王玉潔，薛健*，石上梅

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193；2.國家藥典委員會(huì)，北京 100061)

·基礎(chǔ)研究·

中藥中維生素C含量測定方法對(duì)比研究△

王玉潔1，薛健1*，石上梅2*

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193；2.國家藥典委員會(huì)，北京 100061)

目的：通過對(duì)比研究，確定適合不同中藥中維生素C含量測定的方法。方法：以五味子、枸杞、山楂、大棗等果實(shí)類藥材為研究材料，用紫外分光光度法、2，6-二氯靛酚滴定法、高效液相色譜法3種常用方法對(duì)其維生素C進(jìn)行測定，通過對(duì)其測定過程、結(jié)果的比較，確定不同中藥中維生素C含量測定的適宜方法。結(jié)果：以高效液相色譜測定結(jié)果最為準(zhǔn)確；滴定法簡單快捷，但提取液顏色較深的樣品，滴定法無法得到準(zhǔn)確結(jié)果；紫外分光光度法測定結(jié)果較其他兩種偏高，受雜質(zhì)影響大。結(jié)論：高效液相色譜法是測定中藥維生素C含量的普遍適用方法，滴定法有一定局限性，僅適合提取液顏色較淡的樣品，紫外分光光度法不適合測定中藥中維生素C含量。

中藥；維生素C；五味子；枸杞；山楂

維生素C又稱抗壞血酸，主要存在于新鮮水果及蔬菜中，是人體不可缺少的微量營養(yǎng)物質(zhì)之一。枸杞、山楂等作為常用的藥食兩用中藥，維生素C也是其重要指標(biāo)成分之一，科學(xué)測定其維生素C含量，有助于衡量其品質(zhì)優(yōu)劣，為其質(zhì)量控制提供依據(jù)。文獻(xiàn)報(bào)道的維生素C的測定方法集中在水果蔬菜上，主要有容量分析法[1]、分光光度法[2]、高效液相色譜法[3]，中藥中的維生素C測定的研究報(bào)道很少，由于中藥基質(zhì)復(fù)雜，蔬菜水果中維生素C的測定方法對(duì)中藥并不適用，故本實(shí)驗(yàn)對(duì)中藥中維生素C含量測定方法進(jìn)行研究，選取枸杞、山楂、大棗、五味子幾種常見中藥，通過比較高效液相色譜法(HPLC)、滴定法和分光光度法測定維生素C的過程和結(jié)果，探索中藥中維生素C含量測定的合適方法，為中藥中維生素C含量測定提供依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 樣品與試劑

新鮮山楂、干山楂、五味子、枸杞、大棗購自藥材市場或基地，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所張本剛研究員鑒定為正品。

維生素C(天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司，含量≥99.7%)；草酸(天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司，含量≥99.5%)；濃硫酸(北京化工廠，95.0%～98.0%)；2，6-二氯靛酚鈉鹽水合物(北京百靈威科技有限公司，98%，Cat No.：284784，Lot：L140O22)；甲醇(色譜純，F(xiàn)isher Scientific)等。

1.2 儀器與設(shè)備

Waters 2695高效液相色譜儀-2996PAD檢測器；C18反相色譜柱：Phenomenex Synergi 4u Hydro-P 80A(250 mm×4.6 mm，5 μm)；島津UV-2550型紫外分光光度計(jì)，PL203/01 電子天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司)，E60H超聲波清洗器(德國艾爾瑪公司)等。

2 方法

2.1 滴定法

取枸杞、干山楂、五味子、大棗粉末適量，精密稱定，置100 mL容量瓶中，1%草酸定容至刻度，超聲處理30 min，過濾。精密稱取鮮山楂果肉5 g，加1%草酸研磨成勻漿，全部轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，1%草酸定容至刻度，超聲處理30 min，過濾。取上述濾液10 mL于錐形瓶中，用標(biāo)定好的2,6-二氯靛酚標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，直至溶液由藍(lán)色變?yōu)榉奂t色，且30 s內(nèi)不褪色為止，同時(shí)取10 mL 1%草酸溶液進(jìn)行滴定，作為空白試驗(yàn)。

記錄兩次滴定所消耗的標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，計(jì)算樣品中維生素C含量。維生素C含量[mg·(100g)-1]=(V樣品-V空白)×T/m×100。式中：T為2，6-二氯酚靛酚染料滴定度(mg·mL-1)，m為滴定時(shí)樣品稀釋液中所含樣品的質(zhì)量(g)[4]。

2.2 高效液相色譜法

2.2.1 色譜條件 柱溫：25 ℃；流動(dòng)相：0.1%草酸；流速：1 mL·min-1；檢測器：二極管陣列檢測器；檢測波長：245 nm[5]。

2.2.2 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取對(duì)照品適量，加1%草酸制成1 mL含維生素C 100 μg的溶液，即得。

2.2.3 測定 取上述5種樣品滴定液作為供試品溶液，微孔濾膜(0.45 μm)過濾，取續(xù)濾液，進(jìn)樣。

2.3 紫外分光光度法測定

2.3.1 對(duì)照品溶液配制 精密稱取對(duì)照品適量，加pH 2.5硫酸水溶液制成1 mL含維生素C 100 μg的溶液，即得。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 分別精密吸取維生素C對(duì)照品溶液0.0、1.5、3.0、4.5、6.0、7.5 mL，置于6個(gè)潔凈的50 mL容量瓶中，加入pH 2.5的硫酸水溶液，搖勻，并定容至刻度，以0.0 mL維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液為空白作參比，在244 nm波長下，用1 cm石英比色皿，測定吸光度。將數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸處理，結(jié)果表明，維生素C質(zhì)量濃度(X)在0～15 μg·mL-1呈線性關(guān)系，線性回歸方程為Y=0.055 1X-0.008 1，r=0.999 6[6]。

2.3.3 供試品溶液的制備 枸杞、五味子、干山楂：精密稱取粉末適量于100 mL容量瓶中，用pH 2.5硫酸水溶液定容至刻度，超聲處理30 min，過濾，取濾液1 mL于50 mL容量瓶中，用pH 2.4硫酸水溶液定容至刻度，作為供試品溶液，244 nm下測定其吸光值。

新鮮山楂、大棗：精密稱取山楂和大棗可食果肉部分5 g，加少量pH 2.5硫酸水溶液研勻，全部轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，定容至刻度。過濾，取濾液1 mL于10 mL容量瓶中，用pH 2.5硫酸水溶液定容至刻度，作為供試品溶液，244 nm下測定其吸光值。

3 結(jié)果與討論

3.1 測定結(jié)果

3種方法測定5種中藥的維生素C含量的結(jié)果見表1。

表1 3種方法測定樣品中維生素C含量 /mg·(100g)-1

注：-表示枸杞和五味子滴定液顏色深，無法準(zhǔn)確判斷滴定終點(diǎn)。

3.2 討論

本實(shí)驗(yàn)用3種方法對(duì)5種中藥中的維生素C含量進(jìn)行測定，對(duì)于各種樣品適用的方法總結(jié)見表2。

表2 5種中藥中維生素C含量測定適用的方法

注：√表示該方法適用于該樣品；×表示該方法不適用于該樣品。

實(shí)驗(yàn)過程中可見，山楂提取液顏色較淺，并且其維生素C含量豐富，使用滴定法可以準(zhǔn)確地判斷滴定終點(diǎn)，其結(jié)果也與高效液相色譜法互相佐證，無顯著差異。故對(duì)于山楂一類提取液顏色較淺且維生素C含量豐富的樣品，不需要昂貴精密儀器，滴定法簡單快捷，是其測定的最佳方法。對(duì)于大棗、枸杞等藥材，其提取液顏色深，多為深棕色，滴定法由于無法判斷滴定終點(diǎn)并不適用。高效液相色譜法以其高分離度和靈敏度的特性可對(duì)其中微量的維生素C進(jìn)行測定，并得到準(zhǔn)確的結(jié)果。而五味子作為果實(shí)并未見其含維生素C的報(bào)道，在液相色譜法測定過程中，五味子在維生素C標(biāo)準(zhǔn)品出峰處(4.885 min)無色譜峰，在5.224 min處有一較高色譜峰，保留時(shí)間偏差較大，判斷不是維生素C。

由于維生素C用酸提取，溶出成分較多，244 nm下紫外分光光度法干擾較多，所得結(jié)果與其他兩種方法相比偏差較大，故紫外分光光度法不適于中藥中的維生素C含量測定。

綜上分析，對(duì)于樣品顏色較淺、維生素C含量較多的樣品，滴定法由于其方便操作，成本低更為適用；而顏色較深的樣品，滴定終點(diǎn)無法確定，HPLC由于其高靈敏度和分離度更為適用。中藥成分復(fù)雜，紫外分光光度法結(jié)果有待進(jìn)一步證實(shí)，不建議使用。

[1] 苑乃香，宣亞文，謝東坡，等.2，6-二氯靛酚鈉測定蔬菜中抗壞血酸的含量[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37(25)：11853-11854.

[2] 馬宏飛，盧生有，韓秋菊，等.紫外分光光度法測定五種果蔬中維生素C的含量[J].化學(xué)與生物工程，2012，29(8)：92-94.

[3] 劉志聰，王路，朱友沖.HPLC測定潮州柑果肉中維生素C[J].光譜實(shí)驗(yàn)室，2011，28(4)：2038-2041.

[4] 國家標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì).GB/T 6195-1986 水果、蔬菜維生素C含量測定法(2.6-二氯靛酚滴定法)[S].北京：中國質(zhì)檢出版社，1986.

[5] 徐保利，管慧潔，王冰.高效液相色譜法測定錦燈籠藥材中維生素C含量[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2012，30(4)：76.

[6] 斯琴格日樂，恩德.懷藥中維生素C含量的測定[J].廣東微量元素科學(xué)，2011，18(5)：45-49.

ComparisonofDeterminationMethodsofVitaminCContentinTraditionalChineseMedicines

WANGYujie1，XUEJian1*，SHIShangmei2*

(1.InstituteofMedicinalPlantDevelopment，ChineseAcademyofMedicalScience&PekingUnionMedicalCollege，Beijing100193，China； 2.ChinesePharmacopoeiaCommission，Beijing100061，China)

Objective：To confirm the accurate method to determine the vitamin C in traditional Chinese medicines(TCMs)by comparing different methods.Methods：Determining the vitamin C content in Schisandra；wolfberry and hawthorn by UV spectrophotometry，2，6-dichloro-indophenol titration，and HPLC respectively and contrast three determination methods to confirm the suitable methods.Results：The results of HPLC is the most accurate.Titration is convenient and easy but not suitable for the sample whose extract is dark.The results of UV spectrophotometry are much higher than the other two methods because of the impurity.Conclusion：The method of HPLC is the best for the determination the content of vitamin C.And titration is suitable for samples that whose extraction is lighter in color，while the UV spectrophotometric determination is not suitable for the majority samples containing vitamin C.

Traditional Chinese Medicine；vitamin C；schisandra；wolfberry；hawthorn

國家重大新藥創(chuàng)制專項(xiàng)(2014ZX09304307-002)

] 石上梅，主任藥師，研究方向：中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，Tel：(010)67079537，E-mail：ssm@chp.org.cn； 薛健，研究員，研究方向：中藥有效成分分析及質(zhì)量控制、中藥有害污染物研究，Tel：(010)57833097，E-mail：xuejian200@sina.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.2.011

2016-05-31)

*[