陳興玲 胡毓秀 王劍超 陶鳳

●基礎研究

莪術對功能性消化不良大鼠胃竇組織中神經遞質含量的影響

陳興玲 胡毓秀 王劍超 陶鳳

目的 觀察不同劑量莪術對功能性消化不良（FD）大鼠胃竇組織乙酰膽堿酯酶（Ach E）、一氧化氮（NO）、血管活性腸肽（VIP）含量的影響。方法 50只大鼠隨機分為正常對照組、模型對照組、25%莪術組、50%莪術組、0.1%多潘立酮組，每組各10只。刺激大鼠建立FD動物模型，之后采用不同濃度莪術和多潘立酮進行灌胃給藥，14d后比較各組大鼠胃竇組織中Ach E、NO、VIP水平。結果 模型對照組大鼠胃竇組織中NO和VIP水平較正常對照組升高（均P＜0.01）,而AchE減低（P＜0.01）；25%莪術組、50%莪術組大鼠胃竇組織的AchE水平均升高，而VIP和NO水平均降低（均P＜0.01）。結論 莪術可升高FD大鼠胃竇Ach E水平，降低VIP和NO水平，可能對FD有改善作用。

莪術 功能性消化不良 神經遞質 胃竇

功能性消化不良（functional dyspepsia,FD）是臨床上常見的一種消化系統(tǒng)功能性疾病。羅馬Ⅲ標準將其分為2種亞型：餐后不適綜合征及上腹疼痛綜合征[1]。隨著生活環(huán)境的改變，其發(fā)病率正逐步提高。但發(fā)病機制尚不清楚，有學者認為胃腸道動力障礙可能是FD的病理生理基礎。中醫(yī)觀點認為“肝氣郁結、脾虛失運、胃失和降”是FD的主要病機。莪術味辛苦，性溫，歸肝脾經，臨床上可用于食積氣滯較重者，有較強的行氣止痛消脹作用，其所治之癥與FD表現(xiàn)相吻合。本研究通過不同濃度莪術對FD大鼠神經遞質的影響，探討莪術治療FD的可能價值和作用機制，現(xiàn)報道如下。

1 材料和方法

1.1 實驗材料 莪術（廣西，冬季采挖，由浙江中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院提供，經浙江中醫(yī)藥大學鑒定符合標準）制備成25%和50%的水煎液，4℃冰箱保存?zhèn)溆?；多潘立酮片劑（商品名：嗎丁啉，?guī)格10mg×42片，西安揚森制藥有限公司生產，批號140224810）。Wistar大鼠（清潔級）50只購于北京維通利華實驗動物技術有限公司[動物許可證號：SYXK（京）2012-0024]，體重190～230g，雌雄各半。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 采用簡單隨機分組，將50只大鼠按體重依次編號，根據(jù)編號尾數(shù)分為正常對照組、模型對照組、25%莪術組、50%莪術組、0.1%多潘立酮組，每組各10只。正常對照組常規(guī)喂養(yǎng)4周，其余4組進行FD大鼠建模，進行不規(guī)則喂養(yǎng)4周。造模方法[2]：從第2周開始，用長海綿鉗夾大鼠尾巴遠端1/3處，不破皮為度，激怒全籠大鼠，引發(fā)相互廝打，每次刺激30min，30min內連續(xù)不斷刺激，用0.5%碘伏涂擦打斗受傷部位控制感染，每隔3h刺激1次，4次/d，連續(xù)刺激1周。當觀察到大鼠進食量顯著減少，毛發(fā)變暗，枯黃不順，并有緊張、焦慮等表現(xiàn)，說明造模成功。之后對大鼠開始灌胃給藥，模型對照組按1ml/100g給予0.9%氯化鈉溶液灌胃，其余各組分別用25%莪術水煎液、50%莪術水煎液、0.1%多潘立酮混懸液給藥，用量均為1ml/100g，給藥時間為2周。實驗結束后，大鼠腹部解剖學觀察顯示，所有模型組大鼠各臟器未發(fā)現(xiàn)器質性改變，胃腸無潰瘍，肝臟色澤正常。

1.2.2 組織處理 于末次給藥后12h將造模成功大鼠及正常對照組大鼠斷頭,留取整個胃組織，并用甲醛固定。自幽門附近處取適量的胃竇組織，用冷水沖洗干凈后稱重，按質量體積比加0.9%氯化鈉溶液，制成10%的組織勻漿。組織勻漿離心10min（3 000r/min），取上清液置-20℃冰箱保存?zhèn)錂z。

1.2.3 觀察指標 采用ELISA雙抗體夾心法測定胃竇組織中乙酰膽堿酯酶（AchE）、一氧化氮（NO）、血管活性腸肽（VIP）含量，實驗試劑盒由杭州越欣生物科技有限公司提供（美國R﹠D公司分裝試劑盒，批號201211），具體操作按試劑盒說明書進行。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件，計量資料以表示，多組計量資料比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠胃竇組織AchE、NO及VIP含量的比較見表1。

表1 各組大鼠胃竇組織AchE、NO及VIP含量的比較（nmol/g）

由表1可見，5組大鼠AchE、NO及VIP含量差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01），模型對照組與正常對照組，25%組、50%組、0.1%多潘立酮組與模型對組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01）。

3 討論

FD是一種常見功能性疾病，普通人群發(fā)病率約為10%[3]。FD的發(fā)病機制至今尚未清楚，超過2/3的FD患者存在胃電圖、胃竇/十二指腸蠕動異常,表明胃與十二指腸的蠕動障礙可能是FD的病理生理機制[4]；另外，胃腸激素紊亂和腦-腸軸功能障礙也與FD的發(fā)生、發(fā)展密切相關。除中樞神經系統(tǒng)外，胃腸中具有一套獨特的內在神經系統(tǒng)，即腸道神經系統(tǒng)（ENS），控制著胃腸道的運動、分泌、血流及物質轉運。ENS具有2種不同的功能,下調抑制性神經元與上調興奮性神經元[5]。主要的興奮性神經遞質，包括乙酰膽堿（Ach）、P物質；抑制性神經遞質主要包括NO、VIP[6]。臨床上治療FD常對癥治療，停藥后癥狀易復發(fā)。中醫(yī)治療FD取得了較好的臨床效果。研究證實，中藥可能通過影響FD患者血清中神經遞質而發(fā)揮其作用[7]。近期，國內學者用疏肝和胃法等中藥方劑對FD患者進行治療后證實，F(xiàn)D患者血清胃泌素改善，血清NO含量明顯降低,其它血清胃腸激素水平變化,可促進胃腸動力，加快胃排空,其消化不良癥狀明顯改善，安全性較好[8-9]。單味中藥對FD患者胃竇中神經遞質影響的報道并不多。莪術是一味應用較為廣泛的中藥材，具有活血化瘀作用；臨床上可用于食積氣滯較重者，有較強的行氣止痛消脹作用，其所治之癥與FD表現(xiàn)有諸多吻合，但其確切機制并不清楚。

本研究提示，F(xiàn)D大鼠胃竇組織中AchE濃度較正常明顯下降，不同濃度莪術組及藥物組均可明顯提高FD大鼠胃竇組織中AchE含量，但AchE的升高并沒有隨著莪術濃度的升高而升高,這與本課題組之前的研究結果相符[10]。由此可推斷，不同濃度莪術對FD大鼠胃竇組織中AchE濃度可產生不同影響，這將為今后臨床的用藥量提供一定的參考。Ach主要是由AchE水解而消除,在測定含量時,兩者呈正相關。Ach是由在胃腸道的內源性神經支配系統(tǒng)中的膽堿能神經釋放的，為胃腸動力興奮性遞質,具有刺激胃腸肌收縮和促進胃腸蠕動的作用。Nagahama等[11]在研究藥物治療FD時發(fā)現(xiàn)，藥物通過膽堿能通路，抑制AchE活性，從而改善消化道產生的促胃腸動力活性。

本研究也提示，F(xiàn)D大鼠胃竇組織中NO、VIP含量較正常對照組明顯上升，不同濃度莪術組及藥物組均可明顯降低FD大鼠胃竇組織中NO、VIP水平，但NO、VIP的降低并沒有隨莪術濃度的升高而降低。由此可推斷，不同濃度莪術對FD大鼠胃竇組織中NO、VIP濃度可產生不同的影響。NO是一種抑制性神經遞質，存在消化道不同部位，在抑制性神經元釋放的NO中，扮演著重要的的生理作用。在腸道，NO的合成可以通過酶促通路,非酶通路或腸道細菌通路等。一氧化氮合成酶（iNOS）可以在短時間內快速合成大量的NO。多項研究證明FD患者黏膜中肥大細胞和嗜酸性粒細胞浸潤，提示FD患者存在慢性炎癥[12]；而炎癥和免疫系統(tǒng)激活都可以觸發(fā)iNOS的表達。有學者對FD患者進行研究，發(fā)現(xiàn)餐后不適綜合征患者十二指腸黏膜中iNOS水平明顯高于正常對照組[13]。其表達與上腹脹呈正相關,但與其他癥狀無顯著相關；iNOS表達水平與肥大細胞脫顆粒的百分比呈正相關，提示十二指腸iNOS可能參與餐后不適綜合征的發(fā)病機制。Park等[14]研究表明，iNOS基因也與FD有關。VIP是一種28-氨基酸多肽，位于胃腸道G蛋白偶聯(lián)受體[15]，誘發(fā)腸道平滑肌放松，刺激水和碳酸氫鹽分泌，抑制胃酸和胃蛋白酶的分泌[16]。在腸神經系統(tǒng)，NO和VIP是兩個主要的抑制性神經遞質[17]。有學者在研究乙酰水楊酸導致的豬幽門前區(qū)炎癥時，發(fā)現(xiàn)VIP等多種神經介質與炎癥的進展有關[18]。在某些病理條件下,提高胃竇平滑肌NO和VIP水平可能導致胃竇收縮減少和胃排空延遲。

由于FD患者在癥狀表現(xiàn)上各有不同，故臨床上很難將其歸于一個統(tǒng)一的病證。根據(jù)其臨床表現(xiàn)程度的不同，中醫(yī)將FD歸為“胃脘痛”、“痞滿”、“嘈雜”等，認為其主要發(fā)病機制為脾胃氣機升降失司及瘀血內停互為因果而致。薈萃分析顯示[19]，針灸可明顯改善FD患者的主要癥狀，提高生活質量。莪術因其能行氣破血消積，功能行血，與其它藥物相伍，改善FD癥狀。

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Effect of curcuma zedoary on contents of neurotransmitters in gastric antrum of rats with functional dyspepsia

CHEN Xingling,HU Yuxiu,WANG Jianchao,et al.Department of Gastroenterology,the Second Affiliated Hospital,Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310005,China

Curcuma zed oary Functionaldyspep sia Neurotransmitters Gastric antrum

2016-09-05）

（本文編輯：馬雯娜）

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.17.2016-1026

浙江省教育廳科研計劃項目（Y200907811）

310005杭州，浙江中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院消化科（陳興玲、胡毓秀），中心實驗室（王劍超、陶鳳）

胡毓秀，E-mail：huyuxiu70@126.com

【 Abstract】 Objective To investig ate the effect of curcuma zed oary (CZ)on contents of neurotransmitters in g astric antrum of rats with functionald ysp ep sia(FD). Methods Fifty rats were rand omly d ivid ed into five g roup s:controlg roup,mod el g roup,25%CZ g roup,50%CZ g roup and d omp erid one g roup.FD mod elwas ind uced in allg roup s excep t controlg roup,and 25%,50%water d ecoction of curcuma zed oary,0.1%d omp erid one were ad ministrated b y g avag e in 3 treatment g roup s, resp ectively.The contents of acetylcholin esterase(AchE),nitric oxid e(NO),vasoactive intestinalp ep tid e(VIP)in g astric antrum were measured. Results Comp ared to the control g roup,the contents of NO and VIP in FD g roup(mod el g roup)were increased sig nificantly(P＜0.01),and the contents of Ach E were d ecreased(P＜0.01),the contents of AchE were increased,the contents of VIP and NO in 25%and 50%CZ g roup s were d ecreased(P＜0.01).Conclusion The curcuma zed oary increases the contents of Ach E and d ecreases VIP and NO in g astric antrum of FD rat,ind icating this d rug may imp rove the symp toms of functionald ysp ep sia.