韓丹丹

哈藥集團(tuán)制藥六廠 150000

HPLC法測(cè)定顛茄磺芐啶片中的SMZ和TMP的含量

韓丹丹

哈藥集團(tuán)制藥六廠 150000

目的：探討高效液相色譜法在對(duì)顛茄磺芐啶片中兩種成分的含量測(cè)定中所起到的作用及可行性。方法：采用ZorbaxSB-C.色譜柱(150mmx4.6mm，5μm)，以pH為2.5的0.025μg·mL-1磷酸鹽緩沖液一乙腈(75：25)為流動(dòng)相，流速為1.0μg·mL-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，進(jìn)樣量20，用外標(biāo)法測(cè)定。結(jié)果：SMZ在16—160μg·mL-1范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好(r=0.9999)，平均回收率為99.75%，RSD為0.35%，TMP在3.2—32μg·mL-1范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好(r=0.9999)，平均回收率為100.7%，RSD為0.51%.結(jié)論：采用HPLC法來(lái)對(duì)顛茄磺芐啶片中的SMZ和TMP進(jìn)行含量測(cè)定具有很好的簡(jiǎn)便性，且測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，值得推廣。

HPLC；顛茄磺芐啶片；TMP；SMZ

所謂顛茄磺芐啶片，俗稱(chēng)瀉利停，常常被用來(lái)治療腹瀉、痢疾桿菌引起的慢性菌痢和其他敏感致病菌引起的腸炎。作為一種止瀉藥物，顛

噁茄磺芐啶片是一種復(fù)方制劑，其主要的藥物成分是磺胺甲 唑(SMZ)，甲氧芐啶(TMP)及顛茄流浸膏，是磺胺類(lèi)廣譜抗菌藥。其藥理作用是磺胺甲噁唑（SMZ）與甲氧芐啶（TMP）有協(xié)同抑菌和殺菌作用。對(duì)非產(chǎn)酶金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌、大腸埃希菌、克雷伯菌屬、沙門(mén)菌屬、變形桿菌屬、摩根菌屬、志賀菌屬等腸桿菌科細(xì)菌、淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌均具有良好抗菌作用，尤其對(duì)大腸埃希菌、流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌的抗菌作用較SMZ單藥明顯增強(qiáng)。此外在體外對(duì)沙眼衣原體、星形奴卡菌、原蟲(chóng)、弓形蟲(chóng)等亦具良好抗微生物活性。

由此可見(jiàn)，在顛茄磺芐啶片中，SMZ和TMP是最主要的成分，其含量是否達(dá)標(biāo)決定了顛茄磺芐啶片的質(zhì)量好壞。為此需要對(duì)其含量進(jìn)行有效測(cè)定。在此本文就探討了HPLC法在其測(cè)定中的具體使用過(guò)程，報(bào)道如下：

1.實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1.1 藥品與試劑

顛茄磺芐啶片(哈藥集團(tuán)制藥六廠)，TMP和 SMZ對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所)，乙腈為色譜純(CaledonLaborato—riesLTD.)，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

1.2 儀器

Agilent 1100 LC系統(tǒng)：四元泵、在線(xiàn)真空脫氣機(jī)，可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器(VWD)，Agilent ChemStation工作站；TU-1221紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；電子天平(Sartorious.BP211D)。所用儀器和量具均經(jīng)檢定和校正。

2、實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)色譜柱：ZorbaxSB—Cl8柱(150mmx4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液(0.025 mol·L-1磷酸二氫鉀用磷酸調(diào)pH為2.50±0.05)-乙腈(75：25)；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；柱溫30℃；流速：1.0mL?min一；進(jìn)樣體積：20tLL.716一藥物分析雜志ChinJPharmAnal2005，25(6)TMP與SMZ的理論塔板數(shù)分別為6800和10300，與各雜質(zhì)峰和輔料峰的分離度均大于1.5。見(jiàn)圖1。

圖1 SMZ和TMP液相色譜圖

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取干燥至恒重的對(duì)照品TMP與SMZ各16mg和80mg，置 100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液.精取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液2mL，置25mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱(chēng)取顛茄磺芐啶片相當(dāng)于TMP和SMZ各16mg和80mg的量，置100mL量瓶中，加甲醇適量，經(jīng)超聲處理15min后，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2mL，置25mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，經(jīng)0.45m濾膜濾過(guò)，棄去初濾液，取續(xù)濾液即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

分別吸取上述對(duì)照品儲(chǔ)備溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL置25mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件進(jìn)樣，結(jié)果表明，TMP在3.2-32μg·mL-1范圍內(nèi)，SMZ在16-160μg·mL-1范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，分別以二組分的濃度(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)作圖，回歸方程TMP，SMZ分別為

2.5 精密度試驗(yàn)

取上述對(duì)照品溶液2.0mL，置25mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，連續(xù)進(jìn)樣10次，每次20L，測(cè)定峰面積.TMP的RSD為0.41%，SMZ的RSD為0.50%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別于0，2，4，8h進(jìn)樣，每次20L，測(cè)定峰面積.TMP的RSD為1.15%，SMZ的RSD為0.67%。

2.7 回收率試驗(yàn)

按處方比例的 80%，100%，120%分別精密稱(chēng)取一定量的TMP，SMZ對(duì)照品及顛茄流浸膏，淀粉，羧甲基淀粉，硬脂酸鎂等輔料，每個(gè)濃度配制3份，置100mL量瓶中，用甲醇溶解，并經(jīng)超聲處理15min后，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45m濾膜過(guò)濾，精密量取2mL置25mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣 20ILL.TMP的平均回收率(RSD)為100.7%(0.51%)，SMZ的平均回收率(RSD)為99.75%(0.35%)。

2.8 樣品測(cè)定

取TMP和SMZ對(duì)照品及顛茄磺芐啶片3批，按含量測(cè)定方法按外標(biāo)法計(jì)算各批中二組分的含量，結(jié)果批號(hào)為170301的TMP含量為100.7%，SMZ為99.8%；批號(hào)為170302的TMP含量為100.5%，SMZ為99.5%；批號(hào)為170303的TMP含量為100.2%，SMZ為100.0%。

3 討論

3.1 生產(chǎn)廠家在執(zhí)行《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)》2015版），廠家按處方100%投料，在檢測(cè)中間體顆粒時(shí)TMP含量偏高，SMZ含量較為正常，且除2個(gè)組分的峰外，無(wú)其他明顯輔料和雜質(zhì)峰。按本文色譜條件檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)TMP色譜峰前有一個(gè)明顯的雜質(zhì)峰，見(jiàn)圖1。按處方配制的顛茄流浸膏按本法色譜條件，檢出在TMP色譜峰前的雜質(zhì)峰，見(jiàn)圖2。

圖2 顛茄流浸膏色譜圖

3.2 pH值的選擇選擇pH值為2.50能在較短的時(shí)間內(nèi)使各組分均能達(dá)到很好的分離，特別使雜質(zhì)峰和輔料峰的分離，從而不影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.3 流動(dòng)相的組成比隨著乙腈濃度的增加，各組分的保留時(shí)間明顯提前，分離效果不佳?？紤]各組分的分離狀態(tài)與分析時(shí)間，將流動(dòng)相組成比例定為磷酸鹽緩沖液-乙腈(75：25)。

總之，作為一種消炎抗菌的止瀉藥物，其作用機(jī)制為：SMZ作用于二氫葉酸合成酶，干擾合成葉酸的第一步，TMP作用于葉酸合成代謝的第二步，選擇性抑制二氫葉酸還原酶的作用，二者合用可使細(xì)菌的葉酸代謝受到雙重阻斷。本品的協(xié)同抗菌作用較單藥增強(qiáng)，對(duì)其呈現(xiàn)耐藥菌株減少。然而近年來(lái)細(xì)菌對(duì)本品的耐藥性亦呈增高趨勢(shì)。顛茄為M膽堿受體阻斷藥，能抑制乙酰膽堿的毒蕈堿樣作用，主要系抑制節(jié)后膽堿能神經(jīng)支配的自主性效應(yīng)器部位乙酰膽堿的活動(dòng)，受乙酰膽堿的平滑肌的活動(dòng)也被抑制。抑制平滑肌、心肌、竇房結(jié)和房室結(jié)，以及外分泌腺等的興奮。較大量的顛茄也能減少胃腸的蠕動(dòng)和分泌，降低輸尿管和膀胱的張力，對(duì)膽總管和膽囊僅略為松弛。

顛茄磺芐啶片中的SMZ和TMP是最主要的藥用成分。在生產(chǎn)藥品的過(guò)程中，必須要合理控制兩者的含量和比例，采取有效檢測(cè)方法進(jìn)行含量測(cè)定，確保藥品質(zhì)量。

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R473.5

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1672-5018（2017）03-219-01