羅 萌 楊 梅 曾 勇

(1 四川中醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校,綿陽(yáng),621000; 2 四川省八一康復(fù)中心,成都,6111303; 3 綿陽(yáng)市中醫(yī)院,綿陽(yáng),621000)

“智七針”對(duì)非癡呆型血管性認(rèn)知功能障礙的影響及其部分機(jī)制研究

羅 萌1,3楊 梅2曾 勇3

(1 四川中醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校,綿陽(yáng),621000; 2 四川省八一康復(fù)中心,成都,6111303; 3 綿陽(yáng)市中醫(yī)院,綿陽(yáng),621000)

目的:觀(guān)察“智七針”對(duì)非癡呆型血管性認(rèn)知功能障礙的臨床療效及探討其部分機(jī)制。方法：選取2013年1月至2015年1月綿陽(yáng)市中醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科就診的VCIND患者60例,隨機(jī)分為對(duì)照組和觀(guān)察組,每組30例,2組患者均口服多奈哌齊(5 mg/次,1次/d)或石杉?jí)A甲(100 μg/次,2次/d),觀(guān)察組在此基礎(chǔ)上加“智七針”,1次/d,30 min/次,針刺5次/周。2組患者均連續(xù)治療3個(gè)月,分別比較2組患者治療前、治療1個(gè)月及治療3個(gè)月后蒙特利爾量表(Montreal scale,MoCA)、數(shù)字廣度(Digit Span,DST)、聽(tīng)覺(jué)詞語(yǔ)學(xué)習(xí)測(cè)試(Auditory Words Learning Test,AVLT)及語(yǔ)言流暢性測(cè)試(language fluency test,VFT)的變化,同時(shí)檢測(cè)2組治療前后外周血清JNK信號(hào)通路上標(biāo)志性蛋白表達(dá)變化。結(jié)果:1)治療1個(gè)月后觀(guān)察組在MoCA總分、AVLT總分及VFT較治療前明顯增加,與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而DST評(píng)分2組治療后均較治療前改善(P<0.05),但治療后2組評(píng)分相仿(P>0.05)。治療3個(gè)月后觀(guān)察組MoCA、AVLT及VFT均明顯優(yōu)于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。DST評(píng)分2組治療后3個(gè)月后組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2)2組治療后pJNK濃度較治療前下降,其中觀(guān)察組下降趨勢(shì)較明顯(P<0.05)。結(jié)論:智七針可明顯改善非癡呆型血管性認(rèn)知功能障礙患者認(rèn)知能力,其作用機(jī)制可能與降低JNK磷酸化有關(guān)。

血管性認(rèn)知功能障礙;非癡呆型;智七針;JNK;磷酸化

血管性認(rèn)知功能障礙(Vascular Cognitive Impairment,VCI)包括所有由血管因素導(dǎo)致或與其相關(guān)的不同類(lèi)型不同程度的認(rèn)知損傷,其分為非癡呆性血管性認(rèn)知功能障礙(Vascular Cognitive Impairment No Dementia,VCIND)、血管性癡呆(Vascular Dementia,VD)及混合型癡呆。隨著病情的逐漸發(fā)展VClND可進(jìn)展為VD或混合型癡呆,嚴(yán)重影響患者日常生活能力,所產(chǎn)生的傷害遠(yuǎn)大于器質(zhì)性損傷[1],因此改善VCIND是目前臨床刻不容緩的任務(wù)?！爸瞧哚槨笔窃谠从诮鸾淌诘摹爸侨槨奔八纳襻?多年臨床證實(shí)其可明顯改善認(rèn)知功能障礙患者的認(rèn)知能力,但其改善認(rèn)知功能的作用機(jī)制尚未明了。近年來(lái)研究顯示JNK信號(hào)通路其通過(guò)參與管理神經(jīng)元細(xì)胞的的增殖凋亡,從而與神經(jīng)系統(tǒng)的學(xué)習(xí)和記憶能力關(guān)系密切,因此我們?cè)O(shè)想:“智七針”改善認(rèn)知功能是否通過(guò)JNK信號(hào)通路進(jìn)行介導(dǎo)？因此本團(tuán)隊(duì)進(jìn)行一系列臨床觀(guān)察研究,為目前熱門(mén)的臨床診療提供切實(shí)可行的依據(jù)。

1資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月至2015年1月綿陽(yáng)市中醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科就診的VCIND患者60例納入研究。2組患者一般資料的比較見(jiàn)表1。

表1 2組患者一般資料的比較

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 1)符合2006年中國(guó)防治認(rèn)知功能障礙專(zhuān)家共識(shí)專(zhuān)家組制定的關(guān)于VCIND的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2];2)年齡≤70歲;3)輔助檢查提示存在血管性因素,如腦出血、腦梗死、糖尿病、腦白質(zhì)變性等;4)近1個(gè)月內(nèi)未服用改善認(rèn)知藥物者;5)日常生活能力未受影響。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) 1)年齡超過(guò)70歲者;2)NIHSS評(píng)分大于3分者;3)存在失語(yǔ)、精神癥狀、意識(shí)不清者;4)有肝腎等重大臟器病變或合并腫瘤或營(yíng)養(yǎng)不良性腦病者;5)近1個(gè)月內(nèi)服用過(guò)改善認(rèn)知藥物者;6)患者或家屬不予簽署知情同意書(shū)者。

1.4 治療方法 2組患者口服鹽酸多奈哌齊(衛(wèi)材(中國(guó))藥業(yè)有限公司生產(chǎn),國(guó)藥準(zhǔn)字H20050978)，1次/d,10 mg/次,或石杉?jí)A甲(上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司生產(chǎn),國(guó)藥準(zhǔn)字H1096133)100 μg/次,2次/d。觀(guān)察組在上述改善認(rèn)知基礎(chǔ)治療上加用“智七針”,具體操作如下:1)主穴:智三針聯(lián)合四神針。2)配穴:痰濁蒙竅證型選足三里、豐隆、陰陵泉;氣滯血瘀證型選血海、膈俞、合谷;脾腎兩虛證型加脾俞、腎俞、足三里、太溪、絕骨;心火旺盛證型選太沖、行間,證型參考中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)老年病分會(huì)制定的關(guān)于呆病的證型依據(jù)[3]。操作方法:所有患者取穴部位嚴(yán)格消毒,取30號(hào)華佗牌不銹鋼針刺入至帽狀腱膜下層約15～20 mm,得氣為度,行針1次/10 min,1次持續(xù)針刺30 min，1次/d，5次/周。

1.5 觀(guān)察指標(biāo)

1.5.1 蒙利特爾認(rèn)知評(píng)估量表 此表格包括視空間、命名、記憶、語(yǔ)言、延遲回憶、定向力等8方面的內(nèi)容,總分為30分,患者如果受教育年限短于12年則分?jǐn)?shù)加1分進(jìn)行校正。

1.5.2 DST、AVLT及VFT檢測(cè) 這2項(xiàng)屬于單項(xiàng)神經(jīng)心理學(xué)測(cè)試內(nèi)容,其中DST包括正序及倒序背誦數(shù)字的廣度,主要體現(xiàn)患者的注意力及瞬時(shí)記憶力。AVLT主要參照華山醫(yī)院修訂的版本進(jìn)行檢測(cè),主要體現(xiàn)患者最多詞語(yǔ)數(shù)量、再認(rèn)詞語(yǔ)數(shù)量,主要體現(xiàn)短時(shí)記憶、長(zhǎng)時(shí)記憶及記憶重建等方面能力。VFT主要觀(guān)察患者1 min內(nèi)所說(shuō)出的城市名稱(chēng)數(shù)量、動(dòng)物數(shù)量或城市與動(dòng)物交叉表達(dá)的數(shù)量,主要檢測(cè)患者構(gòu)思流暢性。

1.5.3 Western blotting檢測(cè)JNK、pJNK濃度 將外周血加入淋巴細(xì)胞分離液提取外周血單核細(xì)胞,利用含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基將提取的細(xì)胞置于置于37 ℃,5% CO2環(huán)境中培養(yǎng)4～6 h,隨后以3 000 r/min 4 ℃離心10 min,收集細(xì)胞,然后加入細(xì)胞裂解液,充分裂解后置于4 ℃ 12 000 r/m離心機(jī)離心10 min。取上清液獲取總蛋白,再根據(jù)DAB方法對(duì)所提蛋白液進(jìn)行濃度測(cè)定,之后以100 μL蛋白液中加入25 μL的上樣緩沖液于100 ℃金屬浴中變性,接著可按照每泳道上樣量為50 g蛋白,計(jì)算上樣量,電泳(4%濃縮膠,12%分離膠,120 V,50 mA,1.5 h)結(jié)束后將凝膠取出,用PVDF膜轉(zhuǎn)印,遵循膠在負(fù)極,膜在正極的原則,50 V,100 mA,2 h,5%脫脂奶粉液的封閉2 h,TBS洗3次，5 min/次,分別加入5%脫脂奶粉按1∶1 000稀釋的抗JNK、pJNK和β-actin抗體(1∶1 000),4 ℃孵育過(guò)夜,TBS洗3次，5 min/次,加入堿性磷酸酶標(biāo)記山羊抗兔IgG(1∶2 000)室溫2 h,TBS洗3次，5 min/次。將濾膜放人配好的顯色液中顯色15～30 min,計(jì)算機(jī)掃描圖像,并由生物圖像分析系統(tǒng)Bio-Rad公司,Model Gel Doc 2000,美國(guó))分析處理。

2結(jié)果

2.1 “智七針”可提高患者的認(rèn)知能力 治療1個(gè)月后觀(guān)察組在MoCA總分、AVLT總分及VFT較治療前明顯增加,與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而DST評(píng)分2組治療后均較治療前改善(P<0.05),但治療后2組評(píng)分相仿(P>0.05)。治療3個(gè)月后觀(guān)察組MoCA、DST、AVLT及VFT均明顯優(yōu)于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)具體見(jiàn)表2至5。

表2 2組MoCA、DST、AVLT和VFT評(píng)分比較(分

注:與治療前比較*P<0.05;與同時(shí)期對(duì)照組比較△P<0.05;與同組治療后1個(gè)月比較▲P<0.05

2.2 “智七針”可降低JNK磷酸化程度 經(jīng)過(guò)3個(gè)月治療,我們發(fā)現(xiàn)2組患者外周血pJNK濃度較治療前下降,其中觀(guān)察組下降趨勢(shì)較明顯(P<0.05)。見(jiàn)圖1。

圖1 2組治療前后外周血JNK濃度的比較

3討論

一項(xiàng)臨床薈萃分析顯示VCIND患者可出現(xiàn)各個(gè)認(rèn)知領(lǐng)域的損傷,有研究人員通過(guò)對(duì)VCIND患者顱腦fMRI數(shù)據(jù)分析后證實(shí)不同亞型的VCIND腦血流量的下降區(qū)域與認(rèn)知受損特征具有高度一致性。導(dǎo)致VCI病因多樣,因此有專(zhuān)家指出盡早識(shí)別及控制危險(xiǎn)因素,如控制血壓、血糖、調(diào)節(jié)脂肪代謝及抗栓,是預(yù)防VCI的關(guān)鍵?；颊唠m然接受改善腦循環(huán)、營(yíng)養(yǎng)腦神經(jīng)等治療,但臨床效果一直差強(qiáng)人意[4-9]。近年來(lái)中醫(yī)尤其是針灸以療效顯著、安全性高等特點(diǎn)被諸多臨床工作者所認(rèn)可。在多年的臨床工作中我們發(fā)現(xiàn)“智七針”可明顯改善患者認(rèn)知,本研究對(duì)臨床治療進(jìn)行總結(jié)結(jié)果顯示“智七針”確可明顯改善患者關(guān)于記憶、語(yǔ)言表達(dá)等各認(rèn)知領(lǐng)域的認(rèn)知能力,但我們發(fā)現(xiàn)治療1個(gè)月時(shí)2組患者組間認(rèn)知能力能力相仿,直至治療3個(gè)月后組間上述指標(biāo)差異才具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,因此我們認(rèn)為銀“智七針”的確可明顯改善老年性癡呆患者的認(rèn)知能力,但其具有一定的時(shí)間依賴(lài)性。

“智七針”是將廣州中醫(yī)藥大學(xué)靳瑞教授的智三針及四神針結(jié)合合成,在以往大量文獻(xiàn)[10-12]我們可知智三針及四神針具有想的醒腦開(kāi)竅作用,其取得的臨床療效不勝枚舉,“智七針”中神庭穴屬于督脈,是機(jī)體元神所藏之處,具有調(diào)和陰陽(yáng)、醒腦開(kāi)竅的作用,本神穴是足少陽(yáng)膽經(jīng)之氣的源頭,有主宰神靈之說(shuō)。四神針包括前頂、后頂、絡(luò)卻,主治智力低下、精神障礙、癡呆等與“神”或“志”相關(guān)的疾病,此外在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中智三針位于大腦額葉體表透射區(qū),而四神針位于頂葉及顳葉體表透射區(qū),額、頂級(jí)顳葉與人類(lèi)智力及情感關(guān)系密切,因此“智七針”可調(diào)控人類(lèi)高級(jí)思維,針刺后產(chǎn)生的針感刺激大腦皮質(zhì),在皮層-丘腦-皮層軸的作用下,針感可對(duì)大腦產(chǎn)生正性刺激,對(duì)大腦神經(jīng)產(chǎn)生修復(fù)效應(yīng),從而達(dá)到治療目的。然后“智七針”通過(guò)何途徑介導(dǎo)大腦神經(jīng)修復(fù),目前尚無(wú)定論,因此其亦成為本研究的探索內(nèi)容之一。通過(guò)查閱大量文獻(xiàn)[13-14]我們得知JNK信號(hào)通路的標(biāo)志性蛋白JNK是絲裂原活化蛋白激酶家族重要成員,其不但介導(dǎo)機(jī)體應(yīng)激、炎性反應(yīng)等環(huán)節(jié),還大量參與細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、凋亡各方面,其是參與神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的重要因子,JNK磷酸化后可發(fā)揮促凋亡作用,從而導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡加速,JNK是機(jī)體多條重要信號(hào)通路的共同作用點(diǎn),對(duì)記憶、學(xué)習(xí)以及各類(lèi)情緒變化均具有重要的維持及調(diào)節(jié)作用。諸多動(dòng)物研究顯示抑制大鼠海馬JNK的表達(dá),大鼠的記憶力出現(xiàn)明顯上升。在本研究中我們對(duì)2組患者治療前后外周血清的JNK濃度進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)總JNK濃度未出現(xiàn)變化,而其磷酸化程度發(fā)生變化,組患者外周血pJNK濃度較治療前下降,其中觀(guān)察組下降趨勢(shì)較明顯(P<0.05),這一結(jié)果提示“智七針”可改善非癡呆型血管性認(rèn)知功能障礙患者認(rèn)知功能的作用機(jī)制可能與抑制JNK磷酸化程度有關(guān)。

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(2016-11-14收稿 責(zé)任編輯：王明)

StudyonEffectsof“IntelligenceSevenNeedles”onVascularCognitiveImpairmentofNon-DementiaandthePartialMechanism

Luo Meng1,3, Yang Mei2, Zeng Yong3

(1SichuanCollegeofTraditionalChineseMedicine,Mianyang621000,China; 2Sichuan81RehabilitationCenter,Chengdu611130,China; 3MianyangHospitalofTCM,Mianyang621000,China)

Objective:To observe the clinical curative effects of “Intelligence Seven Needles” on vascular cognitive impairment of non-dementia (VCIND),and to explore the partial mechanism.Methods:A total of 60 cases of patients with VCIND were included and randomly divided into the control group and the treatment group, 30 cases in each group.Both of the two groups were receiving oral administration of donepezil (5 mg/time, qd) or huperzine A (100 μg/time, bid), and the treatment group was added “Intelligence Seven Needles”, once a day, 30 min per time, and5 times per week.After continuous treatment for 3 months, the changes of Montreal scale (MoCA), digit span (DST), auditory verbal learning test (AVLT) and voice fluency test (VFT) between the two groups at the time that before treatment, 1 month and 3 months after treatment were compared, and trademark protein expression changes of JNK signaling pathway in the peripheral blood before and after the treatment between the two groups were detected.Results:1) MoCA score, AVLT score and VFT score were significantly increased after 1 month′s treatment, and the differences were statistically significant compared with control group (P<0.05).The DST scores were improved in two groups after treatment (P<0.05), but the scores were similar in the two groups after treatment (P>0.05).MoCA, AVLT and VFT in the treatment group after three months′ treatment were better than that in the control group, and the differences were statistically significant (P<0.05).There were no statistical differences of DST scores between the two groups after 3 months′ treatment (P>0.05).2) The concentration of pJNK in the two groups decreased after treatment, and the decrease trend of the treatment group was more significantly (P<0.05).Conclusion:“Intelligence Seven Needles” can significantly improve the cognitive ability of patients with VCIND, and its mechanism may be associated with the lower of JNK phosphorylation.

Vascular cognitive impairment； Non-dementia； Intelligence Seven Needles； JNK； Phosphorylation

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81173169) 作者簡(jiǎn)介:羅萌(1980.03—)女,碩士,講師,研究方向:臨床中醫(yī)康復(fù)治療和中醫(yī)康復(fù)實(shí)訓(xùn)技術(shù)研究，E-mail:195325310@qq.com

R259

：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2017.09.046