李冰,盧慧

(大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，遼寧大連116011)

房顫患者射頻消融術(shù)前后血漿miR-150表達(dá)水平的變化

李冰,盧慧

(大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，遼寧大連116011)

目的探討射頻消融術(shù)前后血漿miR-150表達(dá)水平的變化。方法檢測(cè)60例不同類型房顫患者(房顫組，其中陣發(fā)性、持續(xù)性和永久性房顫患者分別為26、19和15例)左心房?jī)?nèi)徑、左室射血分?jǐn)?shù)、腦鈉尿肽(BNP)、超敏C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、D-二聚體水平，不同類型房顫各觀察指標(biāo)的差異；應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)20例健康體檢者(對(duì)照組)以及不同類型房顫患者射頻消融術(shù)前后血漿miR-150表達(dá)水平。結(jié)果術(shù)前不同類型房顫患者左心房?jī)?nèi)徑、左室射血分?jǐn)?shù)、BNP、hs-CRP、D-二聚體水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。對(duì)照組血漿miR-150相對(duì)表達(dá)量為1.00±0.00，房顫組射頻消融術(shù)前血漿miR-150相對(duì)表達(dá)量為0.35±0.06，與對(duì)照組比較，房顫組術(shù)前血漿miR-150相對(duì)表達(dá)量下降(P<0.05)。術(shù)前陣發(fā)性房顫、持續(xù)性房顫和永久性房顫血漿miR-150相對(duì)表達(dá)量分別為0.53±0.08、0.24±0.07和0.19±0.04，術(shù)后相對(duì)表達(dá)量分別為1.53±0.14、1.67±0.21和0.51±0.13，與術(shù)前比較，相同類型房顫射頻消融術(shù)后血漿miR-150相對(duì)表達(dá)量均表達(dá)上升(P均<0.05)。結(jié)論血漿miR-150可能參與了房顫發(fā)病機(jī)制的調(diào)控并與房顫病情發(fā)展密切相關(guān)，可作為房顫診斷、治療和預(yù)后判斷的輔助指標(biāo)。

心房顫動(dòng)；miRNA-150；射頻消融術(shù)

心房顫動(dòng)簡(jiǎn)稱房顫，是臨床上最常見的心律失常之一，發(fā)病率隨年齡的增長(zhǎng)而逐漸增高[1]。Haissaguerre等[2]通過肺靜脈節(jié)段性消融的手段治療房顫并獲得了重大突破。但是射頻消融術(shù)后房顫復(fù)發(fā)仍是治療的最大困擾，對(duì)于房顫根治始終沒有徹底有效的方法，主要是由于其發(fā)病機(jī)制還不清楚。某些遺傳因子能夠增加房顫發(fā)生的易感性，尤其是miRNA的異常表達(dá)是房顫發(fā)生易感的一個(gè)關(guān)鍵因素。目前已發(fā)現(xiàn)多種miRNA與心血管疾病相關(guān)，它們?cè)诜款澃l(fā)生與維持的過程中發(fā)揮著重要作用[3]。這些miRNAs在不同程度上參與心房的電重構(gòu)和結(jié)構(gòu)重構(gòu)，是房顫發(fā)生與發(fā)展中重要的調(diào)控因子[4]。因此，我們就射頻消融術(shù)前后患者血漿miR-150表達(dá)水平的變化進(jìn)行了研究。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年3月～2016年1月在我院行射頻消融術(shù)的60例心房顫動(dòng)患者(房顫組)，男34例、女26例，年齡(64.55±6.34)歲，其中陣發(fā)性、持續(xù)性和永久性房顫患者分別為26、19和15例。房顫組患者均有常規(guī)心電圖或24 h動(dòng)態(tài)心電圖支持房顫診斷。排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡>80歲，甲狀腺功能亢進(jìn),糖尿病,血壓控制不良者,左心室功能減低(左室射血分?jǐn)?shù)<40%)，嚴(yán)重冠狀動(dòng)脈疾病,肝、腎功能障礙，急慢性感染性疾病，心肌結(jié)構(gòu)性病變，伴有惡性腫瘤。本研究服用β受體阻滯劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、血管緊張素受體抑制劑或是他汀類的患者不影響入選。選擇同期我院體檢中心的健康體檢者20例作為對(duì)照組，男11例、女9例，年齡(63.78±5.35)歲；均無(wú)明顯循環(huán)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、生殖泌尿系統(tǒng)疾病，其年齡、性別與房顫組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均>0.05)。本研究涉及的被測(cè)試者都已告知了研究目的，并簽署了知情同意書。

1.2 血液標(biāo)本采集及存儲(chǔ) 房顫患者行射頻消融術(shù)前抽取外周靜脈血3 mL，對(duì)照組同期體檢抽取外周靜脈血3 mL，分別置于EDTA抗凝管中，4 h內(nèi)分離血漿，1 500 r/min離心15 min，吸取上清液放于經(jīng)高壓過的EP管中，儲(chǔ)存在-80 ℃冰箱備用。房顫患者射頻消融術(shù)后復(fù)轉(zhuǎn)為竇性心律，術(shù)后一個(gè)月內(nèi)無(wú)復(fù)發(fā)。術(shù)后一個(gè)月按術(shù)前同樣標(biāo)準(zhǔn)采血保存。

1.3 心臟結(jié)構(gòu)功能及生化指標(biāo)檢測(cè) 射頻消融術(shù)前，經(jīng)心臟彩超檢查獲取房顫患者左心房?jī)?nèi)徑和左室射血分?jǐn)?shù)，經(jīng)血液生化分析儀獲取房顫組患者血漿腦鈉尿肽(BNP)、超敏C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、D-二聚體水平。

1.4 血漿miR-150表達(dá)檢測(cè) 采用PCR法，對(duì)照組健康體檢時(shí)檢測(cè)血漿miR-150表達(dá)，房顫組射頻消融術(shù)前及術(shù)后一個(gè)月檢測(cè)血漿miR-150表達(dá)。利用德國(guó)凱杰公司RNA提取試劑盒提取總RNA,將提取出的RNA在微量核酸測(cè)定儀上測(cè)定其濃度和純度，挑選出260/280比值在1.8～2.0之間的樣品進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)，不符合要求的樣品需要重新提取RNA。反轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR,反應(yīng)條件：95 ℃ 6 min;95 ℃ 12 s,62 ℃ 40 s,組內(nèi)重復(fù)3次取平均值，以Ct值表示，miR-150的相對(duì)表達(dá)量用2-ΔΔCt表示。

2 結(jié)果

2.1 術(shù)前不同類型房顫心臟結(jié)構(gòu)功能及生化指標(biāo)比較 術(shù)前不同類型房顫患者左心房?jī)?nèi)徑、左室射血分?jǐn)?shù)、BNP、hs-CRP、D-二聚體水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見表1。

表1 術(shù)前不同類型房顫心臟結(jié)構(gòu)功能及生化指標(biāo)比較

2.2 術(shù)前房顫組與對(duì)照組血漿miR-150表達(dá)比較 對(duì)照組血漿miR-150相對(duì)表達(dá)量為1.00±0.00，房顫組射頻消融術(shù)前血漿miR-150相對(duì)表達(dá)量為0.35±0.06,與對(duì)照組比較，房顫組術(shù)前血漿miR-150相對(duì)表達(dá)量下降(P<0.05)。

2.3 不同類型房顫射頻消融術(shù)前后血漿miR-150表達(dá)量比較 術(shù)前陣發(fā)性房顫、持續(xù)性房顫和永久性房顫血漿miR-150相對(duì)表達(dá)量分別為0.53±0.08、0.24±0.07和0.19±0.04，不同類型房顫患者血漿miR-150相對(duì)表達(dá)量比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。術(shù)后陣發(fā)性房顫、持續(xù)性房顫和永久性房顫血漿miR-150相對(duì)表達(dá)量分別為1.53±0.14、1.67±0.21和0.51±0.13；與術(shù)前比較，相同類型房顫射頻消融術(shù)后血漿miR-150相對(duì)表達(dá)量均表達(dá)上升(P均<0.05)。

3 討論

目前，在心肌梗死和心衰方面已經(jīng)有傳統(tǒng)經(jīng)典的檢測(cè)項(xiàng)目出現(xiàn)，如肌鈣蛋白、肌紅蛋白、BNP等[5]；但是在心律失常尤其是房顫的診斷方面，缺少有效的實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)進(jìn)行聯(lián)合輔助診斷。近年來(lái)，miRNAs在心律失常方面成為研究的熱點(diǎn)[6]，采用miRNAs作為診斷房顫生物學(xué)標(biāo)志物，靈敏度和特異性更好，既可以單獨(dú)使用，也可以與心電圖、心臟超聲聯(lián)合用于疾病的臨床診斷、治療監(jiān)測(cè)及預(yù)后判斷等，且血漿中循環(huán)miRNAs的檢測(cè)是一種無(wú)創(chuàng)性方法，較檢測(cè)組織或細(xì)胞中的miRNAs更加方便可行[7]。若能發(fā)現(xiàn)血漿中靈敏度和特異性較高的miRNAs用于房顫診斷，將對(duì)房顫乃至心律失常疾病的診斷、治療及預(yù)后意義重大[8]。近年來(lái)，miR-150同房顫發(fā)生發(fā)展研究逐漸深入[9]，但是miR-150在房顫患者射頻消融術(shù)前后外周血中的表達(dá)變化鮮有報(bào)道。

本研究顯示，不同類型房顫患者左心房?jī)?nèi)徑、左室射血分?jǐn)?shù)、BNP、hs-CRP、D-二聚體水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。隨著年齡的增長(zhǎng)，房顫患者病情如不能得到有效控制，心房肌細(xì)胞容易發(fā)生結(jié)構(gòu)改變，可導(dǎo)致高血壓、左房增大等；如果房顫繼續(xù)持續(xù)發(fā)生，則心房肌細(xì)胞將產(chǎn)生不可逆的結(jié)構(gòu)破壞，導(dǎo)致左室功能下降，表現(xiàn)為左室射血分?jǐn)?shù)降低、血漿BNP水平增高等；同時(shí)血栓形成等并發(fā)癥發(fā)生的可能性加大。

miR-150定位于人類19號(hào)染色體上，是一個(gè)長(zhǎng)度為22個(gè)核苷酸大小的非編碼單鏈RNA[10]。在淋巴結(jié)和脾臟等免疫系統(tǒng)中高表達(dá)，此外在腹腔、心肌也有所表達(dá)。當(dāng)前尚未有研究證實(shí) miR-150 水平與房顫之間有直接相互作用的機(jī)制，但是有報(bào)道稱 miR-150 低水平表達(dá)與炎癥、心肌纖維化和電重構(gòu)等關(guān)系密切[11]。本研究顯示，房顫患者射頻消融術(shù)前血漿miR-150表達(dá)較對(duì)照組低，術(shù)后同術(shù)前比較則表達(dá)上升，其機(jī)制可能與人體細(xì)菌感染和炎癥反應(yīng)有關(guān)。miR-150可影響炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展，可在某種程度輔助判斷患者的病情嚴(yán)重程度及治療效果。有研究證實(shí)[12]，膿毒癥患者外周血白細(xì)胞中miR-150水平明顯降低，但靶基因腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素-10水平上升，且低水平的miR-150預(yù)示炎癥反應(yīng)嚴(yán)重且預(yù)后差，而炎癥反應(yīng)可參與房顫的發(fā)生發(fā)展。Zheng等[13]發(fā)現(xiàn)在房顫患者體內(nèi)CRP水平明顯升高，一般都可超過正常水平的2倍甚至更多，尤其是在持續(xù)性房顫和永久性房顫患者體內(nèi)，CRP水平升高的更為明顯。

miR-150 還可以參與組織纖維化的過程，主要的作用機(jī)制是影響組織中膠原的分泌。心肌纖維化導(dǎo)致心臟的結(jié)構(gòu)重構(gòu)，從而能夠?qū)е路款澃l(fā)生。有報(bào)道稱在糖尿病大鼠模型中發(fā)現(xiàn)miR-150水平降低，而其膠原Ⅰ在心肌細(xì)胞以及心肌成纖維細(xì)胞中表達(dá)水平顯著升高。因此 miR-150 可能通過調(diào)控膠原Ⅰ從而參與糖尿病心肌纖維化這一病理進(jìn)程[14]。David 等相關(guān)研究報(bào)道稱房顫患者同非房顫患者比較miR-150 表達(dá)水平降低，血漿中miR-150 在心肌組織中的表達(dá)變化與房顫患者心房重構(gòu)之間存在著很大相關(guān)性，證明循環(huán)miRNAs 在心肌基因調(diào)控方面發(fā)揮著重要的作用。miR-150能夠影響心房細(xì)胞纖維化，可作為心房顫動(dòng)易感的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)，預(yù)測(cè)和輔助診斷房顫。該研究同時(shí)討論了miR-150與房顫發(fā)生強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間之間的劑量反應(yīng)關(guān)系，顯示持續(xù)性房顫患者血漿 miR-150表達(dá)水平高于陣發(fā)性房顫患者；心房組織miR-150 水平與房顫類型無(wú)關(guān)，提示了房顫患者血漿中miR-150水平與心臟 miR-150 表達(dá)可能無(wú)關(guān)聯(lián)。有研究發(fā)現(xiàn)外周血miR-150 低水平表達(dá)與房顫關(guān)聯(lián)顯著，低水平miR-150 表達(dá)可能會(huì)導(dǎo)致心肌纖維化，增加房顫發(fā)生的易感性[15]。本研究中，術(shù)后血漿miR-150表達(dá)水平同術(shù)前比較均有所上升，其中陣發(fā)性房顫和持續(xù)性房顫上升幅度大于永久性房顫，這可能是由于前者病情較輕，術(shù)后炎癥消除較快，心臟重構(gòu)在某種程度上得到緩解，致使血漿miR-150上升較快。

綜上，房顫患者射頻消融術(shù)前后血漿miR-150表達(dá)變化說(shuō)明其與房顫發(fā)生發(fā)展關(guān)系十分密切。因此檢測(cè)血漿miR-150的表達(dá)情況和動(dòng)態(tài)變化作為房顫診斷的輔助指標(biāo)。

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10.3969/j.issn.1002-266X.2017.33.021

R541.7+5

B

1002-266X(2017)33-0062-03

盧慧(E-mail:luhuiwork@163.com)

2017-01-12)