陳娜娜，馬蓮香，侯川川，何俊娜，郭 陽(yáng)，劉 兵，余東游

（浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，農(nóng)業(yè)部華東動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江杭州 310058）

蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、腸道形態(tài)、組織學(xué)結(jié)構(gòu)及盲腸微生物菌群的影響

陳娜娜，馬蓮香，侯川川，何俊娜，郭 陽(yáng)，劉 兵，余東游*

（浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，農(nóng)業(yè)部華東動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江杭州 310058）

本試驗(yàn)旨在研究飼糧中添加蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)、腸道形態(tài)、組織學(xué)結(jié)構(gòu)及盲腸微生物菌群的影響，以確定蛋氨酸鋅在蛋雞飼糧中的科學(xué)用量。選擇健康的20周齡海蘭白蛋雞540只，隨機(jī)分成6個(gè)組，每個(gè)組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15只雞。I組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)II、III、IV、V、VI組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加70、140、350、700、1 400 mg/kg蛋氨酸鋅。正試期8周。結(jié)果表明：與對(duì)照組相比，II、III組產(chǎn)蛋率和日產(chǎn)蛋重顯著提高（P＜0.05），料蛋比和不合格蛋率顯著降低（P＜0.05），蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋白高度和哈氏單位顯著提高（P＜0.05），十二指腸、回腸的絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度顯著提高（P＜0.05），盲腸內(nèi)容物中雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量顯著增加（P＜0.05），大腸桿菌數(shù)量顯著減少（P＜0.05）；而VI組產(chǎn)蛋率和日產(chǎn)蛋重極顯著降低（P＜0.01），料蛋比和不合格蛋率極顯著升高（P＜0.01），蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋白高度和哈氏單位極顯著降低（P＜0.01），十二指腸、回腸的絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度極顯著降低（P＜0.01），雙歧桿菌和乳桿菌數(shù)量極顯著減少（P＜0.01），大腸桿菌數(shù)量極顯著增加（P＜0.01）；VI組蛋雞十二指腸和回腸結(jié)構(gòu)發(fā)生損傷。由此可見(jiàn)，適量的蛋氨酸鋅可提高蛋雞產(chǎn)蛋性能和蛋品質(zhì)、改善腸道形態(tài)、優(yōu)化盲腸微生物區(qū)系，但繼續(xù)提高添加水平會(huì)降低其對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)和腸道健康的正面效應(yīng)，甚至?xí)鹭?fù)面效應(yīng)。根據(jù)二次曲線擬合模型得出蛋氨酸鋅在20～27周齡蛋雞玉米—豆粕型飼糧中的適宜添加水平為50～100 mg/kg。

蛋氨酸鋅；蛋雞；生產(chǎn)性能；腸道形態(tài)；組織學(xué)結(jié)構(gòu)；微生物菌群

蛋氨酸鋅是由蛋氨酸與無(wú)機(jī)鋅在特定條件下反應(yīng)生成的具有獨(dú)特環(huán)狀的金屬螯合物，具有很好的化學(xué)穩(wěn)定性和較高的生物學(xué)效價(jià)，是一種高效的有機(jī)微量元素[1]。許多研究報(bào)道，蛋氨酸鋅不僅可以提高蛋雞生產(chǎn)性能、提高肉雞生長(zhǎng)性能、改善蛋品質(zhì)，而且可以增強(qiáng)家禽的抗應(yīng)激、免疫和抗氧化能力等[2-3]。前人研究[4-5]表明，氨基酸螯合鋅可提高斷奶仔豬、肉仔雞生產(chǎn)性能，改善腸道形態(tài)、優(yōu)化盲腸微生物區(qū)系等，但關(guān)于蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞腸道影響的研究還鮮見(jiàn)報(bào)道。蛋氨酸鋅的適宜添加量與蛋雞品種、生理階段、試驗(yàn)條件、研究方法和評(píng)定指標(biāo)等有關(guān)，為此，本試驗(yàn)以海蘭白蛋雞為研究對(duì)象，探討蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、腸道形態(tài)、組織學(xué)結(jié)構(gòu)及盲腸微生物菌群的影響，旨在確定蛋氨酸鋅在蛋雞飼糧中的科學(xué)用量，為生產(chǎn)實(shí)踐提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 蛋氨酸鋅由山東濟(jì)寧和實(shí)生物科技有限公司提供，產(chǎn)品批號(hào)為2014080701，鋅的含量≥17.72%，蛋氨酸含量≥79.34%。

1.2 飼養(yǎng)管理與試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選取采食（89.17±1.27）g/d正常、體重、（1.36±0.03）kg相近、產(chǎn)蛋率（80.23%±0.98%）一致的健康海蘭白蛋雞540只，20周齡，采用封閉式雞舍3層階梯式籠養(yǎng)。依雞場(chǎng)常規(guī)方法進(jìn)行飼養(yǎng)管理，自由采食、飲水。

本試驗(yàn)采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，隨機(jī)分成6個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15只雞。預(yù)試期2周，正試期8周。預(yù)試期飼喂玉米—豆粕型基礎(chǔ)飼糧（鋅含量為34.21 mg/kg）。I組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)II、III、IV、V、VI組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加70、140 、350 、700、1 400 mg/kg蛋氨酸鋅（以鋅計(jì)）。基礎(chǔ)飼糧參照美國(guó)NRC（1994） 《雞的營(yíng)養(yǎng)需要》和 《雞的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》 （NY/T33-2004），并結(jié)合海蘭白蛋雞飼養(yǎng)手冊(cè)配制，基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1，以粉料形式飼喂蛋雞。

1.3 樣品采集與制備 以重復(fù)為單位，每個(gè)重復(fù)、每周末同時(shí)采蛋5枚，于12 h內(nèi)進(jìn)行蛋品質(zhì)測(cè)定。試驗(yàn)第8周末，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1只健康且體重相近的蛋雞進(jìn)行屠宰。在十二指腸和回腸中段各取2 cm的腸管，用生理鹽水小心沖洗后迅速置于4%中性甲醛中固定。用經(jīng)消毒的繩子于盲腸與回腸接連處打結(jié)，剪下盲腸，得到整段盲腸及內(nèi)容物，切口處消毒，立即放入液氮中，以備微生物菌群分析用。

1.4 測(cè)定指標(biāo)與方法

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分

1.4.1 蛋品質(zhì) 使用全自動(dòng)蛋品質(zhì)分析儀（DET 6 000，日本Nabel公司）測(cè)定蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度、蛋白高度、蛋黃顏色、哈氏單位等蛋品質(zhì)指標(biāo)。

1.4.2 腸道形態(tài)、組織學(xué)結(jié)構(gòu) 經(jīng)固定的標(biāo)本經(jīng)水洗、梯度乙醇脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋等處理后，用德國(guó)Leica RM2255石蠟切片機(jī)制成6 μm的切片，經(jīng)蘇木精-伊紅（HE）染色后，在Eclipse 80i光學(xué)顯微鏡（4×10）下選擇3個(gè)典型視野（絨毛完整、走向平直），用DigiLab II-C圖像分析軟件測(cè)量每個(gè)視野中的10根絨毛高度、隱窩深度，并計(jì)算絨毛高度/隱窩深度。

1.4.3 腸道組織學(xué)結(jié)構(gòu) 在Eclipse 80i顯微鏡下觀察十二指腸和回腸的組織學(xué)結(jié)構(gòu)，并用DigiLab II-C圖像采集系統(tǒng)采集相應(yīng)的組織切片圖像。

1.4.4 盲腸微生物菌群 在超凈臺(tái)內(nèi)采集盲腸內(nèi)容物0.5 g于滅菌帶玻璃珠的三角瓶中，加入滅菌生理鹽水49.5 mL，震蕩5 min，此菌液稀釋度為10-2，用移液槍吸取稀釋度為10-2的菌液1 mL置于盛有9 mL滅菌生理鹽水的試管中，震蕩5 min，制成稀釋度為10-3的菌液，依次進(jìn)行10-4、10-5、10-6、10-7倍比稀釋。每種細(xì)菌選擇3個(gè)適宜的稀釋度，每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)，吸取100 μL接種于選擇性培養(yǎng)基（大腸桿菌：麥康凱培養(yǎng)基；腸球菌：EC培養(yǎng)基；雙歧桿菌：BS培養(yǎng)基；乳桿菌：LBS培養(yǎng)基）上，用滅菌曲玻棒小心推勻。大腸桿菌于37℃有氧培養(yǎng)24 h，雙歧桿菌、乳桿菌、腸球菌于37℃厭氧培養(yǎng)48 h。根據(jù)菌落可數(shù)性原則，選擇合適的濃度梯度進(jìn)行平板菌落計(jì)數(shù)，最后用每克盲腸內(nèi)容物所含細(xì)菌數(shù)的對(duì)數(shù)[lg（CFU/g）]表示。培養(yǎng)基購(gòu)自杭州百思生物技術(shù)有限公司。

1.4.5 基礎(chǔ)日糧中鋅含量測(cè)定 稱取基礎(chǔ)飼糧0.5 g置于消化管中，加入6 mL濃硝酸，置于CEMMARS5微波消解儀中消解，消解完成后于DV4 000型精確控溫電熱消解器中趕酸，冷卻后用去離子水定容至100 mL。利用ICE 3 000原子吸收光譜儀測(cè)定試樣中鋅含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 18.0軟件的單因素方法分析（One-Way ANOVA）程序進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。用Bonferroni法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。結(jié)果均以平均值和集合標(biāo)準(zhǔn)誤（SEM）表示，P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。利用曲線估計(jì)模型，以產(chǎn)蛋率、日產(chǎn)蛋重、料蛋比、不合格蛋率等作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行二次曲線擬合分析，計(jì)算蛋氨酸鋅的適宜添加水平。

2 結(jié) 果

2.1 蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響 由表2可知，與對(duì)照組相比，II、III組產(chǎn)蛋率、日產(chǎn)蛋重顯著提高（P＜0.05），料蛋比、不合格蛋率顯著降低（P＜0.05）；IV、V組與對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）；而VI組產(chǎn)蛋率、日產(chǎn)蛋重極顯著降低（P＜0.01），料蛋比、不合格蛋率極顯著升高（P＜0.05）。

以產(chǎn)蛋率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，建立二次曲線方程：Y=-0.000007X2+0.0007X+89.683（R2=0.8692，Y=產(chǎn)蛋率，X=蛋氨酸鋅添加水平，P＜0.01），預(yù)期蛋氨酸鋅添加水平為50 mg/kg時(shí)，產(chǎn)蛋率最高。以日產(chǎn)蛋重為評(píng)價(jià)指標(biāo)，建立二次曲線方程：Y= -0.00005X2+0.007X+722.12（R2=0.8561，Y=日產(chǎn)蛋重，X=蛋氨酸鋅添加水平，P＜0.01），預(yù)期蛋氨酸鋅添加水平為70 mg/kg時(shí)，日產(chǎn)蛋重最大。以料蛋比為評(píng)價(jià)指標(biāo)，建立二次曲線方程：Y= 0.0000001X2－ 0.00002X+2.0282（R2=0.8235，Y=料蛋比，X=蛋氨酸鋅添加水平），預(yù)期蛋氨酸鋅添加水平為100 mg/kg時(shí)，料蛋比最低。以不合格蛋率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，建立二次曲線方程：Y=0.000001X2－0.00016X+0.488（R2=0.862 2，Y=不合格蛋率，X=蛋氨酸鋅添加水平，P＜0.01），預(yù)期蛋氨酸鋅添加水平為80 mg/kg時(shí)，不合格蛋率最低。

2.2 蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響 由表3可知，飼糧中添加蛋氨酸鋅對(duì)雞蛋的蛋黃顏色無(wú)顯著影響（P＞0.05）。與對(duì)照組相比，II、III組顯著提高了雞蛋的蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋白高度和哈氏單位（P＜0.05），IV、V組與對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05），而VI組蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋白高度和哈氏單位極顯著降低（P＜0.01）。

以蛋殼強(qiáng)度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，建立二次曲線方程：Y=－0.0000007X2+0.00007X+3.6526（R2=0.7615，Y=蛋殼強(qiáng)度，X=蛋氨酸鋅添加水平，P＜0.01），預(yù)期蛋氨酸鋅添加水平為50 mg/kg時(shí)，蛋殼強(qiáng)度最大。以蛋殼厚度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，建立二次曲線方程：Y=－0.0000003X2+0.00006X+0.3617（R2=0.7394，Y=蛋殼厚度，X=蛋氨酸鋅添加水平，P＜0.01），預(yù)期蛋氨酸鋅添加水平為100 mg/kg時(shí)，蛋殼厚度最大。以蛋白高度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，建立二次曲線方程：Y=－0.000 001X2+0.0002X+8.3246（R2=0.788 2，Y=蛋白高度，X=蛋氨酸鋅添加水平，P＜0.01），預(yù)期蛋氨酸鋅添加水平為100 mg/kg時(shí)，蛋白高度最高。

2.3 蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞腸道形態(tài)的影響 由表4可知，飼糧中添加蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞十二指腸、回腸隱窩深度無(wú)顯著影響（P＞0.05）。與對(duì)照組相比，II、III組顯著提高了十二指腸、回腸的絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度（P＜0.05），IV、V組與對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05），而VI組十二指腸、回腸的絨毛高度/隱窩深度極顯著降低（P＜0.01）。

表2 蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響

表3 蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響

表4 蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞腸道形態(tài)的影響

以十二指腸絨毛高度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，建立二次曲線方程：Y=-0.0003X2+0.03X+12 44.8（R2=0.818 9，Y=十二指腸絨毛高度，X=蛋氨酸鋅添加水平，P＜0.01），預(yù)期蛋氨酸鋅添加水平為50 mg/kg時(shí)，十二指腸絨毛高度最高。以十二指腸絨毛高度/隱窩深度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，建立二次曲線方程：Y=-0.000 001X2+0.000 2X+7.3455（R2=0.7871，Y=十二指腸絨毛高度/隱窩深度，X=蛋氨酸鋅添加水平，P＜0.01），預(yù)期蛋氨酸鋅添加水平為100 mg/kg時(shí)，十二指腸絨毛高度/隱窩深度最大。以回腸絨毛高度/隱窩深度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，建立二次曲線方程：Y=-0.000002X2+0.0004X+6.755（R2=0.7652，Y=回腸絨隱比，X=蛋氨酸鋅添加水平，P＜0.01），預(yù)期蛋氨酸鋅添加水平為100 mg/kg時(shí)，回腸絨毛高度/隱窩深度最大。

2.4 蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞腸道組織學(xué)結(jié)構(gòu)的影響 如圖1所示，在十二指腸部分，I、II、III、IV、V組的十二指腸組織結(jié)構(gòu)正常，腸壁由黏膜、黏膜下層、肌層和外膜4層結(jié)構(gòu)構(gòu)成。黏膜包括黏膜上皮、固有層、黏膜肌層，其中黏膜上皮與固有層向腸腔內(nèi)隆起形成指狀的腸絨毛。腸絨毛結(jié)構(gòu)較完整，排列較整齊，腸上皮細(xì)胞輪廓清晰，染色鮮明，排列規(guī)則。但VI組有2例出現(xiàn)十二指腸腸絨毛大量脫落，固有層裸露，絨毛排列雜亂無(wú)章。

在回腸部分，I組回腸組織結(jié)構(gòu)正常，黏膜、黏膜下層、肌層和固有層構(gòu)成了完整的回腸腸壁。腸上皮細(xì)胞染色鮮明，排列整齊，且腸絨毛排列較規(guī)則。II、III、IV、V組觀察結(jié)果與I組相似。但VI組有3例出現(xiàn)腸絨毛變稀疏、嚴(yán)重?cái)嗔?，腸絨毛大量脫落。

以上結(jié)果表明，飼糧中添加1 400 mg/kg蛋氨酸鋅會(huì)對(duì)蛋雞十二指腸、回腸造成一定程度的損傷，對(duì)腸上皮結(jié)構(gòu)的完整性和腸道形態(tài)造成負(fù)面影響。

圖1 蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞腸道組織學(xué)結(jié)構(gòu)的影響（4×10）

2.5 蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞盲腸微生物菌群的影響 由表5可知，飼糧中添加蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞盲腸內(nèi)容物中的腸球菌無(wú)顯著影響（P＞0.05）。與對(duì)照組相比，II、III組顯著提高了蛋雞盲腸內(nèi)容物中的雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量（P＜0.05），顯著降低了大腸桿菌數(shù)量（P＜0.05）；IV、V組與對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）；而VI組蛋雞盲腸內(nèi)容物中的雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量極顯著降低（P＜0.01），大腸桿菌數(shù)量極顯著提高（P＜0.01）。

以雙歧桿菌數(shù)量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，建立二次曲線方程：Y=-0.000001X2+0.0001X+8.7597（R2=0.7142，Y=雙歧桿菌數(shù)量，X=蛋氨酸鋅添加水平，P＜0.01），預(yù)期蛋氨酸鋅添加水平為50 mg/kg時(shí)，雙歧桿菌數(shù)量最多。以乳桿菌數(shù)量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，建立二次曲線方程：Y=-0.000005X2+0.001X+8.0326（R2=0.8106，Y=乳桿菌數(shù)量，X=蛋氨酸鋅添加水平，P＜0.01），預(yù)期蛋氨酸鋅添加水平為100 mg/kg時(shí)，乳桿菌數(shù)量最多。以大腸桿菌數(shù)量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，建立二次曲線方程：Y=0.000 004X2-0.0004X+6.6531（R2=0.6935，Y=大腸桿菌數(shù)量，X=蛋氨酸鋅添加水平，P＜0.01），預(yù)期蛋氨酸鋅添加水平為50 mg/kg時(shí)，大腸桿菌數(shù)量最少。

表5 蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞盲腸微生物菌群的影響 lg(CFU/g)

3 討 論

3.1 蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響 根據(jù)許甲平等[3]、王希國(guó)[6]報(bào)道，蛋雞飼糧中添加40～70 mg/kg蛋氨酸鋅可顯著提高蛋雞產(chǎn)蛋率，降低料蛋比和破殼蛋率。周海濤等[7]研究發(fā)現(xiàn)，蛋氨酸鋅在產(chǎn)蛋后期蛋雞（50～58周齡）飼糧中的適宜添加量為35～70 mg/kg。楊自軍等[8]、王安等[9]報(bào)道，蛋雞飼糧中添加3 000～4 000 mg/kg 硫酸鋅可顯著降低蛋雞產(chǎn)蛋率，提高料蛋比。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，適量的蛋氨酸鋅可提高蛋雞產(chǎn)蛋性能，而添加過(guò)量會(huì)對(duì)產(chǎn)蛋性能造成負(fù)面影響。原因可能是適量的蛋氨酸可提高蛋雞體內(nèi)鋅依賴酶活性，促進(jìn)蛋白質(zhì)、碳水化合物等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和利用[1-2]，從而提高蛋雞產(chǎn)蛋率，降低料蛋比和不合格蛋率，而過(guò)量的蛋氨酸鋅可能會(huì)拮抗飼糧中鈣、銅、鐵等微量元素，降低飼糧中養(yǎng)分利用率，且過(guò)量添加可能會(huì)使蛋雞卵巢發(fā)生損傷[2,8]，從而降低蛋雞產(chǎn)蛋率，提高料蛋比和不合格蛋率。

3.2 蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響 蛋品質(zhì)是養(yǎng)殖者和消費(fèi)者共同關(guān)注的重要指標(biāo)，主要包括蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋白高度、哈氏單位和蛋黃顏色等[10]。許甲平[3]、王希國(guó)[6]報(bào)道，蛋雞飼糧中添加40～70 mg/kg蛋氨酸鋅可顯著提高蛋殼厚度、強(qiáng)度和蛋殼質(zhì)量。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，適量的蛋氨酸鋅會(huì)提高蛋品質(zhì)，但添加過(guò)量反而會(huì)對(duì)蛋品質(zhì)造成負(fù)面影響?？赡茉蛴?個(gè)方面：第一，適量的蛋氨酸鋅促進(jìn)碳酸酐酶的產(chǎn)生，增加蛋殼腺中的碳酸氫根的濃度，促進(jìn)碳酸鈣的沉積，使得蛋殼變厚，但添加過(guò)量可能會(huì)對(duì)鈣產(chǎn)生拮抗作用，使蛋殼變薄[11]；第二，蛋殼強(qiáng)度不僅與蛋殼厚度有關(guān)，還與基質(zhì)薄膜和蛋殼超微結(jié)構(gòu)有關(guān)，適量的蛋氨酸鋅可提高蛋蛋殼腺內(nèi)的鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄因子活性，促進(jìn)蛋殼腺內(nèi)某些基質(zhì)蛋白表達(dá)，改善蛋殼超微結(jié)構(gòu)[12]，從而提高蛋殼強(qiáng)度，而過(guò)量添加可能會(huì)引起鋅指蛋白構(gòu)象發(fā)生異常，影響基質(zhì)蛋白的表達(dá)，從而降低蛋殼強(qiáng)度；第三，適量的蛋氨酸鋅可以促進(jìn)羧酸酶、氨基酰轉(zhuǎn)移酶等的合成，從而促進(jìn)體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成轉(zhuǎn)運(yùn)，使蛋白含量和蛋白粘稠度增加，提高蛋白高度和哈氏單位，但過(guò)量添加會(huì)使鋅依賴酶構(gòu)象發(fā)生變化，導(dǎo)致機(jī)體蛋白質(zhì)的合成發(fā)生異常[13]，蛋白高度和哈氏單位下降。

3.3 蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞腸道形態(tài)的影響 絨毛高度、隱窩深度、絨毛高度/隱窩深度是衡量小腸消化吸收功能的重要指標(biāo)，絨毛高度和隱窩深度分別反映小腸的消化吸收能力和上皮細(xì)胞的成熟率，絨毛高度/隱窩深度綜合反映小腸的消化吸收功能狀態(tài)[14]。謝正軍等[15]、Li[16]研究表明，畜禽飼糧中添加適量的鋅可以改善腸道形態(tài)；但陳亮[17]、王希春[18]、高競(jìng)鐸等[19]報(bào)道，長(zhǎng)期飼喂高劑量的鋅會(huì)對(duì)腸道結(jié)構(gòu)造成負(fù)面影響。Ma等[4]報(bào)道，在肉雞飼糧中添加90 mg/kg甘氨酸鋅可顯著提高十二指腸絨毛高度、降低回腸隱窩深度。王子旭等[20]報(bào)道，肉雞飼糧中添加1 000 mg/kg硫酸鋅顯著降低肉雞十二指腸的絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，適量的蛋氨酸鋅可顯著提高蛋雞十二指腸、回腸的絨毛高度和回腸絨毛高度/隱窩深度，表明小腸的腸道形態(tài)得到改善，消化吸收功能增強(qiáng)，但添加過(guò)量會(huì)降低十二指腸、回腸的絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度，降低消化吸收功能。原因可能是適量的蛋氨酸鋅能提高腸上皮細(xì)胞鋅依賴酶（DNA聚合酶、RNA聚合酶）的活性，增強(qiáng)鋅指轉(zhuǎn)錄因子的穩(wěn)定性，從而促進(jìn)腸上皮細(xì)胞增殖，腸絨毛變高、絨毛高度/隱窩深度上升[21]；適量的蛋氨酸鋅能提高腸道Cu/Zn-SOD活性、增加金屬硫蛋白（MT）含量，從而提高腸道清除自由基的能力，保護(hù)腸上皮細(xì)胞的生物膜，維持腸上皮結(jié)構(gòu)的完整性，改善腸道形態(tài)[1,10]，而過(guò)量添加可能會(huì)引起DNA聚合酶、RNA聚合酶、鋅指蛋白Cu/Zn-SOD、金屬硫蛋白構(gòu)象的異常，腸上皮細(xì)胞增殖受阻，清除自由基的能力減弱[2,14]，造成腸絨毛變矮，絨毛高度/隱窩深度下降，腸黏膜受損。

3.4 蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞腸道組織學(xué)結(jié)構(gòu)的影響 動(dòng)物腸道結(jié)構(gòu)的完整性對(duì)動(dòng)物健康狀況、消化吸收、免疫有重要的生物學(xué)意義[22]。前人研究[15-19]表明，畜禽飼糧中適量的鋅可以改善腸道形態(tài)，但長(zhǎng)期飼喂高劑量的鋅會(huì)對(duì)腸道結(jié)構(gòu)造成負(fù)面影響。高競(jìng)鐸等[19]報(bào)道，小鼠飼糧中4 000 mg/kg硫酸鋅會(huì)引起十二指腸黏膜上皮細(xì)胞發(fā)生變性、壞死。羅治彬等[23]發(fā)現(xiàn)，在大鼠飼糧中添加1 500 mg/kg硫酸鋅，試驗(yàn)第7周時(shí)會(huì)引起十二指腸黏膜上皮細(xì)胞高度水腫。王子旭等[20]報(bào)道，肉雞飼糧中添加1 000 mg/kg硫酸鋅，飼喂45 d后發(fā)現(xiàn)十二指腸黏膜上皮細(xì)胞萎縮，黏膜上皮脫落，紋狀緣變薄，固有層裸露。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，蛋雞飼糧中添加70～700 mg/kg對(duì)腸道組織學(xué)結(jié)構(gòu)無(wú)負(fù)面影響，但添加水平達(dá)到1 400 mg/kg會(huì)引起蛋雞十二指腸、回腸腸絨毛大量脫落、固有層裸露，嚴(yán)重破壞腸上皮結(jié)構(gòu)的完整性和腸道的機(jī)械屏障，不利于腸道健康的維持。造成這一結(jié)果的原因可能是過(guò)量的蛋氨酸鋅在腸上皮細(xì)胞大量沉積，造成鋅中毒，使膜性結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)雙分子層的生理性穩(wěn)態(tài)和細(xì)胞表面糖蛋白含量發(fā)生變化，ATP酶結(jié)構(gòu)損傷，ATP生成減少、膜的主動(dòng)運(yùn)輸障礙，細(xì)胞內(nèi)水鈉潴留，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體水腫，線粒體嵴破壞，最終造成細(xì)胞損傷或壞死[24]。

3.5 蛋氨酸鋅對(duì)蛋雞盲腸微生物菌群的影響 動(dòng)物腸道內(nèi)存在一個(gè)復(fù)雜的微生態(tài)系統(tǒng)，腸道中的有益菌（雙歧桿菌、乳桿菌等）與腸上皮緊密結(jié)合，形成腸道的生物屏障，通過(guò)占位作用競(jìng)爭(zhēng)抑制病原菌與腸上皮結(jié)合，從而抵御病原微生物的入侵和定植，維持腸道微生態(tài)系統(tǒng)的平衡[25]。易力等[26]報(bào)道，乳鴿日糧中添加2 mg/L蛋氨酸鋅有利于維持腸道菌群的微生態(tài)平衡，但當(dāng)添加水平達(dá)到10 mg/L時(shí)，乳鴿腸道內(nèi)雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量極顯著減少。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧中添加70、140 mg/kg蛋氨酸鋅可顯著增加蛋雞盲腸內(nèi)容物中雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量，顯著減少大腸桿菌數(shù)量，表明盲腸微生物區(qū)系得到優(yōu)化，調(diào)節(jié)和維持了腸道微生態(tài)平衡，但添加水平達(dá)到1 400 mg/kg反而極顯著增加了大腸桿菌數(shù)量，減少了雙歧桿菌和乳桿菌數(shù)量，表明蛋雞腸道菌群失調(diào)，生物屏障遭到破壞。造成這一結(jié)果的原因可能是適量的蛋氨酸鋅能促進(jìn)腸道上皮中的淋巴細(xì)胞、杯狀細(xì)胞以及固有層中的漿細(xì)胞增殖，提高腸道細(xì)胞和體液免疫水平[27]，腸道微生態(tài)處于平衡狀態(tài)，有益菌成為優(yōu)勢(shì)菌群，而添加過(guò)量可能會(huì)造成杯狀細(xì)胞、淋巴細(xì)胞以及漿細(xì)胞鋅中毒，引起腸道黏液以及免疫蛋白A(IgA)合成和分泌減少，腸道免疫功能下降[28]，大腸桿菌等有害菌得以入侵和定植，打破腸道微生態(tài)平衡。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加適量的蛋氨酸鋅可提高蛋雞產(chǎn)蛋性能和蛋品質(zhì)、改善腸道形態(tài)、優(yōu)化盲腸微生物區(qū)系，但繼續(xù)提高添加水平會(huì)降低其對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)和腸道健康的正面效應(yīng)，甚至?xí)鹭?fù)面效應(yīng)。根據(jù)二次曲線擬合模型得出蛋氨酸鋅在20～27周齡蛋雞玉米—豆粕型飼糧中的適宜添加水平為50～100 mg/kg。

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Ef f ects of Zinc-methionine on Performance, Intestinal Morphology, Histological Structure and Cecal Microbial Flora of Laying Hens

CHEN Na‐na, MA Lian‐xiang, HOU Chuan‐chuan, HE Jun‐na, GUO Yang, LIU Bing, YU Dong‐you*

(College of Animal Science, Zhejiang University, Key Laboratory of Animal Nutrition and Feed in East China of MOA , Zhejiang Hangzhou 310058, China)

This experiment was conducted to investigate the effects of zinc‐methionine on egg quality, intestinal morphology and histological structure and cecal microbial flora to determine the scientific doses in laying hens. Five hundred and forty 20‐week‐old healthy Hyline White laying hens were randomly allocated to 6 groups with 6 replicates per group and 15 birds per replicate. Hens in group I were fed a basal diet as the control, and those in group II, III, IV, V and VI

the basal diets supplemented with 70, 140, 350 ,700 and 1 400 mg/kg zinc‐methionine, respectively. The trail lasted for eight weeks. The results showed as follows: Compared with the control group, laying rate, daily egg mass, the ratio of feed to egg were notably increased and unqualif i ed egg rate were signif i cantly decreased (P＜0.05), eggshell strength, eggshell thickness, albumin height and haugh unit were remarkably improved (P＜0.05), villus height and ratio of villus height to crypt depth were notably increased (P＜0.05), the number of Bif i dobacteria and Lactobacilli was remarkably increased and the amount of Escherichia coli was notably decreased (P＜0.05) in the cecal contents of laying hens in group II and III, however, laying rate, daily egg mass, the ratio of feed to egg were notably decreased and unqualif i ed egg rate were signif i cantly increased (P＜0.01), eggshell strength, eggshell thickness, albumin height and haugh unit were remarkably reduced (P＜0.01), villus height and ratio of villus height to crypt depth were notably decreased (P＜0.01), the amount of Escherichia coli was extremely increased (P＜0.01) and the number of Bifidobacteria and Lactobacilli was notably decreased (P＜0.01) in group VI. Damage occurred in duodenum and ileum of hens in group VI. The results indicated that dietary supplementation with optimal doses of zinc‐methionine upregulated laying performance and egg quality, improved the intestinal morphology, optimized cecal microbiota of laying hens, but continuously improving the supplemental levels would lower its positive effect and even trigger negative effects. According to the quadratic curve fi tting model, the optimal supplemental level of zinc‐methionine is 50～100 mg/kg in the corn‐soybean meal diet of laying hens during the peak period.

Zinc‐methionine; Laying hens; Performance; Intestinal morphology; Histological structure; Cecal microbial fl ora

S831.5

A

10.19556/j.0258-7033.2017-09-102

2016-11-29；修回時(shí)間：2017-01-13

“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃（2013BAD20B02）；農(nóng)業(yè)部飼料質(zhì)量安全監(jiān)管專項(xiàng)（2014）

陳娜娜（1990-），女，山東人，碩士，研究方向?yàn)閯?dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料添加劑，E-mail: nanachen1207@163.com

* 通訊作者：余東游（1967-），男，浙江人，研究員，主要從事動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)的教研工作，E-mail: dyyu@zju.edu.cn