黃業(yè)亞，唐維政，孫鴻高，許丹妮，邱海平，潘方蝶

(海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院東湖分院檢驗(yàn)科，海南海口570203)

女性生殖道乳酸桿菌密度與陰道病分類(lèi)的相關(guān)性

黃業(yè)亞，唐維政，孫鴻高，許丹妮，邱海平，潘方蝶

(海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院東湖分院檢驗(yàn)科，海南?？?70203)

目的探討女性生殖道乳酸桿菌和細(xì)菌性陰道病(BV)、真菌性陰道病(VVC)及滴蟲(chóng)性陰道病(TV)的相關(guān)性。方法選取2016年12月至2017年5月在海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院東湖分院門(mén)診就診患者中BV感染者136例、VVC感染者126例及TV感染者100例作為觀察組，體檢健康人員130例作為對(duì)照組。應(yīng)用陰道微生態(tài)圖象診斷系統(tǒng)檢測(cè)陰道分泌物中細(xì)菌種類(lèi)和密度，干化學(xué)檢測(cè)pH、H2O2、白細(xì)胞酶和唾液腺酶，將觀察組中的BV、VVC及TV患者和對(duì)照組健康者中陰道分必物的乳酸桿菌含量及相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行比較。結(jié)果BV、VVC及TV患者的pH值分別為(4.8±0.3)、(4.4±0.3)和(5.4±0.4)，均明顯高于對(duì)照組的(4.1±0.2)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；BV、VVC及TV患者的Nugent評(píng)分分別為(7.0±1)分、(3.0±1)分和(4.0±1)分，均顯著高于對(duì)照組的(0.2±0.1)，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；對(duì)照組的H2O2陰性率為100%(130/130)，BV組為5.3%(8/136)，VVC組為18.3%(23/130)，TV組為9%(9/100)，各觀察組患者的H2O2陰性率明顯低于對(duì)照組，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；觀察組患者的乳酸桿菌密度明顯低于對(duì)照組，陰道加特納菌/普雷沃菌明顯高于對(duì)照組，經(jīng)Ridit分析，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論乳酸桿菌的缺失或降低是陰道疾病的重要因素，治療過(guò)程中，乳酸桿菌數(shù)量的恢復(fù)可作為評(píng)估療效的標(biāo)準(zhǔn)之一。

陰道微生態(tài)；乳酸桿菌；細(xì)菌性陰道炎；真菌性陰道炎；滴蟲(chóng)性陰道病

細(xì)菌性陰道病(BV)、真菌性陰道病(VVC)及滴蟲(chóng)性陰道病(TV)是婦科的常見(jiàn)病、多發(fā)病。長(zhǎng)期以來(lái)人們的治療方法是殺菌殺蟲(chóng)，忽視了陰道微生態(tài)的建立，常造成疾病的復(fù)發(fā)和再感染。自20世紀(jì)70年代，加拿大泌尿科醫(yī)師Andrew Bruc首次提出恢復(fù)陰道乳酸桿菌的含量可作為防止陰道感染的概念后，醫(yī)學(xué)界逐漸重視對(duì)陰道微生態(tài)的重建。近幾年對(duì)陰道微生態(tài)的重建和生殖道疾病防治關(guān)系有不少的報(bào)道，但多數(shù)都是單獨(dú)報(bào)道BV或VVC治療過(guò)程中如何建立陰道微生態(tài)平衡，而對(duì)于乳酸桿菌和上述幾種陰道病的關(guān)系鮮有報(bào)道。本文回顧性分析近年來(lái)在我院婦科門(mén)診就診且應(yīng)用陰道微生態(tài)系統(tǒng)檢測(cè)的患者的臨床資料，以探討其乳酸桿菌和BV、VVC及TV的相關(guān)性，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2016年12月至2017年5月在海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院東湖分院門(mén)診就診患者中BV感染者136例、VVC感染者126例及TV感染100例作為觀察組，體檢健康人員130例作為對(duì)照組。入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)具有臨床癥狀；(2)經(jīng)微生態(tài)檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)滴蟲(chóng)、真菌或大量的加特納菌/普雷沃菌；(3)半年前未經(jīng)過(guò)抗菌、抗滴蟲(chóng)、抗真菌治療者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)VVC及TV、VVC和BV、TV及BV混合感染者；(2)糖尿病、HIV感染及其他免疫系統(tǒng)疾病患者。依據(jù)BV、VVC和TV感染者分為3個(gè)觀察組。對(duì)照組和3個(gè)觀察組之間的年齡及未經(jīng)用藥時(shí)間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性，見(jiàn)表1。

表1 對(duì)照組和3個(gè)觀察組的年齡和之前未用藥時(shí)間比較(x-±s)

1.2 儀器設(shè)備山東仕達(dá)思生物產(chǎn)業(yè)有限公司生產(chǎn)的陰道微生態(tài)檢測(cè)系統(tǒng)。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 標(biāo)本處理分別取患者陰道分泌物涂片涼干，革蘭氏染色油鏡鏡檢，剩下的分泌物加8滴稀釋液充分洗脫，取一滴作濕片檢測(cè)。留取洗脫液進(jìn)行干化學(xué)測(cè)定(pH、H2O2、白細(xì)胞酶、唾液腺酶測(cè)定)。

1.3.2 Nugent革蘭氏染色評(píng)分以油鏡觀察，按以下形態(tài)區(qū)分，革蘭氏陽(yáng)性大桿菌(乳酸桿菌)、革蘭氏染色不定的小桿菌(陰道加特納菌)、革蘭氏染色不定的彎曲桿菌(動(dòng)彎桿菌)。根據(jù)每個(gè)油鏡視野細(xì)菌數(shù)量，分別用+～++++表示(+：1～9個(gè)；++:10～99個(gè)；+++：100～1 000個(gè)；++++：細(xì)菌聚集成團(tuán)或密集覆蓋黏膜上皮細(xì)胞)。根據(jù)乳酸桿菌、加納菌/普雷沃菌、動(dòng)彎桿菌的密度按表2進(jìn)行Nugent評(píng)分(總積分=乳酸桿菌+加特納菌和普沃菌+動(dòng)彎桿菌評(píng)分)。

表2 Nugent革蘭氏染色評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

1.3.3 干化學(xué)測(cè)定將洗脫液滴至干化學(xué)測(cè)試板中，置微生態(tài)測(cè)定儀15 min后可測(cè)出結(jié)果。pH在3.8～4.5、H2O2≥2 μmol/L(陰性)說(shuō)明乳酸桿菌功能正常，為優(yōu)勢(shì)種群。白細(xì)胞酶陽(yáng)性說(shuō)明有白細(xì)胞，或白細(xì)胞溶解釋放出酶。唾液酸酶陽(yáng)性說(shuō)明有加特納菌/普雷沃菌。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS19統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，各組各類(lèi)菌群密度分布情況比較采用Ridit分析，均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組和各觀察組患者的Nugent革蘭氏染色評(píng)分和pH值比較各患者組患者的pH值均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；各觀察組患者的Nugent革蘭氏染色評(píng)分均顯著高于對(duì)照組，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見(jiàn)表3。

表3 對(duì)照組與各觀察組患者的Nugent革蘭氏染色評(píng)分和pH值比較(x-±s)

2.2 對(duì)照組和各觀察組患者的H2O2比較對(duì)照組患者H2O2陰性率為100%(130/130)，BV組為5.3%(8/136)，VVC組為18.3%(23/130)，TV組為9%(9/100)，各觀察組患者的H2O2陰性率明顯低于對(duì)照組，差異均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=233.8、195.7、177.8，P＜0.01)。

2.3 各觀察組患者和對(duì)照組乳酸桿菌、加特納菌/普雷沃菌、動(dòng)彎桿菌密集度比較BV、TV及VVC組患者的乳酸桿菌密度均顯著低于對(duì)照組，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(u＞2.58，P＜0.01)；BV、TV及VVC組患者的加特納菌/普雷沃菌密度均顯著高于對(duì)照組，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(u＞2.58，P＜0.01)；BV、TV及VVC組患者的動(dòng)彎桿菌密度與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(u＜1.96，P＞0.05)，見(jiàn)表4。

表4 各觀察組患者和對(duì)照組的乳酸桿菌、加特納菌/普雷沃菌、動(dòng)彎桿菌密集度比較[例(%)]

3 討論

隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，疾病的診斷、治療和療效的評(píng)估逐步從單一因素、局部考慮向多因素和系統(tǒng)性評(píng)估轉(zhuǎn)變。中華醫(yī)學(xué)會(huì)婦產(chǎn)科分會(huì)近10年來(lái)對(duì)陰道性疾病的診治和療效已逐步摒棄了“單一以白細(xì)胞升高診斷炎癥”的觀念。而是從陰道微生態(tài)的角度診斷和治療陰道炎癥并及進(jìn)行療效評(píng)估。檢驗(yàn)科也從經(jīng)典的霉菌加特納菌或滴蟲(chóng)檢測(cè)，發(fā)展為陰道微生態(tài)系統(tǒng)檢測(cè)。微生態(tài)系統(tǒng)不僅可以動(dòng)態(tài)檢測(cè)陰道菌群的密度、微生物多樣性、優(yōu)勢(shì)菌群、炎性反應(yīng)等，而且還可以檢測(cè)陰道pH、H2O2、唾液酸酶、白細(xì)胞酯酶等多個(gè)指標(biāo)，可以向臨床提供全面的微生態(tài)信息。

本文通過(guò)陰道微生態(tài)系統(tǒng)檢測(cè)表明BV組陰道分必物乳酸桿菌密度分布明顯低于對(duì)照組，經(jīng)Ridit分析差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。由于乳酸桿菌減少，產(chǎn)H2O2的量也顯著下降，同時(shí)pH值明顯升高。有研究證明，乳酸桿菌的抗菌性能與擴(kuò)散抑制物質(zhì)，主要是乳酸有關(guān)；乳酸桿菌產(chǎn)生的H2O2及其他微生物因子，可抑制和殺滅其他細(xì)菌增殖[1]。一旦乳酸桿菌在陰道菌群中失去優(yōu)勢(shì)，其他菌群就會(huì)過(guò)度生長(zhǎng)，造成陰道菌群的失調(diào)，引發(fā)疾病[2]。從BV組的Nugent的評(píng)分和加特納菌/普雷沃菌的的密度比較和pH的結(jié)果也充分說(shuō)明這一點(diǎn)，而B(niǎo)V組患者的動(dòng)彎桿菌的密集度和對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，可見(jiàn)本地區(qū)細(xì)菌性陰道炎主要是由加特納菌/普雷沃菌引起，而彎動(dòng)桿菌感染少見(jiàn)。VVC組患者陰道分泌物乳酸桿菌密度分布和對(duì)照組相比也低于對(duì)照組，Nugent評(píng)分和pH值均高于對(duì)照組，說(shuō)明真菌感染時(shí)陰道乳酸桿菌處于低水平狀態(tài)。肖冰冰等[2]報(bào)道VVC患者陰道微生態(tài)乳酸桿菌可正常，亦可減少或消失。本文也發(fā)現(xiàn)有VVB患者陰道分必物乳酸桿菌正常，pH值正常，H2O2下降。但這類(lèi)患者不多，VVC患者還是乳酸桿減少，pH升高，H2O2陽(yáng)性為多數(shù)。TV患者陰道分泌物乳酸桿菌密度分布和對(duì)照組相比明顯低于對(duì)照組，Nugent評(píng)分pH值高于對(duì)照組。上述陰道疾患者重陰道分泌物的乳酸桿菌下降程度、pH高低及Nugen評(píng)分評(píng)分有所不同，但和對(duì)照組相比都有顯著差異。另外我們還發(fā)現(xiàn)，有些鏡檢標(biāo)本乳酸桿菌含量達(dá)到60%～70%，但干化學(xué)測(cè)定H2O2陽(yáng)性，有些沒(méi)發(fā)現(xiàn)乳桿菌的標(biāo)本卻H2O2陰性。因此乳酸桿菌不一定是H2O2陰性，H2O2并非是乳酸桿菌產(chǎn)生，診斷時(shí)要根據(jù)具體情況作出判斷。

綜上所述，乳桿菌是維持陰道微生態(tài)平衡的重要菌群，其通過(guò)粘附定植、免疫調(diào)節(jié)、分泌細(xì)菌素、類(lèi)細(xì)菌素物質(zhì)等多種途徑抑制其他微生物的生長(zhǎng)。同時(shí)乳酸桿菌自身的生存也容易受到如陰道微環(huán)境、性生活等多種因素的影響，導(dǎo)致陰道微生態(tài)失衡，誘發(fā)多種婦科疾病[3]。在治療這些疾病的過(guò)程中常用殺菌和殺蟲(chóng)的藥物，在殺菌殺蟲(chóng)的同時(shí)也殺滅了乳酸桿菌，使陰道微生態(tài)失去了平衡，很容易造成復(fù)發(fā)或再感染。據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道經(jīng)過(guò)抗菌治療后用乳菌桿菌治療重建陰道微生態(tài)平衡，復(fù)發(fā)率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于單一的抗生素治療[4-7]。因些在日常生活和疾病的治療過(guò)程中都要注意建立陰道微生態(tài)的正常平衡，以提高療效，降低復(fù)發(fā)率。

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Correlation of lactobacilli and bacterial vaginosis,vulvovaglnal candidiasis and trichomonal vaginitis in female reproductive tract.

HUANG Ya-ye,TANG Wei-zheng,SUN Hong-gao,XU Dan-ni,QIU Hai-ping,PAN Fang-die.Department of Clinical Laboratory,the Second Affiliated Hospital of Hainan Medical University,Haikou 570203,Hainan,CHINA

ObjectiveTo evaluate the correlation of lactobacilli with bacterial vaginosis(BV),vulvovaglnal candidiasis(VVC)and trichomonal vaginitis(TV)in female reproductive tract.MethodsGynecological outpatients in our hospital from December 2016 to May 2017 were enrolled in the study,including 136 BV patients,126 VVC patients,and 100 TV patients.Besides,130 healthy subjects for physical examination were selected as the control group.Vaginal microecology diagnostic system was used to detect the bacteria and the density of bacteria in vaginal discharge.Dry chemistry method was used to detect pH,H2O2,leukocyte enzymes and salivary gland enzymes.The levels of lactobacilli in BV patients,VVC patients,TV patients,and the control group were compared.ResultsThe pH values were(4.8±0.3)in BV patients,(4.4±0.3)in VVC patients,and(5.4±0.4)in TV patients,which were significantly higher than(4.1±0.2)in control group(P＜0.05).The Nugent scores were(7.0±1)in BV patients,(3.0±1)in VVC patients and(4.0±1)in TV patients,which were significantly higher than(0.2±0.1)in the control group(P＜0.05).The H2O2negative rates were 5.3%(8/136)in BV patients,18.3%(23/130)in VVC patients,and 9%(9/100)in TV patients,which were significantly lower than 100%(130/130)in the control group(P＜0.01).The density of lactobacillus in BV,VVC,TV patients was significantly lower than that in the control group,and that ofGardnerella vaginalis/Prevotella intermediuswas significantly higher than that of the control group(P＜0.05).ConclusionLoss or reduction of lactobacillus is an important factor in vaginal diseases during the treatment process,and the recovery of the number of lactobacilli can be used as one of the criteria to evaluate the efficacy.

Vaginal microecology;Lactobacilli;Bacterial vaginitis(BV);Vulvovaglnal candidiasis(VVC);Trichomonal vaginitis(TV)

R711.73

A

1003—6350（2017）18—3001—04

2017-07-17)

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.18.022

黃業(yè)亞。E-mail：huangyeya@126.com