張春梅++袁貞明++田秀成++鄭紅艷++張紅麗

摘要：目的 探討熱休克蛋白90（Heat shock protein90，HSP90）、Bcl-2（B-cell lymphoma-2）在卵巢上皮癌組織中的表達及臨床意義。方法 采用SP免疫組織化學法檢測47例卵巢上皮癌組織中HSP90、Bcl-2的表達情況，以25例交界性卵巢上皮性腫瘤組織和13例良性卵巢上皮性腫瘤組織作對照，對結果進行綜合分析。結果 在卵巢上皮癌組織中HSP90、Bcl-2的陽性表達比良性和交界性卵巢上皮性腫瘤組織中的表達顯著增高；在卵巢上皮癌組織中HSP90、Bcl-2的陽性表達隨卵巢上皮癌的FIGO臨床分期升高，組織分化降低陽性表達增強，并與有無淋巴結轉移密切相關；提示二者聯(lián)合檢測對卵巢上皮癌的發(fā)生、發(fā)展、評估預后及降低腫瘤耐藥的發(fā)生有重要意義，有助于對患者治療和預后的監(jiān)測。結論 聯(lián)合檢測卵巢上皮癌中HSP90、Bcl-2的表達可以成為卵巢上皮癌的早期診斷，監(jiān)測腫瘤耐藥，指導免疫治療和靶向治療及判斷預后可靠的實驗室指標之一。

關鍵詞：卵巢上皮癌；熱休克蛋白 90；Bcl-2；免疫組織化學

中圖分類號：R737.31 文獻標識碼：A 文章編號：1006-1959（2017）19-0045-03

Expression and Significance of Heat Shock Protein 90 and Bcl-2 in Epithelial Ovarian Cancer

ZHANG Chun-mei1，YUAN Zhen-ming1，TIAN Xiu-cheng2，ZHENG Hong-yan1，ZHANG Hong-li1

（1.Department of Obstetrics and Gynecology，Maternal and Child Health Hospital of Shouguang City，

Shouguang 262700，Shandong， China；

2.Center for Disease Control and Prevention，Shouguang 262700，Shandong，China）

Abstract：Objective To investigate the heat shock protein 90（Heat shock，Protein90，HSP90），Bcl-2（B-cell lymphoma-2）expression in epithelial ovarian carcinoma and its clinical significance.Methods The expressions of HSP90 and Bcl-2 in 47 cases of ovarian epithelial carcinoma were detected by SP immunohistochemical method.25 cases of borderline ovarian epithelial tumor and 13 cases of benign ovarian epithelial tumor were used as controls，the results were comprehensively analyzed.Results The positive expression of HSP90 and Bcl-2 in ovarian epithelial carcinoma was significantly higher than that in benign and borderline ovarian epithelial tumor tissues.The positive expression of HSP90 and Bcl-2 in ovarian epithelial carcinoma was associated with the increase of FIGO of ovarian epithelial carcinoma and the decrease of histological differentiation，and it was closely related to lymph node metastasis.Suggesting that the combination of the two detection of ovarian epithelial cancer in the occurrence， development，assessment of prognosis and reduce the occurrence of tumor resistance is important to help patients with treatment and prognosis of the monitoring.Conclusion The combined detection of HSP90 and Bcl-2 expression in ovarian epithelial carcinoma can be one of the early laboratory indicators of early diagnosis of ovarian epithelial carcinoma，monitoring tumor resistance，guiding immunotherapy and targeted therapy and judging prognosis.

Key words：Ovarian epithelial carcinoma；Heat shock protein 90；Bcl-2；Immunohistochemistryendprint

卵巢癌是女性生殖道腫瘤中最常見的三大惡性腫瘤之一，其死亡率居三位之首。其中90%的卵巢癌是體腔上皮來源的惡性腫瘤，具有起病隱匿，易轉移，易復發(fā)等特點，70%的卵巢癌患者診斷時已是晚期。近年來卵巢上皮癌的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢，隨著手術、放療、化療、生物及基因等綜合方法的應用，5年生存率雖有較大提高，但晚期患者因存在耐藥或不耐受化療反應等問題療效甚微，5年生存率仍在30%左右[1]。因此早期判斷腫瘤組織的惡變傾向，惡性程度及轉移危險性對指導臨床治療，改善預后和提高生存率具有重要作用。我院采用SP免疫組化法聯(lián)合檢測HSP90、Bcl-2在卵巢上皮癌組織中的表達情況，綜合分析，以期對卵巢上皮癌的早期監(jiān)測，指導免疫治療和靶向治療及評價預后有新的導向作用，為臨床提供新的可靠的實驗室依據(jù)。

1 材料與方法

1.1標本來源

收集2010年3月～2014年12月我院婦產(chǎn)科收治，經(jīng)開腹或腹腔鏡手術證實的卵巢腫瘤患者，其中卵巢上皮癌患者47例，平均年齡（51.84±10.68）歲；交界性卵巢上皮性腫瘤患者25例；良性卵巢上皮性腫瘤患者13例為研究對象。所有病例均經(jīng)病理確診。所采用的卵巢上皮癌組織術前均無放、化療史。

組織標本：選用患者對應的卵巢腫瘤組織，10%福爾馬林固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，制成4 μm切片備用。

1.2方法

免疫組化采用ElivisionTMplus二步法：石蠟切片脫蠟，水化后磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗，過氧化物阻斷劑封閉過氧化物酶活性，加一抗，室溫孵育，加二抗，滴加DAB顯色，蘇木精復染，常規(guī)脫水，透明封固。HSP90、Bcl-2、CD34均為鼠抗人單克隆抗體，購于北京中山金橋生物技術有限公司。已知的卵巢上皮癌陽性片作陽性對照；以PBS代替一抗作陰性對照。

1.3結果判定

HSP90陽性信號為胞漿呈棕黃色顆粒；Bcl-2陽性信號為胞漿/胞膜呈棕黃色顆粒為準。根據(jù)Beeasley免疫組化評分方法，按陽性細胞所占百分比并參考著色強度判斷分級：無明顯陽性細胞為（-）；陽性細胞數(shù)<25%為（+）；25%-50%為（++），>50%為（+++）。

1.4統(tǒng)計學方法

采用SPSS18.0軟件進行統(tǒng)計學分析，兩組樣本均數(shù)比較采用非參數(shù)檢驗（Mann-Whitney法），兩個樣本率的比較采用？字2檢驗，兩指標間相互關系采用Spearman相關分析，P<0.05有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1在卵巢腫瘤組織中HSP90、CD34標記的MVD、Bcl-2的表達情況

由表1可見，卵巢上皮癌組與交界性、良性卵巢上皮性腫瘤組相比HSP90、Bcl-2表達的陽性率顯著升高（均P<0.05）；二者高表達呈正相關。良性與交界性卵巢上皮性腫瘤兩組間HSP90、Bcl-2表達的陽性率差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

2.2 HSP90、Bcl-2在卵巢上皮癌組織中的表達與各臨床病理參數(shù)的關系

由表2可知年齡>50歲與年齡≤50歲的患者相比， HSP90表達的陽性率顯著增高（H=2.124，P=0.034），有統(tǒng)計學意義（P<0.05） 。HSP90、 Bcl-2在各組織類型中無顯著差異（均 P>0.05）；在組織分化和FIGO臨床分期中 ，隨組織分化降低，臨床分期增高HSP90和 Bcl-2的表達逐漸增強（均P<0.05），有統(tǒng)計學意義。在有、無淋巴結轉移中，HSP90和 Bcl-2陽性表達差異顯著（均P<0.05），有統(tǒng)計學意義。

3 討論

腫瘤的形成是由多種因素形成的，其中一個重要因素是由于腫瘤細胞的免疫原性低下，逃逸了機體的免疫監(jiān)視。腫瘤細胞不斷增殖，合成代謝增強，突變或異常蛋白質(zhì)的存在刺激了HSP70的合成，需要大量HSP70來調(diào)節(jié)和穩(wěn)定這一異常增殖過程，HSP90作為HSP70的輔分子伴侶依賴三磷酸腺苷（ATP）的作用參與多分子伴侶復合物的裝配，還參與腫瘤血管的生長侵襲及轉移。在腫瘤組織中突變的不正常的蛋白可刺激HSP90的合成，HSP90可通過構像的特異性與其他一些輔分子伴侶結合，形成各種不同的超級蛋白復合體，與HSP90的ATP酶循環(huán)相匹配，起調(diào)節(jié)作用。這些HSP90的受體蛋白包括跨膜酪氨酸激酶（原癌基因HER-2/neu蛋白，上皮生長因子受體、胰島素樣生長因子1受體）、蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）促分裂原活化蛋白激酶（Raf-1）原癌基因蛋白P53等，與細胞周期調(diào)節(jié)、細胞轉化以及細胞存活和凋亡的信號轉到通路有關，對保持腫瘤癌變過程中的多條關鍵信號轉導通路的穩(wěn)定性起著關鍵作用。HSP90可通過其受體蛋白多途徑多環(huán)節(jié)影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展進程[2]。抑制HSP90的功能可導致其“客戶”蛋白的降解，下調(diào)多種下游蛋白來調(diào)節(jié)多種細胞信號轉導通路，從而達到對腫瘤的“多點攻擊”，達到抑制腫瘤的生長、轉移，HSP90已成為腫瘤治療的新靶點[3]。

在本研究中HSP90 在良性和交界性卵巢上皮性腫瘤組織中有少量表達，在卵巢上皮癌組織中呈高表達。在卵巢上皮癌組織和交界性卵巢上皮性腫瘤組織中表達差異顯著，與HSP90在正常細胞中處于靜默態(tài)，在腫瘤細胞中處于活化態(tài)的特性相一致[3]，說明HSP90具有促進卵巢上皮性腫瘤發(fā)生惡變的功能。在臨床治療中通過檢測HSP90在卵巢上皮腫瘤組織中的表達活性，有效阻斷三磷酸腺苷（ATP）/二磷酸腺苷（ADP）結合位點，即格爾德霉素（GA）特異性結合的靶點，對抑制卵巢上皮性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有重要意義。在年齡方面HSP90的陽性表達存在顯著差異，說明年齡可導致HSP90與腫瘤細胞中的突變蛋白因子結合的程度增高，促進腫瘤的生長，預示預后不良。HSP90可作為某些抗癌藥的分子伴侶促進藥物進入細胞，發(fā)揮選擇性抗癌活性，有效抑制了與其下游靶基因啟動子的結合，與治療密切相關[2]。在組織分化、臨床分級、淋巴結轉移方面均存在顯著差異，說明HSP90在卵巢上皮癌組織中的高表達與卵巢上皮癌的組織分化程度，淋巴結轉移有不同程度的相關，可能參與了腫瘤的腫瘤組織內(nèi)的形成、腫瘤存活和侵襲轉移。腫瘤組織內(nèi)的HSP90通常和一些蛋白組成有活性的多伴侶復合物，三磷酸腺苷（ATP）的活性比正常組織內(nèi)HSP90高，使HSP90抑制劑具有一定的靶向性，可用于腫瘤及轉移灶的定位診斷，提高腫瘤細胞對其他化療藥物的敏感性[3]。endprint

卵巢上皮癌的發(fā)生發(fā)展過程中存在著癌基因的激活、抑癌基因的失活、凋亡調(diào)控基因的失調(diào)等各種異常表達情況[6]。Bcl-2作為具有抑制凋亡作用的基因，可以定位于不同細胞的線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及核膜上，組織線粒體細胞色素C的釋放，從而發(fā)揮抗凋亡作用[4]。其過度表達可抑制細胞凋亡，促進細胞生存，從而延長細胞壽命，引起細胞異常積累，導致腫瘤的發(fā)生。Bcl-2的過表達可使腫瘤細胞對化療藥物不敏感，是一些腫瘤細胞產(chǎn)生耐藥的機制之一，可誘導卵巢上皮性腫瘤有抗鉑類作用[5]。

本研究中Bcl-2在良性、交界性卵場上皮性組織及卵巢上皮癌組織中的表達依次增強，說明Bcl-2在卵巢上皮性腫瘤中的表達與腫瘤的惡性程度成相關。Bcl-2的過度表達會增加其他基因突變機會，并使突變基因聚集在細胞內(nèi)，從而發(fā)揮其抗凋亡活性，使正常細胞向腫瘤細胞轉變，從而促進腫瘤細胞的惡性增殖[6]。在細胞分化和臨床分期方面，隨著腫瘤細胞分化程度的增加Bcl-2基因的過度表達顯著增強，中晚期的卵巢上皮癌組織中Bcl-2基因的高表達率明顯高于早期。在淋巴結轉移方面差異顯著，說明Bcl-2基因的高表達與預后密切相關。Bcl-2在腫瘤的形成及腫瘤耐藥的形成中起重要作用，細胞凋亡對腫瘤的生長起著負調(diào)控作用，是抗腫瘤的重要途徑[8-10]。Bcl-2過度表達時腫瘤細胞對化療劑不敏感，在一定濃度化療劑作用下，腫瘤細胞不死或凋亡明顯降低，可誘導卵巢癌細胞對鉑類產(chǎn)生耐藥，說明Bcl-2高表達抑制細胞凋亡而產(chǎn)生腫瘤細胞耐藥[7]，從而導致化療效果降低或失敗，影響對患者的生存效價的評估。提示卵巢上皮癌組織中Bcl-2低表達可能提高癌組織對放化療等誘導凋亡治療的易感性，以Bcl-2基因為靶點，下調(diào)Bcl-2基因表達，可促進細胞凋亡，逆轉耐藥。

通過對HSP90、Bcl-2進行聯(lián)合檢測可以有效判斷卵巢上皮癌發(fā)生演變過程，評價預后，提高化療效果，有針對性地提供靶向治療和生物治療，降低腫瘤耐藥的發(fā)生率，提高患者的生存率，可以作為一個新的實驗室監(jiān)測指標。

參考文獻：

[1]李雅靜，石紅.HSP70、突變型P53在復發(fā)性、耐藥性卵巢癌中的表達及臨床意義[J].山西職工醫(yī)學院學報，2012，22（6）：15-19.

[2]劉明強，李良慶，傅冷西.熱休克蛋白90與腫瘤關系的研究進展[J].醫(yī)學綜述，2008，14（5）：682-684.

[3]蔡志華，盧輝山.熱休克蛋白90在防治腫瘤方面的研究進展[J].醫(yī)學綜述，2008，14（4）：559-562.

[4]賈煒.Bcl-2家族研究進展[J].當代醫(yī)學，2012，18（3）：26-28.

[5]王穎欣，韓萍，陳燕.上皮性卵巢癌組織中Bcl-2與Bax蛋白的表達與化療耐藥關系的探討[J].中國婦幼保健，2012，27（2）：284-286.

[6]郝志強，李曉鳳.Bcl-2基因表達與上皮性卵巢癌的研究進展[J].癌癥進展，2013，11（4）：341-344.

[7]徐曉輝，申愛榮.上皮性卵巢癌組織中COX-2與Bcl-2的表達及其意義[J].廣東醫(yī)學，2010，31（24）：3220-3222.

[8]王藝，帥經(jīng)緯，李隆玉，等.雌孕激素對人上皮性卵巢癌裸鼠模型卵巢組織中Bcl-2表達的影響[J].實用癌癥雜志，2015，30（1）：10-12.

[9]陳瑩. P53蛋白和Bcl-2蛋白在卵巢上皮性癌中的表達和意義及其與化療耐藥的相關性研究[D]. 哈爾濱醫(yī)科大學， 2010.

[10]麥虹， 龍風宜， 溫冠媚，等. 熱休克蛋白40 mRNA在卵巢上皮性癌中的表達及意義[J]. 實用婦產(chǎn)科雜志， 2010， 26（2）：121-123.

編輯/成森endprint