劉暢 張彥 丁紅珂 吳菁 麥明琴 曾玉坤 劉玲 尹愛華★

32 497例正常聽力孕齡女性耳聾基因攜帶率與突變譜調(diào)查

劉暢1，2張彥1，2丁紅珂1，2吳菁1麥明琴1曾玉坤1，2劉玲1，2尹愛華1，2★

目的在正常聽力孕齡人群中開展耳聾基因攜帶率與突變譜調(diào)查，為耳聾基因篩查、遺傳咨詢、疾病管理提供數(shù)據(jù)。方法32 497例聽力正常且無耳聾家族史的孕齡女性在我院醫(yī)學(xué)遺傳中心門診接受遺傳咨詢后，接受耳聾基因芯片篩查。對于檢測結(jié)果提示為常染色體隱性遺傳耳聾基因突變攜帶者，建議其配偶進(jìn)行進(jìn)一步耳聾基因檢測。對于夫婦均為耳聾基因突變攜帶的家庭，給予遺傳咨詢與風(fēng)險(xiǎn)評估，必要時提供產(chǎn)前耳聾基因診斷。結(jié)果32 497位聽力正常且無耳聾家族史的孕齡女性中，1 181例攜帶遺傳性耳聾基因突變，攜帶率為3.63%。其中，1 117例攜帶常染色體隱性遺傳的耳聾基因雜合突變，包括4種常見的GJB2基因突變665例，2種常見的SLC26A4基因突變407例，GJB3基因突變45例。此外，64例攜帶與氨基糖甙類藥物誘導(dǎo)性耳聾密切相關(guān)的線粒體DNA12S rRNA基因突變。結(jié)論在正常聽力的孕齡人群中開展耳聾基因攜帶率與突變譜的研究，對優(yōu)生優(yōu)育與遺傳咨詢具有重要意義。

耳聾；攜帶率；突變譜

耳聾是臨床上常見的出生缺陷，每1 000名活產(chǎn)兒中便有 1～3 名新生聾兒［1?2］。由于幼兒期是大腦語言中樞發(fā)育的重要時期，在這一時期未獲得充分的聽覺刺激及語言接觸的孩童將面臨包括語言獲取、認(rèn)知發(fā)展、社會心理及社會交往等多方面的障礙［3?4］。過半數(shù)的語前聾患兒系由遺傳性因素所導(dǎo)致的耳聾。鑒于90%～95%的聾病患兒出生于聽力正常的家庭［5］，在聽力正常人群中進(jìn)行耳聾基因突變攜帶率與分布情況的調(diào)研十分重要，可為耳聾基因篩查、遺傳咨詢、疾病管理提供流行病學(xué)數(shù)據(jù)［6］。本研究擬在聽力正常的孕齡人群中開展耳聾基因攜帶率與突變譜的調(diào)查，為遺傳咨詢與生育指導(dǎo)提供資料。

1 材料與方法

1.1 一般資料

本臨床研究將2011年1月至2016年4月間在廣東省婦幼保健院醫(yī)學(xué)遺傳中心門診尋求孕前/孕早期檢查與遺傳優(yōu)生咨詢的32 497例聽力正常且無耳聾家族史的孕齡女性納入研究范圍，入組人群年齡介于20～40歲，以中國南方人群為主。研究方法和研究對象入組標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)廣東省婦幼保健院倫理委員會審核通過。臨床上對入組個體進(jìn)行病史收集及體格檢查，包括詳細(xì)的過往病史、耳聾家族史、不良孕產(chǎn)史、氨基糖甙類藥物接觸史以及與耳聾相關(guān)的潛在致病因素。受檢者在充分知情同意情況下，簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 耳聾基因檢測

采集受檢者外周血2 mL，提取基因組DNA。使用微陣列芯片法晶芯?九項(xiàng)遺傳性耳聾基因檢測試劑盒［北京博奧生物有限公司，國食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2009第3400725］對受檢者進(jìn)行GJB2基因c.35 del G、c.176_191 del 16 bp、c.235 del C、c.299_300 delAT，GJB3基 因 c.538 C＞T，SLC26A4基因 c.2168 A＞G、c.919_2 A＞G，線粒體DNA12S rRNA基因m.1494 C＞T、m.1555 A＞G等中國人群耳聾基因突變熱點(diǎn)篩查。根據(jù)試劑盒說明書，通過多重不對稱等位基因特異性PCR擴(kuò)增獲得大量單鏈DNA，PCR產(chǎn)物變性后與芯片雜交，芯片洗滌后經(jīng)晶芯LuxScan10K?B微陣列芯片掃描儀掃描成像并使用配套軟件進(jìn)行結(jié)果判讀。

1.2.2 遺傳咨詢及生育指導(dǎo)

根據(jù)耳聾基因檢測結(jié)果給予受檢者相應(yīng)的遺傳咨詢意見［7?8］。對于檢測結(jié)果提示為常染色體隱性遺傳耳聾基因突變攜帶者，建議其配偶進(jìn)行進(jìn)一步耳聾基因檢測。如夫婦均攜帶同一常染色體隱性遺傳耳聾基因上的致病突變，則可為其提供遺傳風(fēng)險(xiǎn)分析及生育指導(dǎo)，包括胚胎植入前診斷、接受捐贈配子、產(chǎn)前基因診斷等。對于檢測結(jié)果提示為線粒體遺傳耳聾基因突變攜帶者，遺傳咨詢中需就其母系遺傳方式及其與藥物誘導(dǎo)性耳聾間的關(guān)系進(jìn)行充分告知，給予用藥指導(dǎo)。

2 結(jié)果

經(jīng)檢測，本研究所收集的32 497例聽力正常且無耳聾家族史的孕齡女性中，1 181例攜帶遺傳性耳聾基因突變，即9種常見致聾基因突變在該人群中的攜帶率為3.63%。如表1所示，1 181例耳聾基因突變攜帶者中，1 117例攜帶常染色體隱性遺傳的耳聾基因雜合突變。包括4種常見的GJB2基因突變665例，攜帶率2.05%；2種常見的SLC26A4基因突變407例，攜帶率1.25%；GJB3基因突變45例，攜帶率0.14%。此外，遵循母系遺傳規(guī)律的線粒體DNA12S rRNA基因突變64例，攜帶率0.20%。

1 117例攜帶常染色體隱性遺傳耳聾基因突變的孕齡女性與配偶一同接受遺傳咨詢后，735位攜帶者配偶選擇接受進(jìn)一步耳聾基因檢測，包括9種中國人群常見的致聾基因突變位點(diǎn)的芯片檢測以及配偶所攜帶致病基因的外顯子序列分析。檢測結(jié)果提示47對夫婦為相同隱性遺傳耳聾基因的突變攜帶者，根據(jù)遺傳規(guī)律，他們的后代出現(xiàn)致病基因純合突變的概率約為25%。在接受詳細(xì)的遺傳咨詢，并充分了解手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)與檢測局限性的情況下，44對攜帶致聾突變的夫婦選擇了產(chǎn)前耳聾基因診斷。檢測結(jié)果提示，10例胎兒未攜帶致聾突變、25例攜帶雜合致聾突變、9例攜帶純合致聾突變或復(fù)合雜合突變。根據(jù)產(chǎn)前耳聾基因診斷的結(jié)果，遺傳咨詢醫(yī)師為各家庭提供相應(yīng)的遺傳咨詢意見及生活指導(dǎo)。孩子出生后聽力評估結(jié)果與產(chǎn)前診斷結(jié)果相符，我們對孩子的情況進(jìn)行了定期隨訪并給予恰當(dāng)?shù)纳钪笇?dǎo)［9］。此外，3對攜帶常染色體隱性遺傳致聾基因突變的夫婦經(jīng)充分知情告知后，選擇不進(jìn)行產(chǎn)前耳聾基因診斷。其中一對夫婦生育聽力缺失患兒，我們?yōu)槠涮峁┝嗽缙谠\斷、干預(yù)及援助信息［10］。

此外，本次正常聽力孕齡女性耳聾基因篩查中檢出線粒體DNA12S rRNA基因突變攜帶者64例。鑒于線粒體DNA12S rRNA基因突變是氨基糖甙類藥物誘導(dǎo)性耳聾的重要遺傳機(jī)制［11］，且遵循母系遺傳模式，我們?yōu)橥蛔償y帶者及其母系親屬提供了詳細(xì)的用藥指導(dǎo)。

表1 32 497例正常聽力孕齡女性人群耳聾基因攜帶率與突變譜調(diào)查Table 1 The carrier rate and mutation spectrum of genes associated with hearing loss in 32 497 hearing female of childbearing age

3 討論

本研究中32 497例聽力正常的孕齡女性中1 181例攜帶遺傳性耳聾基因突變，該人群中致聾基因突變的攜帶率為3.63%。本研究樣本量較大、入組標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行嚴(yán)格，因此數(shù)據(jù)具有較好的代表性與可信度，可為耳聾基因篩查、遺傳咨詢、疾病管理提供重要數(shù)據(jù)資料［12］。同時，了解孕齡人群耳聾基因突變攜帶率與分布情況，有助于選擇中國人群中攜帶率較高、臨床表現(xiàn)較重、診斷意義較大的耳聾基因突變位點(diǎn)作為孕前/孕早期耳聾基因篩查的檢測位點(diǎn)。

基于該聽力正常孕齡女性人群的耳聾基因突變率與攜帶譜研究，4種常見的GJB2基因突變占檢出的基因突變比例為56.31%，其中高加索人群中攜帶率最高的致聾基因突變GJB2基因c.35 del G在該主要由中國南方人組成的人群研究中攜帶率較低，僅占檢出突變的0.34%；而在中國耳聾病患群體中檢出率最高的致聾突變GJB2基因c.235 del C位點(diǎn)［13］在本研究的聽力正常人群中攜帶率也居首位，約占檢出變異的46.66%。此外，在該聽力正常人群中SLC26A4基因上2種常見致聾突變c.2168 A＞G與c.919?2 A＞G檢出率也較高，共占檢出突變的34.46%。而GJB3基因上的耳聾相關(guān)變異c.538 C＞T位點(diǎn)則在中國南方人群中攜帶率較低，約占檢出突變的3.81%。此外，與氨基糖甙類藥物誘導(dǎo)性耳聾關(guān)系密切的線粒體DNA12S rRNA基因變異m.1494 C＞T與m.1555 A＞G位點(diǎn)約占檢出突變的5.42%。

耳聾的發(fā)病率在活產(chǎn)兒中高達(dá)1‰～3‰，且90%～95%耳聾患兒出生于父母聽力正常的家庭，因而在聽力正常的孕齡人群中進(jìn)行致聾基因攜帶率與突變譜的研究十分重要，可為耳聾基因篩查、遺傳咨詢、疾病管理提供重要數(shù)據(jù)資料。

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Investigation on gene carrying rate and mutation spectrum of deafness in 32 497 cases of childbearing?age women with normal hearing

LIU Chang1，2，ZHANG Yan1，2，DING Hongke1，2，WU Jing1，MAI Mingqin1，ZENG Yukun1，2，LIU Ling1，2，YIN Aihua1，2★
（1.Medical Genetic Center，Guangdong Women and Children Hospital，Guangzhou，Guangdong，China，511400；2.Maternal and Children Metabolic?Genetic Key Laboratory，Guangdong Women and Children Hospital，Guangzhou，Guangdong，China，511400）

ObjectiveTo better understand the carrier rate and mutation spectrum of genes associated with hearing impairment in the general population,which could be of importance in carrier screening,genetic counseling,and disease management.Methods32 497 unrelated women of childbearing age with normal hearing and without family history of hearing loss were tested with allele?specific PCR?based universal array.Further genetic tests were provided to the spouses of the screened carriers.For those couples at risk,multiple choices were provided,including prenatal diagnosis.ResultsAmong the 32 497 normal hearing participants,1 181 subjects carried pathogenic mutations included in the screening chip,which had the carrier rate 3.63%.A total of 665 participating subjects carried one type of the 4 common deafness?causing mutations inGJB2gene in the heterozygous state,407 subjects were found carrying one type of the 2 confirmed pathogenic mutations inSLC26A4gene in the heterozygous state,and 45 subjects were found carrying pathogenic mutation inGJB3gene in the heterozygous state.In addition,64 participants were detectedto be homoplasmic mutation carriers of mitochondrial DNA12S rRNAgene,which was important mechanism of genetic susceptibility to aminoglycoside ototoxicity.ConclusionBetter understanding about the carrier rate and mutation spectrum of genes associated with hearing impairment in the general population of childbearing age might be important for carrier screening and genetic counseling.

Hearing loss;Carrier rate;Mutation spectrum

作者單位：1.廣東省婦幼保健院醫(yī)學(xué)遺傳中心，廣東，廣州511400
2.廣東省婦幼保健院婦幼代謝與遺傳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東，廣州511400

廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究基金項(xiàng)目（A2016225）

★通訊作者：尹愛華，E?mail：yinaiwa@vip.126.com