熒光面積隨藥物暴露濃度的增加而增大,但在高濃度組有下降的趨勢,并與空白組均具有顯著性差異(P＜0.05)。肝臟平均熒光強度結(jié)果統(tǒng)計顯示,斑馬魚肝臟熒光強度呈劑量依賴性降低,并與空白組比較具有顯著性差異(P＜0.05)。如圖3所示。

圖3 肝臟熒光蛋白轉(zhuǎn)基因斑馬魚幼魚經(jīng)香加皮水提取物不同濃度藥物處理24小時肝臟表型結(jié)果

表2 幼魚肝臟熒光面積和平均熒光強度統(tǒng)計表(x±s)

2.4 斑馬魚幼魚經(jīng)香加皮水提取物暴露處理后肝臟吖啶橙染色結(jié)果

吖啶橙是一種核酸插入式染料,能透過胞膜完整的細胞,與凋亡的細胞中的雙鏈DNA結(jié)合后,產(chǎn)生綠色熒光。吖啶橙染色處理后,與空白組相比,高濃度藥物處理組斑馬魚肝臟區(qū)域顯示了顯著的黃綠色熒光,意味著有細胞凋亡現(xiàn)象,結(jié)果如圖4所示。

圖4 斑馬魚肝臟吖啶橙染色熒光情況

2.5 斑馬魚幼魚經(jīng)香加皮水提取物暴露處理后,T-SOD、GSH-Px、AST 和 ALT 活力測定

結(jié)果表明,與空白組相比,香加皮水提物暴露處理組能夠降低斑馬魚T-SOD及GSH-Px活性,并具有顯著性差異(P＜0.05),提高斑馬魚體內(nèi)ALT和AST活性,并具有顯著性差異(P＜0.05),并呈現(xiàn)劑量相關(guān)性,見表3。

3 討論

香加皮在臨床使用時,常常伴隨著一些毒性和不良反應(yīng),早期表現(xiàn)為惡心、嘔吐、腹瀉等,嚴重時出現(xiàn)心率下降、房室傳導阻滯、心律失常甚至引起機體死亡[11],嚴重限制了對其深入的開發(fā)和運用,需要進一步評價其毒性作用機制。

斑馬魚基因與人類具有高度同源性,組織和器官發(fā)育具有相似的形態(tài)和分子基礎(chǔ),其中,生長因子、基因表達以及肝臟中脂質(zhì)、蛋白、維生素和碳水化合物代謝的相似性就是很好的例子[12]。有研究表明斑馬魚對外源化學物質(zhì)的抵御機制與哺乳動物類似,包含酶活性誘導和氧化應(yīng)激,其中,斑馬魚肝臟中具有許多與哺乳動物同源的脂質(zhì)代謝酶,包括HMG-CoA合成與裂解酶、過氧化物酶體增殖物激活受體(PPARs)[13-14]。有學者通過斑馬魚表型分析,對已知的哺乳動物肝臟毒性藥物和陰性化合物進行了準確的區(qū)別[15];還有學者進一步完善并建立了基于基因表達生物標記物和表型分析的斑馬魚肝臟毒性評價方法,具有很好的適用性[16]。這些數(shù)據(jù)和技術(shù)手段都支持了斑馬魚模型對于藥物肝臟毒性的預(yù)測和評價具有可行性并展現(xiàn)出獨特的優(yōu)勢,即基于斑馬魚模型的藥物肝臟毒性篩選具有明顯的高通量、低成本、實驗周期短以及可以活體評價等優(yōu)點。

本文利用斑馬魚模型在藥物毒理學評價中的優(yōu)勢來探討香加皮水提取物對斑馬魚肝臟的潛在毒性作用。機體內(nèi)氧自由基生成-清除的動態(tài)平衡是機體自我保護的重要機制,自由基生成過多或清除能力減弱時,機體會受到自由基的攻擊,造成細胞結(jié)構(gòu)和功能上的損害[17]。抗氧化酶 SOD和GSH-Px是機體通過酶系途徑抗氧化的主要物質(zhì),其活性的變化直接影響細胞內(nèi)氧自由基和其終末產(chǎn)物的量,并反應(yīng)了機體氧化應(yīng)激的水平。本研究通過測定斑馬魚體內(nèi)總超氧化物歧化酶的含量和谷胱甘肽過氧化酶的含量來探討香加皮水提取物對斑馬魚體內(nèi)以上兩種酶活性的影響,結(jié)果顯示,與空白組相比,各藥物濃度組SOD、GSH-Px值具有顯著性差異,均小于空白組,并隨暴露濃度的升高而下降。SOD、GSH-Px活力的高低間接反應(yīng)了機體清除自由基的能力,因此,香加皮水提取物可能通過抑制斑馬魚肝臟SOD、GSH-Px的活性,造成斑馬魚氧化應(yīng)激損傷,進而造成肝臟細胞的過氧化損傷。

表3 香加皮水提取物不同濃度暴露組處理24小時后對幼魚酶活力影響(x±s,n=3)

ALT和AST是主要分布在肝細胞內(nèi)的氨基酸轉(zhuǎn)移酶,是表征肝臟受到外源性物質(zhì)損傷的常用信號檢測物質(zhì),當肝細胞被損傷時,肝細胞的結(jié)構(gòu)遭到破壞,其轉(zhuǎn)氨酶將釋放進入血液循環(huán),從而導致血漿內(nèi)二者含量升高;二者在藥物暴露組中均表現(xiàn)出了含量上升的趨勢,并與對照組具有顯著性差異,這些結(jié)果說明斑馬魚肝臟受到了藥物的毒性損傷。有文獻[18-19]報道連續(xù)給予小鼠香加皮水提取物后,小鼠肝臟AST、ALT水平顯著升高,同時導致小鼠肝臟細胞的凋亡,進而造成小鼠的肝臟損傷。這些研究結(jié)果與本實驗所得結(jié)論相一致,相互印證,也為證實斑馬魚在藥物肝臟毒性研究的適用性提供了數(shù)據(jù)支持,其毒性作用機制可能為破壞了斑馬魚體內(nèi)氧化應(yīng)激平衡,造成斑馬魚肝臟細胞的損傷和凋亡。

肝臟毒性在藥物毒性評價中往往處于首要的位置,近年來關(guān)于中藥肝臟毒副作用的報道受到了大眾的廣泛的關(guān)注,這些負面影響嚴重地損害了中藥的聲譽,建立快速準確的中藥肝臟毒性評價體系迫在眉睫,本文基于斑馬魚模型初步探討香加皮水提取物的肝臟毒性作用,以期為香加皮的臨床應(yīng)用和合理開發(fā)提供一定的參考價值。

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Effects of waterextract from cortex periplocae on hepatotoxicity of zebrafish

DAI Yihang,ZHAO Chongjun,TIAN Jinghuan,et al.
School of Chinese Materia Medica,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing Key Laboratory for Quality Evaluation of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100102,China

LIN Ruichao,E-mail：linrch307@sina.com;ZOU Dixin,Email：zoudixin@163.com

Objective To study the toxic effect of waterextract from cortex periplocae on liver of zebrafish larval.Methods Zebrafish embryos of 4 days post-fertilization were exposed to 12-well plates with different concentrations of waterextract from cortex periplocae for 24 hours,and the mortality rate was calculated and the toxic curve was calculated.Three drug exposed groups less than LC10and the blank group were selected.The changes of liver morphology and area,fluorescence area and fluorescence intensity of liver,apoptosis of liver cell, superoxide dismutase, glutathione peroxidase,alanine aminotransferase,aspartic transaminase were used as indicator of toxicity assessment.Results The LC10ofwaterextract from cortex periplocae was 845.9286μg/mL,the mortality rate was dependent with the concentration,concentration-mortality curve was y=-1.0843+0.0014x(R2=0.9524,P＜0.001),and correlation coefficient was 0.97590(P＜0.001).Compared with the control group,morphological abnormalities was more and transparency was decreased in liver,and liver area was increased with drug exposure concentration(P＜0.05);The fluorescence area was increased with the exposure concentration increased,but in the high concentration group,the fluorescence intensity was decreased with the exposure concentration increased(P＜0.05);The apoptosis was appeared in high concentration exposed group.The activity of SOD,GSH-Px was significantly decreased while the activity of AST,ALT was significantly increased.Conclusion Waterextract from cortex periplocae can induce hepatotoxicity in zebrafish larvae,and the mechanism may relate to destroy the balance of oxidative stress and induce apoptosis in liver cells.

Cortex periplocae; Waterextract; Zebrafish model; Hepatotoxicity

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674-1749.2017.10.001

2017-07-05)

(本文編輯：董歷華)

北京市科委創(chuàng)新環(huán)境與平臺建設(shè)專項(Z16111000500000)

100102北京中醫(yī)藥大學中藥學院中藥品質(zhì)評價北京市重點實驗室[代一航(碩士研究生)、趙崇軍(博士研究生)、田敬歡(碩士研究生)、倪媛媛(碩士研究生)、李二文(碩士研究生)、楊冉冉(碩士研究生)、馮丹(博士研究生)、劉雯雪(碩士研究生)、王昭懿(博士研究生)、喬藝涵(碩士研究生)、馬志強、林瑞超];內(nèi)蒙古醫(yī)科大學藥學院(鄒迪新)

代一航(1991-),2015級在讀碩士研究生。研究方向：中藥毒性成分與中藥藥理研究。E-mail：2449416672@qq.com

林瑞超(1954-),博士,教授,博士生導師。研究方向：中藥、民族藥質(zhì)量控制與品質(zhì)評價研究。E-mail：linrch307@sina.com;鄒迪新(1983-),女,博士,講師。研究方向：中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機制研究。Email：zoudixin@163.com