唐蓮 唐艷 朱詠貴 張慧

論 著

酶聯(lián)免疫法檢測小兒乙肝PreS1抗原及抗體在乙肝診斷中的應用價值

唐蓮 唐艷 朱詠貴 張慧

目的探討酶聯(lián)免疫法檢測小兒乙肝病毒前S1蛋白（PreS1）抗原及抗體在小兒乙肝診斷中的應用價值。方法在2014年至2016年在本院接受診斷和治療的乙肝患兒中，選擇200例資料完整且接受兩對半檢查和酶聯(lián)免疫法檢測血清PreS1抗原及抗體的患兒作為研究對象，計算不同兩對半檢測結果患兒PreS1抗原及抗體陽性率，分析PreS1抗原陽性與HBV-M的Spearman相關性。結果200例乙肝患者入選。18例乙肝大三陽患兒的PreS1抗原陽性及抗體陽性的檢出率較高，均為83.33%。25例PreS1抗原陽性組患兒與175例抗原陰性組患兒HBsAg、HBeAg和HBcAb數(shù)據(jù)對比差異具有統(tǒng)計學意義，說明PreS1抗原陽性與HBsAg、HBeAg和HBcAb具有正相關關系，相關數(shù)值分別為0.620、0.550、0.720，P值分別為0.021、0.009、0.020。結論乙肝PreS1抗原及抗體陽性檢測準確率相對較高，可以作為乙肝診斷的補充檢驗，為患兒的臨床診斷和治療提供依據(jù)。

酶聯(lián)免疫法； 乙肝PreS1； 抗原； 抗體； 診斷

乙型肝炎（乙肝）是臨床中常見的傳染性疾病，在現(xiàn)階段的臨床診斷中，兩對半檢測是主要的診斷手段，但是該檢測方式對臨床診斷具有一定的局限性，需要通過輔助診斷方式來提升診斷效果。而DNA檢測屬于有效的輔助診斷方式，然而乙肝病毒感染時，容易出現(xiàn)基因突變，造成檢測假陽性［1］。姜孝新等［2］在臨床研究中發(fā)現(xiàn)，乙肝病毒前S1蛋白（PreS1）抗體和抗原可以輔助檢測乙肝，將其應用于患者的臨床檢測，可以提升檢測的準確性和可靠性。王躍軍等［3］研究了乙肝病毒PreS1抗原及核心抗體IgM在臨床診斷中的價值，發(fā)現(xiàn)IgM可以為乙肝患者的診斷提供依據(jù)。PreS1抗體和抗原檢測方式可以輔助診斷疾病，但其臨床研究相對較少。因此，本研究的目的在于探討酶聯(lián)免疫法檢測小兒乙肝PreS1抗原及抗體在乙肝診斷中的應用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 病例選擇 從2014年至2016年在本院接受診斷和治療的乙肝患兒中，選擇200例資料完整且接受兩對半檢查和酶聯(lián)免疫吸附試驗血清檢查的患兒作為研究對象。

1.1.1 納入標準 ① 患兒均行酶聯(lián)免疫法進行診斷；② 患兒均行兩對半診斷；③ 患兒家屬同意本次研究且簽署知情同意書。

1.1.2 排除標準 ① 伴有其他肝臟疾??； ② 患有肝臟其他器質性疾病。

1.1.3 患者資料 200例患兒中男性112例，女性88例；患者年齡2～12歲，平均年齡（6.2±2.1）歲。其中，18例患兒屬于HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+（大三陽）；48例患兒屬于HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+（小三陽）；30例患兒屬于HBsAg+（單純表面抗原陽性）；44例患兒屬于HBeAb+（單純表面抗體陽性）；28例患兒屬于HBsAg+、HBeAb+（表面抗原及核心抗體陽性）；22例患兒屬于HBsAg+、HBcAb+（表面抗體及核心抗體陽性）；10例患兒屬于HBcAb+（核心抗體陽性）。

1.2 實驗儀器的選擇 實驗儀器選擇酶標儀（瑞士Tecan Sunrise公司生產(chǎn)）；洗板機（深圳匯松科技公司生產(chǎn)，型號PW-960）。

1.3 實驗試劑的選擇 PreS1抗原和抗體檢測試劑盒（上海阿爾法生物技術公司生產(chǎn)）；乙肝兩對半檢測試劑盒（英科新創(chuàng)廈門科技公司生產(chǎn)）。

1.4 實驗方法［4］嚴格按照試劑盒的說明書進行操作，稀釋洗滌液備用。在測試微孔板設計空白、陽性和陰性對照組，一孔、二孔和三孔分別作為空白對照、陽性對照和陰性對照，滴入HBsAg酶合物，空白對照不滴加，充分搖勻后，將樣本置于板貼，置于保溫箱半小時，溫度設置為37 ℃，取下板貼，行洗板處理，運用洗滌液洗滌6次后拍干，加入底物液體，同時加入1滴顯色劑，置于37 ℃中保溫10 min，最后加入終止液，運用酶標儀測定結果。

1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料用例（%）表示，同時采用Spearman進行相關性分析，P＜0.05表示數(shù)據(jù)對比差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 患兒PreS1抗原以及抗體陽性情況分析 在本次研究中，發(fā)現(xiàn)乙肝大三陽患者的PreS1抗原陽性及抗體陽性的檢出率較高，達到80%以上。結果見表1。

2.2 患兒PreS1抗原陽性、陰性與乙肝病毒標志物的Spearman相關性分析 在本次研究中，PreS1抗原陽性組患兒與抗原陰性組患兒HBsAg、HBeAg、HBcAb數(shù)據(jù)對比差異具有統(tǒng)計學意義，說明PreS1抗原與HBsAg、HBeAg和HBcAb具有正相關關系。見表2。

表1 200例乙肝患兒兩對半檢測及PreS1抗原抗體陽性檢測結果表

表2 200例乙肝患兒PreS1抗原陽性、陰性與HBV-M的Spearman相關性分析表

3 討論

乙肝是指感染了乙型肝炎病毒（HBV）并導致肝臟炎癥，人體感染后可以有不同的臨床感染狀態(tài)，如乏力、惡心和腹脹等，輕度的壓痛感，病情嚴重者甚至會造成肝功能異常［5］。在對患者的臨床診斷中，兩對半是患者的血清標志物，包括表面抗原、表面抗體、核心抗體、e抗原以及e抗體。通過兩對半檢測，可以基本了解乙肝患者的病情，但是在檢測過程中，由于患者體質以及基因突變等因素，導致僅有兩對半檢測仍無法了解部分患者的詳細病情，因而需要采用科學的方式來進行輔助診斷［6］。

酶聯(lián)免疫法主要是通過抗體與酶的結合，通過顯色劑來進行檢測，其可以保證免疫活性，同時保留酶的活性。在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開，最后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據(jù)顏色反應的深淺來進行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。在乙肝患者的診斷中，通過酶聯(lián)免疫法，可以較為準確地輔助患者的HBV診斷，為患者的臨床治療提供依據(jù)。

在本次研究中發(fā)現(xiàn)，乙肝大三陽患者的PreS1抗原陽性及抗體陽性的檢出率較高，達到80%以上。說明在對乙肝患者的臨床診斷中，采用酶聯(lián)免疫法檢測患者的PreS1抗原以及抗體，具有較高的準確率，這主要是由于在對患兒的診斷中，傳統(tǒng)的兩對半檢測方式雖然可以基本了解患兒的乙肝病情，但是對于部分患兒而言，由于體質和免疫狀態(tài)的差異，導致難以確定其具體的病情。而采用PreS1抗原以及抗體的檢測方式，可以相對更準確地確定乙肝感染狀態(tài)，這是由于HBV顆粒包含Dane、球形和棒狀顆粒，并且DNA以及DNA多聚酶存在于Dane顆粒表面，在酶聯(lián)免疫法的應用中，通過載體酶與反應底物的化學反應，會產(chǎn)生相應的有色產(chǎn)物，而在反應中，大三陽患兒的HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+均容易發(fā)生反應，因而在檢測過程中，檢出率最高，達到83.33%。在對乙肝患者的臨床診斷研究中，Joo等［7］采用兩對半的方式對患者進行檢查，通過檢查發(fā)現(xiàn)，該檢測方式的準確率達到75%以上，但是對于部分患者而言，依然無法滿足患者的診斷需求，因而需要結合其他檢測手段來輔助進行確診，以便為患者的臨床治療提供充分依據(jù)。靳四海［8］在對酶聯(lián)免疫法的研究中，認為其對于乙肝大三陽患者具有較高的診斷價值，這主要是由于在對患者的診斷過程中，大三陽患者體內的抗原反應相對較為靈敏，會較為準確地反映患者體內的HBV情況，從而可以輔助確定患者的病情，對于乙肝的具體診斷具有較為重要的臨床意義。劉蘭鳳等［9］在臨床研究中，對酶聯(lián)免疫法的臨床優(yōu)勢以及缺點進行分析，他認為該檢測方式具有較高的靈敏度，可以確定患者的病情，但是在檢測的過程中，該檢測方式同樣會出現(xiàn)診斷誤差，在與兩對半檢測出現(xiàn)差異時，需要對患者進行重新診斷，反而會浪費診斷時間，因此，在診斷的過程中，需要根據(jù)患者的實際情況合理選擇。

在本次研究中，PreS1抗原陽性組與陰性組患兒HBsAg、HBeAg和HBcAb數(shù)據(jù)對比差異具有統(tǒng)計學意義，說明與HBsAg、HBeAg和HBcAb具有正相關關系。因而在對患兒的臨床診斷中，可以通過PreS1檢測的方式來輔助診斷，以此來提升診斷的準確率，并且降低疾病的傳染。這主要是由于在對患兒的診斷過程中，PreS1抗體是HBV清除的重要指標，HBsAg、HBeAg和HBcAb更加容易發(fā)生反應，改變抗原的性質，因而與PreS1抗原陽性呈現(xiàn)明顯的正相關關系。而HBsAb與HBeAb在反應過程中，雖然發(fā)生變化，但是對于陽性的變化并無明顯的影響，因而不存在相關性。在對患兒的診斷中，如果患兒HBV出現(xiàn)基因突變，加重疾病，出現(xiàn)重癥肝炎，并且預后效果較差，因而更需要注意隔離和積極治療。在對乙肝患者的臨床診斷研究中，Dahl等［10］認為PreS1抗原以及抗體和患者HBsAg具有正相關關系，其主要是由于患者體內的病毒基因容易出現(xiàn)突變或者復制率變化，而PreS1抗原是患者HBV活躍的重要指標，因而通過該檢測方式，可以較好地確定患者的感染狀態(tài)。石梁［11］在研究中，分析酶聯(lián)免疫法以及乙肝兩對半檢測方式的差異，發(fā)現(xiàn)酶聯(lián)免疫法檢測方式中，體內PreS1抗原以及抗體和患者體內的HBeAg和HBcAb變化具有明顯的正相關，可以較為靈敏地反映患者的HBV變化情況，對于患者的輔助診斷具有較高的借鑒意義。本次研究與諸多研究結果相符。

總之，PreS1抗原及抗體的檢測準確率相對較高，可以作為乙肝診斷的補充檢驗，為患兒的臨床診斷和治療提供依據(jù)。然而在本次研究中，由于樣本量相對較少，同時研究中可能存在一定的檢驗誤差，且患兒的體質存在差異，因而導致本次研究結果可能存在一定的誤差，但是總體而言，其仍然對于患兒的臨床診斷具有一定的借鑒意義。

1 康華，田亞瓊，張磊，等.乙肝相關肝細胞肝癌血清蛋白標志物的篩選［J］.實用檢驗醫(yī)師雜志，2015，7（2）：79-85.

2 姜孝新，蔣艷，李艷雯，等. MICA基因第5外顯子與乙肝后肝硬變的相關性研究［J］.實用檢驗醫(yī)師雜志，2013，5（2）：76-78，108.

3 王躍軍，常亞麗，柴玉香，等.乙肝病毒前S1抗原及核心抗體IgM在臨床診斷中的價值［J］.西南國防醫(yī)藥，2013，23（9）：939-941.

4 黃麗慶，黃啟強，楊珊玉.乙肝病毒前S1抗原與傳統(tǒng)二對半聯(lián)合檢測的應用價值探討［J］.現(xiàn)代診斷與治療，2013，（13）：2909-2910.

5 邱芳，吳澤良.放射免疫法和酶聯(lián)免疫法檢測人血漿乙肝表面抗體效價比較［J］.江西醫(yī)藥，2012，47（2）：178-179.

6 馬連學，李艷菊，魏巍.化學發(fā)光微粒免疫法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙肝表面抗原的結果對比分析［J］.中國實用醫(yī)藥，2014，6（9）：89-90.

7 Joo DJ，Jung I，Kim MS，et al. Comparison of the affinity columnmediated immunoassay and microparticle enzyme immunoassay methods as a tacrolimus concentration assay in the early period after liver transplantation［J］. Transplant Proc， 2010，42（10）：4137-4140.

8 靳四海.酶聯(lián)免疫法檢測乙肝患者的血清標志物的臨床價值分析［J］.中國處方藥，2015，13（5）：115.

9 劉蘭鳳，杜麗新.淺談用酶聯(lián)免疫法與膠體金法檢測乙肝表面抗原的優(yōu)缺點［J］.當代醫(yī)藥論叢，2015，13（11）：46-47.

10 Dahl JH，van Breemen RB. Rapid quantitative analysis of 8-isoprostaglandin-F(2alpha) using liquid chromatography-tandem mass spectrometry and comparison with an enzyme immunoassay method［J］. Anal Biochem， 2010，404（2）：211-216.

11 石梁.酶聯(lián)免疫法和膠體金快速檢測板檢測乙肝兩對半的比較分析［J］.臨床醫(yī)藥文獻電子雜志，2015，2（28）：5919-5920.

Clinical value of enzyme-linked immunosorbent assay in detecting hepatitis B PreS1 antigen and antibody in children

Tang Lian, Tang Yan, Zhu Yonggui, Zhang Hui. Liver Center, Hunan Children's Hospital, Changsha 410007,Hunan, China (Tang L, Zhu YG, Zhang H);
Department of Laboratory, Hunan Shaoyang Central Hospital, Shaoyang 422000, Hunan, China (Tang Y)

ObjectiveTo investigate the value of enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) in detecting hepatitis B PreS1 antigen and antibody in children.MethodsFrom 2014 to 2016 in our hospital 200 cases of children with incomplete information and accept the two semi inspection and enzyme-linked immunosorbent assay of serum examination for diagnosis and treatment of hepatitis B were selected as the research object. Positive rates of PreS1 antigen and antibody, and Spearman correlation between PreS1 antigen positive and HBV-M were calculated.ResultsTwo hundred cases of hepatitis B patients were enrolled. Eighteen patients with HBeAg positive PreS1 antigen and antibody positive detection rate was higher, more than 83.33% cases. Twenty-five PreS1 antigen positive group and 175 cases of children with HBsAg antigen were negative group, the difference was statistically significant in HBeAg and HBcAb data contrast, the PreS1 antigen positive and HBsAg, HBeAg and HBcAb had positive correlation, with correlation values were 0.620, 0.550, 0.720 and P = 0.021, 0.009,0.020.ConclusionThe detection accuracy of hepatitis B PreS1 antigen and antibody is relatively high, which can be used as a supplementary test for hepatitis B diagnosis, and provide the basis for clinical diagnosis and treatment of children.

Enzyme-linked immunosorbent assay; Hepatitis B PreS1; Antigen; Antibody; Diagnosis

2017-06-17）

（本文編輯：楊程伍 李銀平）

410007 湖南長沙，湖南省兒童醫(yī)院肝病中心（唐蓮、朱詠貴、張慧）；

422000 湖南邵陽，湖南省邵陽市中心醫(yī)院檢驗科（唐艷）

唐蓮，Email：thinkapr@163.com

10.3969/j.issn.1674-7151.2017.03.006

Corresponding author: Tang Lian, Email: thinkapr@163.com