王長松，范乃軍，呂學(xué)霞，贠 田，蒙念龍，原旭濤，李富林，王志成

1.中國人民解放軍第150中心醫(yī)院病理科，河南洛陽471031;2.中國人民解放軍第153中心醫(yī)院病理科

抑制iASPP基因?qū)Υ竽c癌細(xì)胞凋亡作用的實(shí)驗(yàn)研究

王長松1，范乃軍1，呂學(xué)霞1，贠 田1，蒙念龍1，原旭濤1，李富林1，王志成2

1.中國人民解放軍第150中心醫(yī)院病理科，河南洛陽471031;2.中國人民解放軍第153中心醫(yī)院病理科

目的 通過構(gòu)建針對(duì)p53凋亡抑制蛋白(inhibitory member of the apoptosistimulating protein of p53，iASPP)的RNAi質(zhì)粒，研究在體內(nèi)外抑制iASPP基因表達(dá)后對(duì)大腸癌細(xì)胞HT-29凋亡的影響。方法 構(gòu)建iASPP的腺病毒RNAi質(zhì)粒pAd-iASPP-RNAi，體外轉(zhuǎn)染HT-29細(xì)胞，同時(shí)建立HT-29的裸鼠移植瘤模型;采用RT-PCR和Western blotting檢測(cè)轉(zhuǎn)染后瘤細(xì)胞iASPP基因在mRNA和蛋白質(zhì)水平的變化;采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后瘤細(xì)胞凋亡的變化。結(jié)果 轉(zhuǎn)染iASPP RNAi后，與陰性對(duì)照組、空載病毒對(duì)照組相比，HT-29細(xì)胞的iASPP mRNA及蛋白表達(dá)量均降低;iASPP-RNAi組HT-29細(xì)胞的凋亡率、壞死率與陰性對(duì)照組及空白病毒對(duì)照組相比顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。裸鼠移植瘤細(xì)胞在病毒轉(zhuǎn)染后，細(xì)胞體積增大，核染色質(zhì)濃集，出現(xiàn)凋亡;移植瘤細(xì)胞的凋亡率、壞死率與陰性對(duì)照組、空載病毒對(duì)照組相比顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論 在體內(nèi)外抑制iASPP基因的表達(dá)能夠促進(jìn)大腸癌細(xì)胞HT-29的凋亡，iASPP有可能成為大腸癌分子免疫治療的靶標(biāo)。

iASPP;HT-29細(xì)胞;RNAi;凋亡

隨著分子醫(yī)學(xué)的發(fā)展，惡性腫瘤的分類、診斷、治療及預(yù)后的判斷將逐漸以分子標(biāo)志物為基礎(chǔ)。EGFR、ALK等基因在非小細(xì)胞肺癌中的成功應(yīng)用為惡性腫瘤的治療帶來了希望。結(jié)直腸癌作為我國發(fā)病率第一的消化系統(tǒng)腫瘤，其發(fā)病率逐年上升，且呈年輕化趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅國人健康。p53凋亡刺激蛋白(apoptosisstimulating protein of p53，ASPP)家族在p53蛋白的下游分子通路上發(fā)揮關(guān)鍵性的生物學(xué)作用，該家族成員的發(fā)現(xiàn)豐富了p53蛋白在腫瘤中的作用，進(jìn)一步增強(qiáng)了對(duì)p53基因的認(rèn)識(shí)。

ASPP家族共有3個(gè)成員，即 ASPP1、ASPP2和p53凋亡抑制蛋白(inhibitory member of the apoptosis-timulating protein of p53，iASPP)，三個(gè)分子在體內(nèi)的生物學(xué)作用有所不同，ASPP1/ASPP2與p53結(jié)合促使DNA損傷的細(xì)胞發(fā)生凋亡，有抑制腫瘤的效應(yīng);而iASPP屬于癌基因，其與p53蛋白結(jié)合后能夠抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生［1］。三者具有相同的p53結(jié)合區(qū)域，因此在與p53結(jié)合時(shí)具有競爭效應(yīng)，哪個(gè)蛋白先與p53結(jié)合，結(jié)合位點(diǎn)即被封閉，后來者無法再與p53結(jié)合。p53能夠誘導(dǎo)DNA損傷細(xì)胞發(fā)生周期阻滯或直接誘導(dǎo)細(xì)胞走向凋亡，在大腸癌中超過1/2的患者存在p53基因的突變或缺失［2］。作為ASPP家族中唯一能抑制細(xì)胞凋亡的基因，抑制iASPP的表達(dá)是否能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡呢?阻斷iASPP與p53相結(jié)合，強(qiáng)化ASPP1/ASPP2的競爭能力，逆轉(zhuǎn)ASPP1/ASPP2的促凋亡活性，可能是一個(gè)新的有效的腫瘤免疫治療策略和方向。本文通過對(duì)大腸癌細(xì)胞HT-29中的iASPP阻斷從而觀察瘤細(xì)胞的凋亡情況，為進(jìn)一步研究iASPP的功能及其在大腸癌中是否能夠成為潛在的分子免疫治療靶標(biāo)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 大腸癌細(xì)胞株 HT-29、pAd-iASPP-RNAi、XL-Gold菌、293細(xì)胞由本實(shí)驗(yàn)室保存;mRNA抽提試劑盒、RT-PCR試劑盒、Ex Taq酶購自大連寶生物公司;AMV反轉(zhuǎn)錄酶購自Promega公司;Annexin-V/PI凋亡檢測(cè)試劑盒購自Biovision公司;兔抗人多克隆抗體iASPP購自Abcam公司。二抗購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。BALB/C裸鼠購自上海藥物研究所等級(jí)動(dòng)物中心。

1.2 引物 p53和iASPP引物序列參照文獻(xiàn)［3］合成，具體如下:p53上游:5'-CAGCCAAGTCTGTGACTTGCACGTAC-3'，下游:5'-CTATGTCGAAAAGTGTTTCTGTCATC-3'，產(chǎn)物大小:293 bp。iASPP 上游:5'-GATGAACTGACCAAGCA-3';下 游:5'-CTCCCTCCAAGG CAAC-3'，產(chǎn)物大小:753 bp。

1.3 大腸癌HT-29細(xì)胞株中iASPP mRNA的表達(dá)及p53狀態(tài)檢測(cè) 取1×106個(gè)對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞，提取總RNA，按照RT-PCR試劑盒的說明進(jìn)行cDNA第一鏈的合成，PCR反應(yīng)，產(chǎn)物純化，瓊脂糖凝膠電泳，測(cè)序，判定HT-29細(xì)胞中p53基因的狀態(tài)。

1.4 pAd-iASPP-RNAi轉(zhuǎn)染后對(duì)大腸癌細(xì)胞的影響 取對(duì)數(shù)生長期的HT-29細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度，按1∶10、1∶20、1∶30 的不同濃度比例將 pAd-iASPP-RNAi加入24孔板中，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，共分為:陰性對(duì)照組、空載病毒對(duì)照組、pAd-iASPP-RNAi組。培養(yǎng)48 h后，收集細(xì)胞，抽提RNA，檢測(cè)iASPP mRNA的表達(dá)，Western blotting方法檢測(cè)iASPP蛋白的表達(dá)。

1.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)pAd-iASPP-RNAi轉(zhuǎn)染后HT-29細(xì)胞的凋亡 取對(duì)數(shù)生長期的HT-29細(xì)胞，分組同上，調(diào)整細(xì)胞密度至1×106ml-1;取1×106個(gè)細(xì)胞，1 000 r/min，低溫離心10 min，棄上清。用預(yù)冷 PBS液洗滌并重懸細(xì)胞于緩沖液中，按照Annexin-V/PI凋亡檢測(cè)試劑盒說明進(jìn)行凋亡檢測(cè)。

1.6 裸鼠移植瘤模型的建立 取對(duì)數(shù)生長期的HT-29細(xì)胞，棄培養(yǎng)基后用37℃預(yù)溫的PBS洗滌細(xì)胞3次;制備單細(xì)胞懸液，用含100 g/L胎牛血清1640培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，每只裸鼠注射HT-29細(xì)胞約5×108個(gè)，每3 d注射1次，直至有瘤塊出現(xiàn)。

1.7 pAd-iASPP-RNAi對(duì)裸鼠移植瘤細(xì)胞凋亡的影響 取移植瘤裸鼠模型隨機(jī)分為3組，分別于瘤塊局部注射pAd-iASPP-RNAi病毒上清、空載病毒對(duì)照和陰性對(duì)照(注射等量的生理鹽水)。每3 d注射1次，連續(xù)注射2次。注射完畢1周后，處死裸鼠，取移植瘤標(biāo)本制備成單細(xì)胞懸液，PBS洗滌細(xì)胞后調(diào)整細(xì)胞密度至2×106ml-1;Annexin-V-FITC/PI染液重懸細(xì)胞，室溫下孵育15 min后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡的變化。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以例數(shù)(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HT-29細(xì)胞的p53狀態(tài) HT-29細(xì)胞的RT-PCR產(chǎn)物測(cè)序后與NCBI/Blaster上的p53標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果顯示，HT-29細(xì)胞表達(dá)突變型p53基因。

2.2 HT-29細(xì)胞中iASPP mRNA的表達(dá) HT-29細(xì)胞經(jīng)提取總 RNA 后進(jìn)行 RT-PCR，10 μl產(chǎn)物和1 μl的10×上樣緩沖液混合，14 g/L瓊脂糖凝膠電泳，觀察到一條753 bp的產(chǎn)物條帶(見圖1)。

圖1 iASPP mRNA在HT-29細(xì)胞中的表達(dá)Fig 1 Expression of iASPP mRNA in HT-29 cells

2.3 pAd-iASPP-RNAi的腺病毒包裝 限制性內(nèi)切酶線性化pAd-iASPP-RNAi后轉(zhuǎn)染AD-293細(xì)胞，培養(yǎng)1周后鏡下觀察細(xì)胞出現(xiàn)空泡樣改變，有綠色熒光蛋白GFAP的表達(dá)(見圖2)，收集病毒上清再次感染AD-293細(xì)胞，細(xì)胞沉積物提取RNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，電泳觀察到1條753 bp大小的條帶即為插入的片段(見圖3)。將重組腺病毒在AD-293細(xì)胞中大量擴(kuò)增后，收集含病毒的培養(yǎng)上清，反復(fù)凍融后分裝，供下一步應(yīng)用。

圖2 AD-293細(xì)胞的熒光表達(dá)Fig 2 Fluorescent expression of AD-293 cells

圖3 pAd-iASPP-RNAi感染AD-293細(xì)胞后PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig 3 Results of PCR amplification after pAd-iASPP-RNAi infection in AD-293 cells

2.4 pAd-iASPP-RNAi處理后HT-29細(xì)胞中iASPP mRNA及蛋白的變化 pAd-iASPP-RNAi病毒感染HT-29細(xì)胞后，iASPP mRNA及蛋白表達(dá)水平均有不同程度的下降，相對(duì)值分別為93.2%和91.5%，與空載病毒對(duì)照組、陰性對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.01，見圖4)。

圖4 pAd-iASPP-RNAi轉(zhuǎn)染HT-29細(xì)胞后iASPP mRNA(A)及蛋白(B)的變化 1:空載病毒對(duì)照組;2:陰性對(duì)照組;3:pAd-iASPP-RNAi組Fig 4 Changes of iASPP mRNA(A)and protein(B)after pAd-iASPP-RNAi transfection in HT-29 cells 1:empty virus control group;2:negative control group;3:pAd-iASPP-RNAi group

2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)pAd-iASPP-RNAi處理后HT-29細(xì)胞凋亡的變化 經(jīng)pAd-iASPP-RNAi處理后，HT-29細(xì)胞的凋亡率、壞死率與空載病毒對(duì)照組、陰性對(duì)照組相比，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01，見表1)。

表1 pA-iASPP-RNAi處理HT-29后細(xì)胞凋亡率和壞死率的變化(±s，%)Tab 1 The changes of apoptosis and necrosis percentage after HT-29 treatment with pAd-iASPP-RNAi(±s，%)

表1 pA-iASPP-RNAi處理HT-29后細(xì)胞凋亡率和壞死率的變化(±s，%)Tab 1 The changes of apoptosis and necrosis percentage after HT-29 treatment with pAd-iASPP-RNAi(±s，%)

注:與空載病毒對(duì)照組、陰性對(duì)照組相比，aP＜0.01。

組別 凋亡率 壞死率陰性對(duì)照組10.2±1.6 9.8±0.8空載病毒對(duì)照組 11.4±2.1 12.1±1.7 pAd-iASPP-RNAi組 67.8±5.3a 22.7±3.2a

2.6 HT-29大腸癌細(xì)胞株裸鼠移植瘤模型的建立裸鼠皮下注射HT-29細(xì)胞懸液3次后，注射局部逐漸出現(xiàn)小的皮下結(jié)節(jié)，質(zhì)地較軟，相對(duì)活動(dòng)，隨后進(jìn)行性增大，質(zhì)地變硬，與周圍組織粘連，不易推動(dòng)，表面皮膚小血管擴(kuò)張。鏡下見移植瘤細(xì)胞與體外培養(yǎng)細(xì)胞具有相似的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，細(xì)胞排列紊亂，胞漿豐富，胞核深染，上皮樣，異型性顯著。3周后將移植瘤裸鼠隨機(jī)分為3組，分別局部注射pAd-iASPP-RNAi、空載病毒、生理鹽水對(duì)照。大體觀察裸鼠的變化不明顯;組織學(xué)觀察，可見pAd-iASPP-RNAi處理后瘤細(xì)胞體積增大，胞漿豐富、變淡，細(xì)胞核染色質(zhì)濃集，部分細(xì)胞可見嗜酸性壞死、碎片狀壞死，甚至凋亡，間質(zhì)內(nèi)可見淋巴細(xì)胞浸潤(見圖5)。

圖5 pAd-iASPP-RNAi處理后裸鼠移植瘤細(xì)胞的變化(HE 200×)Fig 5 Changes of transplanted tumor cells in nude mice treated with pAd-iASPP-RNAi(HE 200×)

2.7 pAd-iASPP-RNAi處理后裸鼠移植瘤細(xì)胞凋亡和壞死的變化 裸鼠HT-29移植瘤模型經(jīng)pAdiASPP-RNAi處理后，瘤細(xì)胞的凋亡率、壞死率升高，與陰性對(duì)照組、空載病毒對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.01，見圖6)。

圖6 pAd-iASPP-RNAi組、空載病毒對(duì)照組及陰性對(duì)照組移植瘤細(xì)胞的凋亡率、壞死率Fig 6 The percentage of apoptosis and necrosis of transplanted tumor cells in pAd-iASPP-RNAi group，empty virus control group and negative control group

3 討論

結(jié)直腸癌是我國發(fā)病率最高的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，近年來由于飲食結(jié)構(gòu)及生活習(xí)慣等的影響，發(fā)病率顯著上升，且逐漸出現(xiàn)低齡化現(xiàn)象，盡管臨床采取了以手術(shù)為主的綜合性治療措施，取得了一定的效果，但結(jié)直腸癌患者在術(shù)后出現(xiàn)的原位復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及耐藥，在一定程度上影響了患者的生存質(zhì)量、生存時(shí)間。如何篩選結(jié)直腸癌的分子靶標(biāo)，把不同分子類型的結(jié)直腸癌患者進(jìn)行分類并采取精準(zhǔn)治療，同時(shí)研發(fā)可能的分子免疫靶向治療藥物是目前臨床需要解決的一個(gè)難題。

<1)，且各件產(chǎn)品是否為不合格品相互獨(dú)立．

ASPP家族成員在精準(zhǔn)調(diào)控p53蛋白的抑癌功能方面具有重要作用，是p53基因發(fā)揮生物學(xué)作用的下游基因［4-5］。ASPP蛋白及基因在多種腫瘤中均有異常表達(dá)，如非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌［6］、血液腫瘤［7］等，ASPP家族成員在這些腫瘤中存在ASPP1/2低表達(dá)，iASPP高表達(dá)的現(xiàn)象。有研究［8］顯示，在結(jié)直腸癌組織中iASPP的表達(dá)顯著高于癌旁組織。

作為抑制腫瘤細(xì)胞凋亡的基因，iASPP通過與ASPP1/ASPP2競爭性地結(jié)合p53蛋白從而抑制后者介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，iASPP也因此被稱為癌基因。在多種腫瘤中，iASPP的過表達(dá)能顯著增加腫瘤細(xì)胞的增殖活性、侵襲性，對(duì)放/化療的耐受性，且預(yù)后較差。iASPP通過p53和/或非p53依賴的分子通路促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和浸潤。我們的前期研究［9-10］顯示，iASPP mRNA在乳腺癌細(xì)胞MCF-7中有過表達(dá)現(xiàn)象，而ASPP1/ASPP2的表達(dá)量相對(duì)較低，繼而我們?cè)O(shè)計(jì)了針對(duì)iASPP基因的RNAi，通過腺病毒載體轉(zhuǎn)染表達(dá)野生型p53基因的MCF-7細(xì)胞，結(jié)果顯示，解除iASPP對(duì)p53基因的抑制后，乳腺癌細(xì)胞株的凋亡率顯著增加。微小RNA-124也可直接作用于iASPP抑制腫瘤細(xì)胞的生長和侵襲［11］。在大腸癌細(xì)胞的研究中發(fā)現(xiàn)，iASPP在HT-29細(xì)胞株中存在過表達(dá)，對(duì)于表達(dá)突變型p53的大腸癌細(xì)胞株HT-29，如果阻斷了iASPP的過表達(dá)后，對(duì)腫瘤細(xì)胞的凋亡會(huì)產(chǎn)生何種影響呢?

我們應(yīng)用已構(gòu)建的針對(duì)iASPP的RNAi，然后通過腺病毒載體感染AD-293細(xì)胞，獲得具備感染能力的上清液，經(jīng)3輪擴(kuò)增后，在細(xì)胞沉積物中檢測(cè)到插入片段，證實(shí)構(gòu)建成功。將含有iASPP-RNAi的病毒液感染大腸癌細(xì)胞株HT-29后，經(jīng)過RT-PCR和Westernblotting方法檢測(cè)到iASPP基因在mRNA和蛋白質(zhì)水平均顯著降低，HT-29細(xì)胞的凋亡率也顯著增加。在體外移植瘤模型中，局部注射含有iASPP-RNAi的病毒后，瘤細(xì)胞的凋亡率也顯著增加，這些結(jié)果進(jìn)一步提示，在大腸癌細(xì)胞中，干擾iASPP的表達(dá)后能夠顯著增加腫瘤細(xì)胞的凋亡。

iASPP的C末端域主要與p53的DNA核心區(qū)域臨近的連接區(qū)域相結(jié)合，ASPP2和iASPP與p53的結(jié)合位點(diǎn)不同，iASPP與p53的連接區(qū)域結(jié)合后能夠抑制ASPP2與p53的結(jié)合，即使ASPP2已經(jīng)與p53結(jié)合時(shí)，也能夠抑制ASPP2的生物學(xué)功能［12］。通過抑制iASPP在大腸癌細(xì)胞株HT-29中的表達(dá)能夠顯著增加瘤細(xì)胞的凋亡，為結(jié)直腸癌的分子免疫治療提供理論基礎(chǔ)，同時(shí)也有助于結(jié)直腸癌的分子分型。

［1］Bergamaschi D，Samuels Y，O'Neil NJ，et al.iASPP oncoprotein is a key inhibitor of p53 conserved from worm to human ［J］.Nat Genet，2003，33(2):162-167.

［2］項(xiàng)芳芳，毛高平.大腸癌與抑癌基因相關(guān)性的研究現(xiàn)狀［J］.世界華人消化雜志，2012，20(5):394-398.

Xiang FF，Mao GP.Association between colorectal cancer and tumor suppressor genes:recent research progress［J］.World Chinese Journal of Digestology，2012，20(5):394-398.

［3］王長松，李紅，高春芳，等.iASPP對(duì)表達(dá)野生型P53基因的乳腺癌細(xì)胞株MCF-7凋亡的影響［J］.中國病理生理學(xué)雜志，2010，26(2):282-286.

Wang CS，Li H，Gao CF，et al.iASPP on apoptosis in breast cancer cells which expressed wild type p53［J］.Chinese Journal of Pathophysiology，2010，26(2):282-286.

［4］Samuels-Lev Y，O'Connor DJ，Bergamaschi D，et al.ASPP proteins specifically stimulate the apoptotic function of p53 ［J］.Mol Cell，2001，8(4):781-794.

［5］Lane D.How cells choose to die［J］.ature，2001，414(6859):25，27.

［6］Wang C，Gao C，Chen Y，et al.Expression pattern of the apoptosisstimulating protein of p53 family in p53+human breast cancer cell lines［J］.Cancer Cell Int，2013，13(1):116.

［7］Liu ZJ，ZhangY，Zhang XB，et al.Abnormal mRNA expression of ASPP members in leukemia cell lines ［J］.Leukemia，2004，18(4):880.

［8］張晶焱，潘月龍.iASPP在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及意義［J］.京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2016，36(8):383-386.

Zhang JY，Pan YL.Expression of iASPP in colorectal cancer tissue and its significance［J］.Acta Universtatis Medicinalis Nanjing(tural Science)，2016，36(8):383-386.

［9］王長松，王仰坤，喬亮，等.癌基因iASPP在乳腺癌細(xì)胞株和浸潤性導(dǎo)管癌中表達(dá)及意義［J］.實(shí)用醫(yī)藥雜志，2008，25(10):1231-1234.

Wang CS，Wang YK，Qiao L，et al.Expression of iASSP in breast cancer cell lines＆ breast int'dtration ductal cancer and its significance［J］.Prac J Med＆ Pharm，2008，25(10):1231-1234.

［10］陳燕平，劉澤軍，辛海明.ASPP家族成員mRNA在乳腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)及意義［J］.解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2008，33(11):1393-1394.

［11］Liu K，Zhao H，Yao H，et al.MicroRNA-124 regulates the proliferation of colorectal cancer cells by targeting iASPP［J］.Biomed Res Int，2013，2013:867537.

［12］Ahn J，Byeon IJ，Byeon CH，Angela M.Gronenborn.Insight into the structural basis of pro-and anti-apoptotic p53 modulation by ASPP proteins［J］.J Biolog Chem，2009，284(20):13812-13822.

The influence of inhibitory member of the ASPP family(iASPP)on apoptosis of colorectal cancer cell

WANG Changsong1，F(xiàn)AN Naijun1，LV Xuexia1，YUN Tian1，MENG Nianlong1，YUAN Xutao1，LI Fulin1，WANG Zhicheng2
1.Department of Pathology，150 Central Hospital of PLA，Luoyang 471031;2.Department of Pathology，153 Central Hospital of PLA，China

ObjectiveTo investigate the effect of the iASPP RNAi on the apoptosis of colorectal cancer HT-29 cells.MethodsThe recombinant plasmid pAd-iASPP-RNAi was transfected into HT-29 cells.The cell apoptosis was detected by FCM.And then the HT-29 transplantation tumor cells in nude mice model was set up，the expressions of iASPP RNA and protein were detected by RT-PCR and Western blotting，the apoptosis index was detected by FCM.ResultsThe results showed that the expression of iASPP was descended in HT-29 cells and the apoptosis index was increased after transfection(P ＜0.01).In transplantation tumor model，the expression of iASPP was also descended，the apoptosis index was increased(P＜0.01).ConclusionThe inhibitory expression of iASPP increases the apoptosis of colorectal cancer cells in vivo and in vitro，iASPP may be a candidate target for molecular immunotherapy in colorectal cancer.

IASPP;HT-29 cells;RNAi;Apoptosis

R735.3+4

A

1006-5709(2017)08-0861-04

2017-05-31

10.3969/j.issn.1006-5709.2017.08.006

洛陽市科技計(jì)劃基金資助項(xiàng)目(1603003A-13)

王長松，副主任醫(yī)師。E-mail:wangtmmu150@163.com

王志成，副主任技師，碩士，研究方向:腫瘤病理學(xué)。E-mail:15136263893@139.com