趙群，李軍德，康彥，高波，李燈林，楊艷

(1.道地藥材國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，中國中醫(yī)科學(xué)院 中藥資源中心，北京，100700；2.皖西學(xué)院，安徽 六安 237012；3.安徽華潤金蟾藥業(yè)股份有限公司，安徽 淮北 235000)

·中藥農(nóng)業(yè)·

飼養(yǎng)密度對中華蟾蜍幼蟾生長發(fā)育的影響△

趙群1,2，李軍德1*，康彥3，高波3，李燈林3，楊艷3

(1.道地藥材國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，中國中醫(yī)科學(xué)院 中藥資源中心，北京，100700；2.皖西學(xué)院，安徽 六安237012；3.安徽華潤金蟾藥業(yè)股份有限公司，安徽 淮北235000)

目的：研究飼養(yǎng)密度對中華蟾蜍BufogargarizansCantor幼蟾生長發(fā)育的影響。方法：將中華蟾蜍幼蟾分別飼養(yǎng)在20、40、60、80只/m2的不同密度條件下。每隔7d測量和記錄1次幼蟾的體重和體長。結(jié)果：(1)幼蟾在第一次冬眠前的成活率為7.9%～30.0%；(2)飼養(yǎng)密度對幼蟾的體重和體長無顯著影響。中華蟾蜍幼蟾的最適養(yǎng)殖密度為20只/m2。結(jié)論：中華蟾蜍幼蟾的最適養(yǎng)殖密度為20只/m2。

中華蟾蜍；幼蟾；養(yǎng)殖密度；生長發(fā)育

中華蟾蜍Bufogargarizans是中藥蟾皮和蟾酥的重要基源動(dòng)物[1-3]，隸屬于蟾蜍科Bufonidae蟾蜍屬Bufo。其耳后腺分泌物——蟾酥作為常用藥材外，其皮中含有多種化學(xué)成分，利用其水溶性成分生產(chǎn)的華蟾素注射液具有顯著的抗腫瘤效果[4-5]。由于中華蟾蜍野生資源下降[6]，必須開展和推廣其規(guī)范化人工養(yǎng)殖，才能滿足日益增長的對該種蟾蜍的需求。

提高蝌蚪和幼蟾的成活率與質(zhì)量是中華蟾蜍規(guī)范化養(yǎng)殖的關(guān)鍵之一。研究表明，在特定人工飼養(yǎng)條件下，中華蟾蜍蝌蚪臨近變態(tài)時(shí)(變態(tài)前)和剛變態(tài)的成活率分別為68.7～96.3%和5.7～36.0%，最適養(yǎng)殖密度為1000只/m2[7]。然而關(guān)于飼養(yǎng)密度對中華蟾蜍幼蟾成活率和質(zhì)量影響的研究，至今未見報(bào)道。本文主要探討在人工飼養(yǎng)條件下，中華蟾蜍幼蟾的合理飼養(yǎng)密度，以提高幼蟾成活率，解決中華蟾蜍規(guī)范化人工養(yǎng)殖技術(shù)體系中的關(guān)鍵問題。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)施

1.1.1實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)所用幼蟾為采集于山東和河北2個(gè)產(chǎn)地的中華蟾蜍種蟾經(jīng)人工飼養(yǎng)并產(chǎn)卵自然孵化后，蝌蝌經(jīng)人工飼養(yǎng)后變態(tài)得到的個(gè)體。2個(gè)產(chǎn)地的幼蟾隨機(jī)混合，在相同環(huán)境飼養(yǎng)馴化約14天后，開始實(shí)驗(yàn)。通過稱重，挑選體重沒有顯著差異的個(gè)體，按下文中實(shí)驗(yàn)要求放入每個(gè)實(shí)驗(yàn)用玻璃飼養(yǎng)缸中。

1.1.2實(shí)驗(yàn)設(shè)施 每個(gè)玻璃飼養(yǎng)缸的長×寬×高為150cm×100cm×60cm，缸內(nèi)水深30cm。用沙子和磚塊在缸內(nèi)鋪建三分之二面積的陸地，陸地和水接觸的邊緣設(shè)置一定的緩坡，便于幼蟾登陸和下水。玻璃飼養(yǎng)缸放置于有良好光照條件、通風(fēng)和自然室溫的實(shí)驗(yàn)室中。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

將幼蟾分為4個(gè)大組，每個(gè)大組中幼蟾的飼養(yǎng)密度分別為20只/m2、40只/m2、60只/m2和80只/m2。其中每個(gè)大組有3個(gè)平行組，每個(gè)平行組分別飼養(yǎng)于1個(gè)玻璃飼養(yǎng)缸中。在實(shí)驗(yàn)過程中，通過定時(shí)檢測主要水質(zhì)指標(biāo)，以保證其符合《漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(GB11607-1989)》的規(guī)定。每天上午8∶30和下午6∶30各喂食1次；每次投食量為每平行組幼蟾實(shí)際總體重的10%左右。

每隔7天測量和記錄1次數(shù)據(jù)，每大組的其中2個(gè)平行組分別測量5至10個(gè)樣本，測量數(shù)據(jù)主要為幼蟾的體重和體長。體長是自吻部最前端端至臀部最后端的長度[2]。每大組的第3個(gè)平行組作為對照組，平時(shí)正常進(jìn)行喂食和其他實(shí)驗(yàn)管理，但不進(jìn)行定期7天1次的數(shù)據(jù)測量，只在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)從4個(gè)對照組中分別隨機(jī)挑出5個(gè)共20個(gè)樣本測量1次體重和體長，用于和實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行比較，以確認(rèn)實(shí)驗(yàn)時(shí)對幼蟾的測量是否影響了幼蟾的體重和體長指標(biāo)，在幼蟾第一次冬眠前停止攝食時(shí)結(jié)束本實(shí)驗(yàn)。

1.3數(shù)據(jù)處理

先對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)分布和方差的同質(zhì)性檢驗(yàn)。如果數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布和方差的同質(zhì)性，可以直接進(jìn)行方差分析；如果數(shù)據(jù)不呈正態(tài)性分布或不具有同質(zhì)性，必須先將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換以達(dá)到正態(tài)性和同質(zhì)性的要求后方能對其進(jìn)行方差分析。

以飼養(yǎng)密度和生長發(fā)育時(shí)間為作用因素，用統(tǒng)計(jì)軟件STATISTICA6.0分別對體重、體長和成活率進(jìn)行相關(guān)性分析、單因素方差分析或二因素方差分析，找出幼蟾在第一次冬眠前成活率高、體重較大和體長較長的飼養(yǎng)密度，這個(gè)密度可以認(rèn)為是人工養(yǎng)殖幼蟾的適宜密度。

2 結(jié)果

由表1可知，中華蟾蜍幼蟾在生長發(fā)育過程中，其體重和體長分別受到生長發(fā)育時(shí)間與密度的顯著影響(P值均小于0.05)；而且，飼養(yǎng)密度和幼蟾發(fā)育時(shí)間對體重和體長具有互作影響(P值均小于0.05)。

在幼蟾生長發(fā)育后期(從實(shí)驗(yàn)開始到之后的第112d)幼蟾體重和體長與密度均沒有直線相關(guān)性(r=0.1113，P=0.3812；r=0.1861，P=0.1409)(表2)。但體長與體重之間具有正相關(guān)(密度實(shí)驗(yàn)：r=0.9363，P=0.0000，表2)，兩者之間的直線回歸方程詳見表2。

表1 以生長發(fā)育時(shí)間和密度為作用因素對中華蟾蜍幼蟾體重和體長的二因素方差分析

注：當(dāng)P<0.05時(shí)，差異顯著；差異顯著的變異來源用*表示

表2 第112 d測量的體重、體長和密度之間的直線相關(guān)分析

注：當(dāng)P<0.05時(shí)，差異顯著，具相關(guān)性

2.1幼蟾生長發(fā)育期、密度與體重的關(guān)系

表3中各密度實(shí)驗(yàn)組中幼蟾的體重大多隨生長發(fā)育時(shí)間的增長而增加，但有部分時(shí)期體重隨時(shí)間增長并無顯著增加。其中，在密度為20只/m2的條件下，從第49d到第56d，以及第91d到第98d，幼蟾的平均體重在這兩個(gè)時(shí)間段的前后分別略有減少，但前后之間并無顯著差異(F1，30=1.738，P=0.1974；F1，23=0.023，P=0.8799)，在其余時(shí)間段，幼蟾的體重都隨發(fā)育時(shí)間的增長而增加。在密度為40只/m2的條件下，從第35d到第42d，幼蟾的體重顯著減少(F1，38=4.781，P=0.0350)，其余大部分時(shí)間段，其體重隨時(shí)間的增長而增加；但對全體實(shí)驗(yàn)幼蟾來說，從第35d到第42d，幼蟾的前后體重并無顯著差異(F1，158=0.487，P=0.4861)。在密度為60只/m2的條件下，從第35d到第42d，以及第49d到第56d，幼蟾的平均體重在這兩個(gè)時(shí)間段的前后分別略有減少，但前后之間并無顯著差異(F1，38=1.420，P=0.2408；F1，33=0.410，P=0.5266)。在密度為80只/m2的條件下，從第35d到第49d，以及第70d到第77d，幼蟾的平均體重在這兩個(gè)時(shí)間段的前后分別呈不顯著的降低，但前后之間并無顯著差異(F2，52=2.015，P=0.1436；F1，38=0.165，P=0.6872)。在第112d時(shí)(即冬眠前停止實(shí)驗(yàn)時(shí))，幼蟾的體重在不同密度組間差異不顯著(F3，60=1.380，P=0.2577)，表明4種飼養(yǎng)密度對幼蟾生長發(fā)育期間的最終體重沒有影響。

表3 在不同生長發(fā)育時(shí)間以密度為作用因素對中華蟾蜍幼蟾體重的單因素方差分析

注：當(dāng)P<0.05時(shí)，差異顯著；Tukey 多重比較(Tukey’sposthoctest)，α=0.05，上標(biāo)不同的平均值差異顯著

2.2在幼蟾不同發(fā)育期，密度與體長的關(guān)系

表4顯示，各密度實(shí)驗(yàn)組中幼蟾的體長大多隨生長發(fā)育時(shí)間的增長而增加，但有部分時(shí)期，體長隨時(shí)間增長呈現(xiàn)出不顯著的減少。其中，在密度為20只/m2的條件下，從第49d到第56d，以及第91d到第98d，幼蟾的平均體長在這兩個(gè)時(shí)間段的前后分別略有減少，但前后之間的平均體長并無顯著差異(F1，30=0.87，P=0.359；F1，23=0.49，P=0.491)，在其余時(shí)間段，幼蟾的體長均隨發(fā)育時(shí)間的增長而增加。在密度為40只/m2的條件下，從第35d到第42d，從第63d到第70d，以及第91d到第98d，幼蟾的平均體長在這3個(gè)時(shí)間段前后分別有不顯著的減少(F1，38=2.34，P=0.134；F1，38=0.03，P=0.858；F1，38=0.004，P=0.944)，其余時(shí)間段，其體長隨時(shí)間的增長而增加。在密度為60只/m2的條件下，從第35d到第42d，以及第49d

表4 在不同生長發(fā)育時(shí)間以密度為作用因素對中華蟾蜍幼蟾體長的單因素方差分析

注：當(dāng)P<0.05時(shí)，差異顯著；Tukey 多重比較(Tukey’sposthoctest)，α=0.05，上標(biāo)不同的平均值差異顯著

到第56 d，幼蟾的平均體長在這兩個(gè)時(shí)間段的前后分別具有不顯著減少(F1，38=2.07，P=0.159；F1，33=1.28，P=0.265)。在密度為80只/m2的條件下，從第35 d到第49 d，從第70 d到第77 d，以及第91 d到第105 d，幼蟾的平均體長在這3個(gè)時(shí)間段的前后分別呈不顯著的降低(F2，52=0.96，P=0.389；F1，38=0.009，P=0.924；F2，55=0.14，P=0.877)。在第112 d時(shí)，幼蟾的體長在不同密度組間差異不顯著(F3，60=1.36，P=0.263)，表明4種飼養(yǎng)密度對幼蟾生長發(fā)育期間的最終體長沒有影響。

2.3中華蟾蜍幼蟾成活率

表5為幼蟾在第112d時(shí)4個(gè)密度實(shí)驗(yàn)組的成活率。由于所有成活率數(shù)據(jù)經(jīng)反正弦轉(zhuǎn)換成角度值后仍然不呈正態(tài)分布，因此無法對成活率數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。所以，表中只列出了各組幼蟾成活率的平均數(shù)和方差等描述性統(tǒng)計(jì)值，并未進(jìn)行差異顯著性分析。從表5可以看出，幼蟾的成活率隨飼養(yǎng)密度的增加而降低；當(dāng)飼養(yǎng)密度為20只/m2時(shí)，幼蟾的成活率最高。在4個(gè)飼養(yǎng)密度中，幼蟾的每m2平均成活數(shù)均為6只。

表5 中華蟾蜍幼蟾成活率

2.4實(shí)驗(yàn)組和對照組幼蟾之間體重與體長的比較

表6顯示，當(dāng)實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，實(shí)驗(yàn)組和對照組幼蟾之間平均體重和體長上均無顯著差異(F1，38=0.039，P=0.8453；F1，38=0.01，P=0.904)。表明實(shí)驗(yàn)時(shí)對幼蟾體重和體長等數(shù)據(jù)的測量，并不影響幼蟾的正常生長。

表6 以組別為作用因素對中華蟾蜍幼蟾體重和體長的單因素方差分析

注：當(dāng)P<0.05時(shí)，差異顯著。

3 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，中華蟾蜍幼蟾的體重和體長在幼蟾期的大部分階段隨生長發(fā)育時(shí)間的增長而增加。在其中的某一發(fā)育階段，幼蟾體重和體長可能會(huì)隨發(fā)育期的增長而減少，但減少不顯著。盡管在密度為40只/m2的飼養(yǎng)條件下，幼蟾的體重從第35 d到第42 d有顯著的減少，但對全部實(shí)驗(yàn)幼蟾來說，幼蟾的體重在此期間前后并無顯著差異。出現(xiàn)以上情況的原因可能是取樣誤差，也可能是在此期間幼蟾的生長情況不佳。

實(shí)驗(yàn)時(shí)對幼蟾進(jìn)行數(shù)據(jù)測量，對于幼蟾來說是一種外界刺激，經(jīng)檢驗(yàn)對幼蟾生長發(fā)育的影響沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果能夠反映幼蟾在人工飼養(yǎng)條件下的生長情況。盡管在幼蟾的整個(gè)實(shí)驗(yàn)期內(nèi)，幼蟾平均體重和體長顯著受到飼養(yǎng)密度的影響，但在實(shí)驗(yàn)后期(尤其是第112 d)，不同密度條件下的幼蟾在體重和體長方面均無顯著差異。以上情況的出現(xiàn)，可能是由于在實(shí)驗(yàn)后期，實(shí)驗(yàn)幼蟾由于一定數(shù)量的死亡而導(dǎo)致飼養(yǎng)密度的下降，因此各密度梯度中的幼蟾生長指標(biāo)趨于一致。由于4種飼養(yǎng)密度的幼蟾在體重、體長和成活率等重要指標(biāo)上沒有差異，并且所有密度處理后的最終成活的幼蟾平均數(shù)都為6只/m2，出于幼蟾的飼養(yǎng)成本和養(yǎng)殖效率的考慮，在人工飼養(yǎng)中華蟾蜍幼蟾時(shí)，最佳飼養(yǎng)密度以20只/m2為宜。李文健等[8]對棘腹蛙Ranaboulengeri的幼蛙進(jìn)行了人工試養(yǎng)研究，結(jié)果表明幼蛙的飼養(yǎng)密度在37～74只/m2時(shí)成活率在95%以上，并據(jù)此判定該密度范圍為最佳，該實(shí)驗(yàn)中幼蛙的最佳飼養(yǎng)密度高于本實(shí)驗(yàn)中幼蟾的最佳飼養(yǎng)密度。其原因可能與兩種動(dòng)物的習(xí)性差異較大有關(guān)。

4 結(jié)論

由本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可得出以下結(jié)論：(1)中華蟾蜍在第一次冬眠前的成活率為7.9～30.0%；(2)中華蟾蜍幼蟾最適養(yǎng)殖密度為20只/m2。

[1] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典：下冊[M].上海：上海人民出版社，1977：2713.

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[3] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：360.

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Effects of Different Raising Densities on Toadlet Development ofBufogargarizans

ZHAO Qun1,2，LI Junde1*，KANG Yan3，GAO Bo3，LI Denglin3，YANG Yan3

(1.National Resource Center for Chinese Materia Medica，China Academy of Chinese Medical Sciences，State Key Laboratory Breeding Base of Dao-di Herbs，Beijng 100700，China； 2.West Anhui University，Liu’an 237012，China；3.Anhui China Resources Jinchan Pharmaceutical Co.，Ltd.，Huaibei 235000，China)

Objective：The effects of four different raising densities on the toadlets growth ofBufogargarizanswere studied.Methods：The toadlets were fed respectively at different density of 20，40，60，and 80 toadlets per square meter.The body weight and snout-vent length were measured and recorded every seven days for 112 days.Results：(1)The survival rates of toadlet before the first hibernation period was from 7.9% to 30.0%；(2)The raising density had no effect on the body weight and snout-vent length of toadlet before first hibernation period，and the optimum raising density is 20 toadlets per square meter.Conclusion：The optimum raising density of toadlet was 20 toadlets per square meter.

Bufogargarizans；toadlet；raising density；development

中央本級重大增減支項(xiàng)目(2060302)；蟾蜍規(guī)范化養(yǎng)殖技術(shù)研究(3-YFB2014005)；安徽省高校省級自然科學(xué)研究項(xiàng)目(KJ2013B329)

] 李軍德，研究員，研究方向：藥用動(dòng)物資源與動(dòng)物藥材鑒定研究;E-mail：jundeli99@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.1.017

2016-02-15)

*[