陶德友 朱文波

●臨床研究

乳腺癌組織中ZNF217和p53的表達(dá)及其臨床意義

陶德友 朱文波

目的 探討乳腺癌組織中鋅指蛋白217(ZNF217）和p 53蛋白的表達(dá)特點及其臨床意義。方法 采用免疫組化En Vision法檢測80例乳腺癌（乳腺癌組）和對應(yīng)癌旁組織（對照組）中ZNF217和p 53蛋白的表達(dá)情況，分析上述指標(biāo)與臨床病理因素（年齡、腫瘤大小、分型、組織學(xué)分級、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）的關(guān)系，以及乳腺癌組織中ZNF217與p 53表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果 乳腺癌組織中ZNF217和p 53蛋白陽性表達(dá)率分別為71.25%（57/80）和73.75%（59/80），高于對應(yīng)癌旁組織的20.00%（16/80）和10.00%（8/80），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01）；ZNF217和p 53蛋白表達(dá)均與乳腺癌臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（均P＜0.01），而均與患者年齡、腫瘤大小、組織學(xué)類型及分級無關(guān)(均P＞0.05）；乳腺癌組織中ZNF217與p 53的表達(dá)呈正相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論 乳腺癌組織中ZNF217和p 53蛋白表達(dá)明顯升高，其異常表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有關(guān)。

鋅指蛋白 p53 乳腺癌

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率逐年上升，發(fā)病年齡呈年輕化趨勢[1-2]。乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展是涉及多基因、多蛋白的復(fù)雜生物學(xué)過程，因此，發(fā)現(xiàn)針對乳腺癌治療的有效靶基因具有重要臨床意義。鋅指蛋白217（ZNF217）是新發(fā)現(xiàn)的候選癌基因，在多種正常組織中都有低表達(dá)，而在腫瘤組織中存在過度表達(dá)，且與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)[3-4]。ZNF217作為卵巢癌基因，其不利于正常人卵巢表面上皮細(xì)胞（OSE）的衰老，通過滅活OSE中 p53/成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤基因（retinoblastoma gene, RB）而促進(jìn)腫瘤進(jìn)展[5]。本研究采用免疫組化En Vision二步法檢測乳腺癌組織中ZNF217和p53蛋白表達(dá)情況，分析上述指標(biāo)與乳腺癌臨床病理因素的關(guān)系以及ZNF217與p53的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選擇本院2010年2月至2015年3月手術(shù)切除的具有完整臨床資料的80例乳腺癌患者的手術(shù)標(biāo)本（乳腺癌組），均經(jīng)病理明確診斷，患者術(shù)前未接受放療、化療或者內(nèi)分泌治療?；颊呔鶠榕?，年齡32～81（65.6±10.8）歲，＜46歲35例，≥46歲45例；腫瘤直徑＜2cm 30例，≥2cm 50例；組織學(xué)分級：Ⅰ級20例，Ⅱ級38例，Ⅲ級22例；TNM分期：Ⅰ期17例，Ⅱ期35例，Ⅲ期20例，Ⅳ期8例；伴腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移55例。同時將距離腫塊邊緣5cm外的對應(yīng)癌旁正常組織80例作為對照（對照組）。

1.2 方法

1.2.1 實驗試劑 ZNF217兔抗人多克隆抗體（sc-67223）購自美國Santa Crua公司（工作濃度1∶100），p53鼠抗人即用型單克隆抗體購自福州邁新生物技術(shù)有限公司，免疫組化檢測試劑盒購自北京中杉金橋生物有限公司。

1.2.2 實驗方法 所用標(biāo)本均采用10%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋、切片、染色。取石蠟組織常規(guī)連續(xù)切片，厚約4μm，采用免疫組化En Vision二步法，實驗步驟按照試劑盒說明書操作。以PBS代替一抗作陰性對照，用已知陽性組織作陽性對照。

1.2.3 結(jié)果判定 ZNF217表達(dá)主要定位于細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞膜有少量陽性表達(dá)，出現(xiàn)淡黃色或棕黃色顆粒者為陽性表達(dá)。p53表達(dá)定位于細(xì)胞核，呈現(xiàn)淡黃色或棕黃色顆粒分布為陽性細(xì)胞。在光學(xué)顯微鏡下，觀察＞5個高倍視野，計數(shù)≥1 000個細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)，陽性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性，≥10%為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 15.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，ZNF217和p53表達(dá)的相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組乳腺組織中ZNF217和p53的表達(dá) 見圖1、2和表1。

圖1 乳腺癌組織中ZNF217表達(dá)（EnVision法，×400）

圖2 乳腺癌組織中p53蛋白表達(dá)（EnVision法，×400）

表1 兩組乳腺組織中ZNF217和p53的表達(dá)[例（%）]

由圖1、2及表1可見，ZNF217分布于細(xì)胞質(zhì)中，p53分布于細(xì)胞核中為主，可見棕黃色顆粒。乳腺癌組ZNF217和p53蛋白表達(dá)陽性率均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=42.349、66.788，均P＜0.01）。

2.2 乳腺癌組織中ZNF217和p53的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系 見表2。

表2 乳腺癌組織中ZNF217和p53的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系[例（%）]

由表2可見，不同乳腺癌臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者ZNF217和p53蛋白陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01），而不同年齡、腫瘤大小、組織學(xué)類型及組織學(xué)分級患者ZNF217和p53蛋白陽性表達(dá)率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。

2.3 乳腺癌組織中ZNF217與p53表達(dá)的相關(guān)性 見表3。

表3 乳腺癌組織中ZNF217與p53表達(dá)的相關(guān)性

由表3可見，乳腺癌組織中ZNF217和p53表達(dá)共陽性者51例，共陰性者15例，乳腺癌組織中ZNF217與p53表達(dá)呈正相關(guān)（rs=0.563，P＜0.05）。

3 討論

ZNF217是新進(jìn)發(fā)現(xiàn)的候選癌基因，屬于鋅指蛋白家族成員之一，定位于人染色體20q13.2，編碼Krupple樣轉(zhuǎn)錄因子，擁有8個C2H2鋅指結(jié)構(gòu)和富含脯氨酸的轉(zhuǎn)錄激活區(qū)[6]。ZNFs可通過對下游多種基因表達(dá)的調(diào)控，參與惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移、增殖和凋亡過程[7]。ZNF217除了參與乳腺癌的進(jìn)展，還在大腸癌、前列腺癌等多種惡性腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用[8-9]。將ZNF217-HA轉(zhuǎn)染到p53/pRB表達(dá)缺失的卵巢上皮細(xì)胞，可以獲得永生化的細(xì)胞系，表明ZNF217對細(xì)胞的作用主要依賴于p53和pRB的表達(dá)情況。p53-p21-pRB通路在細(xì)胞循環(huán)抑制和細(xì)胞衰老過程中起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用[5]。p53基因包括野生型和突變型，野生型p53基因定位于染色體17p13.1，是一個重要的細(xì)胞周期調(diào)控基因。研究證實，當(dāng)細(xì)胞受到損傷時，野生型p53可抑制細(xì)胞周期由G1期進(jìn)入S期，誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡，使細(xì)胞在新的周期復(fù)制或程序性細(xì)胞死亡中得到修復(fù)或恢復(fù)，從而抑制腫瘤的發(fā)生[10]。野生型p53蛋白半衰期較短，免疫組織化學(xué)技術(shù)不容易檢測到，在腫瘤組織中檢測到的是突變型的p53蛋白[11]。

本研究結(jié)果表明，乳腺癌組織中ZNF217和p53蛋白陽性率分別為71.25%和73.75%，明顯高于癌旁正常乳腺組織的20.00%和10.00%。表明ZNF217和p53蛋白表達(dá)升高在乳腺癌發(fā)生過程中起作用，與文獻(xiàn)報道一致[12]。有研究認(rèn)為，ZNF217調(diào)節(jié)野生型p53基因發(fā)生突變，p53基因突變能通過加強細(xì)胞轉(zhuǎn)化促進(jìn)惡變進(jìn)展，并在抗腫瘤治療時起抵制作用[13]。ZNF217和p53蛋白與乳腺癌臨床病理因素關(guān)系的分析顯示，隨著乳腺癌患者臨床分期進(jìn)展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，ZNF217和p53蛋白陽性表達(dá)率升高。提示ZNF217和p53蛋白表達(dá)與乳腺癌的臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。相關(guān)性分析顯示，在乳腺癌組織中，ZNF217與 p53表達(dá)呈正相關(guān)，表明ZNF217和p53協(xié)同作用參與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程。體外研究顯示，將ZNF217轉(zhuǎn)染到缺乏p16INK4a表達(dá)的人類乳腺上皮細(xì)胞后，人類乳腺上皮細(xì)胞的生命得以延長。p16INK4a是p53和pRB上游分子。因此，pRB和p53可能是ZNF217介導(dǎo)的無限增生的下游因子[5]。

綜上所述，ZNF217和突變型p53過表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，本研究為乳腺癌的早期檢測、預(yù)后評估及靶向治療提供了一定的理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)，ZNF217和p53在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中相互調(diào)節(jié)的具體機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

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Expression of ZNF217 and p53 in breast cancer and its clinical significance

TAO Deyou,ZHU Wenbo.Department of Oncology, Luqiao Hospital,Taizhou Enze Medical Center,Taizhou 318050,China

Zinc fing er p rotein p 53 Breastcancer

2017-01-09）

（本文編輯：馬雯娜）

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.14.2017-71

臺州市科技計劃項目（102KY13）

318050臺州恩澤醫(yī)療中心（集團(tuán)）路橋醫(yī)院腫瘤外科

陶德友，E-mail：9890830@qq.com

【 Abstract】 Objective To investig ate the exp ression of zinc fing er p rotein ZNF217 and p 53 in b reast cancer and its sig nificance. Methods The exp ression of ZNF217 and p 53 p rotein in 80 cases of b reast cancer(b reast cancer g roup)and corresp ond ing ad jacent tissues(control g roup)were d etected b y immunohistochemical En Vision method.The associations b etween exp ression of those p roteins and clinicop atholog icalfactors(ag e,tumor size,typ ing,histolog ical g rad e,clinical stag e and lymp h nod e metastasis)was analyzed,the correlation b etween the exp ression of ZNF217 and p 53 in b reast cancer tissues was also analyzed. Results The p ositive rates of ZNF217 and p 53 exp ression were sig nificantly hig her than those in non-cancerous ad jacent b reast tissues(P＜0.05).The exp ression of ZNF217 and p 53 p rotein was correlated with clinicalstag e and lymp h nod e metastasis,b utnotcorrelated with ag e,tumor size,histolog icaltyp e and g rad ing(P＞0.05).There was a p ositive correlation b etween ZNF217 and p 53 exp ression in b reastcancer(P＞0.05). Conclusion The exp ression of ZNF217 and p 53 is sig nificantly increased in b reast cancer,which is closely correlated with occurrence,d evelop ment and metastasis of b reast cancer.