郝冬梅，鄒朋書，曹東華，張 寧，于月新

(中國人民解放軍第202醫(yī)院生殖醫(yī)學中心，遼寧 沈陽 110003)

部隊新生兒常見遺傳性耳聾基因篩查分析

郝冬梅，鄒朋書，曹東華，張 寧，于月新

(中國人民解放軍第202醫(yī)院生殖醫(yī)學中心，遼寧 沈陽 110003)

目的 了解部隊新生兒耳聾易感基因的攜帶率及突變類型，并分析部隊新生兒與普通人群新生兒之間耳聾基因突變率及突變類型的差異。方法 應用遺傳性耳聾基因芯片技術(shù)，對2014年11月至2016年11月北部戰(zhàn)區(qū)所屬部隊官兵所生新生兒937例進行GJB2(c.35delG、c.235delC、c.176del16、c.299 del AT)、SLC26A4(IVS7-2A>G和c.2168 A>G)、GJB3(c.538C>T)、線粒體12S rRNA (m.1494 C>T和m.1555 A>G)4個常見耳聾易感基因9個突變熱點檢測。結(jié)果 937例新生兒中，耳聾基因突變31例(3.31%)。其中GJB2 13例，突變攜帶率為1.39%(13/937)，包括c.176del16 2例(0.21%)，c.235delC 6例(0.64%)，c.299 del AT 5例(0.53%)，而c.35delG 0例；SLC26A4基因突變13例，突變攜帶率為1.39%(13/937)，均為IVS 7-2 A>G位點； GJB3基因突變2例(0.21%)，皆為單基因雜合突變，無純合突變；線粒體12S rRNA1555 A>G均質(zhì)突變3例(0.32%)，無異質(zhì)突變。結(jié)論 與普通人群相比，部隊新生兒耳聾基因突變類型相同，但攜帶率處于偏低水平，可能與樣本量少引起的偏差有關(guān)，也可能與軍人身體素質(zhì)優(yōu)于普通人群有關(guān)。耳聾基因篩查有利于藥物性和遲發(fā)性耳聾的早期發(fā)現(xiàn)，是耳聾出生缺陷三級預防的重點。

部隊新生兒；耳聾基因；基因芯片；突變類型

軍人是個特殊的群體，經(jīng)過嚴格的體格檢查入伍，身體、心里素質(zhì)優(yōu)于普通人群。對他們的子女國家給與了特殊的關(guān)心，2014年9月12日中國出生缺陷干預救助基金會與原總后勤部衛(wèi)生部簽署協(xié)議共同開展出生缺陷干預救助項目，其中包括為部隊新生兒提供常見遺傳性耳聾基因免費檢測，解放軍第二0二醫(yī)院全軍計劃生育優(yōu)生優(yōu)育技術(shù)研究所承擔了此項工作。2014年11月至2016年11月兩年間共篩查北部戰(zhàn)區(qū)所屬部隊官兵所生新生兒937例，本文總結(jié)了常見遺傳性耳聾基因的篩查結(jié)果并進行了分析。

1 對象和方法

1.1研究對象

選取2014年11月至2016年11月間北部戰(zhàn)區(qū)所屬部隊官兵所生新生兒937例，孕周37～40周，均于出生后48～72h采血及行聽力篩查，其中男488例，女449例。出生體重2.6～4.2kg，平均3.1kg。937例新生兒聽力篩查結(jié)果全部通過，其中55例初篩未通過，復篩后通過。 本研究均獲得新生兒監(jiān)護人知情同意，通過中國人民解放軍第202醫(yī)院倫理委員會審批。

1.2 研究方法

新生兒于出生后采足跟血于專用濾紙片上晾干，每個血斑直徑≥8mm，簽署知情同意書后，郵寄或送到本院精準醫(yī)學實驗室。應用博奧生物有限公司提供的晶芯遺傳性耳聾基因檢測試劑盒(微陣列芯片法)，具體步驟參照說明書。應用基因芯片技術(shù)檢測中國人常見的4個耳聾基因共9個突變位點：GJB2(c.35delG、c.235delC、c.176del16、c.299 del AT), SLC26A4(IVS7-2A>G， c.2168 A>G), GJB3(c.538C>T), 線粒體12S rRNA(m.1494 C>T， m.1555 A>G)。

2 結(jié)果

篩查新生兒937例，耳聾基因突變31例，檢出率3.31%。GJB2、SLC26A4、GJB3基因無純合突變，皆為單基因雜合突變，其中GJB2基因突變13例，SLC26A4基因突變13例，GJB3基因突變2例。線粒體12S rRNA均質(zhì)突變3例，無異質(zhì)突變。耳聾基因突變位點分布具體見表1。

表1 新生兒耳聾基因突變類型及位點分布[n(%)]

3討論

3.1新生兒耳聾基因篩查的意義

聽力障礙是常見的出生缺陷，位列殘疾病因之首。新生兒在出生后3個月內(nèi)沒有進行聽力篩查和及早干預，將對兒童的語言形成、社會交流以及成長造成嚴重影響。為此，1999年國家開始推廣新生兒聽力篩查，2004年成為新生兒疾病篩查的常規(guī)項目。多年的經(jīng)驗積累逐漸發(fā)現(xiàn)新生兒聽力篩查存在局限性，即并不是所有的聽力損失患兒均會在出生后立即表現(xiàn)出來[1]。近年來我國學者王秋菊提出實施新生兒聽力及基因聯(lián)合篩查策略，通過在新生兒期進行精準的聾病易感基因篩查，不僅可闡明先天性聾的病因，還可及早發(fā)現(xiàn)遲發(fā)性聾和藥物性聾，彌補了傳統(tǒng)聽力篩查的不足。近年來此項篩查模式逐漸得到了臨床醫(yī)生和家長的認可，并且在有關(guān)部門的大力支持下在北京、上海、成都、大連、長治等城市的新生兒中免費開展檢測[2-3]。2014年11月起部隊官兵的新生兒也獲得免費遺傳性耳聾基因檢測的福利。

3.2耳聾基因突變類型及分布

本研究篩查部隊新生兒937例，檢出攜帶常見耳聾基因突變31例，檢出率3.31%。筆者應用同樣方法篩查1 640例無耳聾家族史的聽力正常孕婦群體，耳聾基因攜帶者78例，檢出率4.76%。歸納應用同樣檢測方法發(fā)表的新生兒篩查文獻，馬鞍山5.56%，紹興5.47%，濟南4.53%，天津3.22%，成都3.19%，各地區(qū)耳聾基因突變攜帶率報道不同[4]。與以上數(shù)據(jù)比較，部隊新生兒耳聾基因攜帶率處于偏低水平，可能與樣本量少引起的偏差有關(guān)，更可能與軍人身體素質(zhì)優(yōu)于普通人群有關(guān)，聽力正常是入伍體檢的常規(guī)項目之一，本群體中未檢出GJB2和SLC26A4基因的純合突變。

本研究新生兒GJB2基因突變率為1.39%，占所有耳聾基因突變陽性的42%(13/31)，其中突變率最高為c.235delC(0.64%)和c.299 del AT (0.53%)，其次為c.176del16 (0.21%)，未檢測到c.35delG突變的患兒。SLC26A4基因突變率為1.39%，與GJB2相同，只檢測到IVS 7-2 A>G雜合突變型(1.39%)，未檢測到c.2168 A>G雜合突變型患兒。突變類型的分布與普通人群相同，只是GJB2 c.235delC的突變率比普通人群低。國內(nèi)外研究報道檢測611例新生兒， GJB2 c.235delC雜合突變14例(2.29%)，c.299 del AT雜合突變2例(0.32%)，c.176del16雜合突變1例(0.16%)，GJB2突變攜帶率2.95%(18/611)[5]。提示部隊新生兒群體中GJB2基因的c.235delC突變頻率比普通人群低，進而GJB2基因突變頻率低，這是引起耳聾基因突變總檢出率比普通人群低的原因，其它常見突變類型和突變基因檢出率與普通人群相似。GJB2 c.235delC和c.299 del AT， SLC26A4 IVS 7-2 A>G是部隊新生兒耳聾基因突變的主要類型。GJB2和SLC26A4為常染色體隱性遺傳方式，篩查為雜合攜帶者，則提示該新生兒攜帶GJB2或SLC26A4致聾基因，不發(fā)病，但成年后若與具有相同基因型的攜帶者婚配時則其后代耳聾發(fā)病率為25%，需進行產(chǎn)前篩查和診斷[6]。

GJB3基因突變既可導致常染色體顯性遺傳非綜合征型聾，也與常染色體隱性遺傳非綜合征型聾有關(guān)，基因型與表型的關(guān)系不明確，是夏家輝院士在我國本土克隆和鑒定的第一個耳聾致病基因[7]。GJB3主要與后天的高頻性聽力下降有關(guān)，本研究篩出的2例GJB3基因突變攜帶者可能為遲發(fā)性耳聾患者，雖然在新生兒期無耳聾癥狀，但需要密切關(guān)注聽力狀況，一旦出現(xiàn)聽力下降，及時干預。

線粒體12S rRNA基因是最常見的藥物致聾基因，攜帶該基因突變的人群對接觸氨基糖苷類抗生素藥物敏感性增強，低劑量使用就會出現(xiàn)耳鳴，聽力下降，甚至“一針致聾”。還有研究發(fā)現(xiàn)，線粒體12S rRNA m.1555 A>G突變患者即使不接觸氨基糖苷類藥物也會產(chǎn)生感音神經(jīng)性耳聾。線粒體疾病屬于母系遺傳，建議患兒的母系家族親屬也進行相關(guān)基因檢測，避免使用耳毒性藥物。本研究篩出3例線粒體12S rRNA基因攜帶者，藥物性耳聾的預防，不僅對篩查嬰兒本身，對整個母系家族都有重要意義[8]。

新生兒常見耳聾基因的篩查是人類基因組計劃和轉(zhuǎn)化醫(yī)學在臨床領(lǐng)域的重大應用成果，對人類防病致病的傳統(tǒng)模式是一場革命性的改革，倡導通過精準檢測致病基因，早發(fā)現(xiàn)，早干預，早治療，實現(xiàn)出生缺陷的三級預防。本研究通過新生兒篩查檢出2例可能的遲發(fā)性耳聾患兒(GJB3突變)，3例藥物性耳聾易感患兒(線粒體12S rRNA突變)，13例耳聾突變攜帶者(GJB2和SLC26A4突變)，給予遺傳咨詢，指導生育，指導用藥，最大化減少耳聾的發(fā)生，實現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育，提高人口素質(zhì)。

[1]孫曉勉,陸洋,黃旭麗.深圳市福田區(qū)新生兒聽力及耳聾基因聯(lián)合篩查分析[J].中國婦幼健康研究,2015,26(6):1119-1121,1135.

[2]Mahboubi H, Dwabe S, Fradkin M,etal.Genetics of hearing loss: where are we standing now?[J].Eur Arch Otorhinolaryngol,2012,269(7):1733-1745.

[3]Jackson C B, Bauer M F, Schaller A,etal.A novel mutation in BCS1L associated with deafness, tubulopathy, growth retardation and microcephaly[J].Eur J Pediatr,2016,175(4):517-525.

[4]余紅,劉丹,楊晶群,等.新生兒聽力和常見耳聾基因聯(lián)合篩查的臨床實踐[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2015,23(2): 77-78,120.

[5]封紀珍,李天潔,肖會者.5018例新生兒耳聾基因檢測結(jié)果分析[J].臨床兒科雜志,2015,33(2):196-197.

[6]Fang Y, Gu M, Wang C,etal. GJB2 as well as SLC26A4 gene mutations are prominent causes for congenital deafness[J].Cell Biochem Biophys,2015,73(1):41-44.

[7]李倩,王秋菊.新生兒聾病易感基因篩查的研究進展[J].聽力學及言語疾病雜志,2015,23(1):91-96.

[8]Ding Y, Xia B H, Liu Q,etal.Allele-specific PCR for detecting the deafness-associated mitochondrial 12S rRNA mutations[J].Gene,2016, 591(1):148-152.

[專業(yè)責任編輯:孫曉勉]

Screening analysis of genetic deafness gene in military neonates

HAO Dong-mei, ZOU Peng-shu, CAO Dong-hua, ZHANG Ning, YU Yue-xin

(CenterofReproductiveMedicine, 202ndHospitalofPLA,LiaoningShenyang110003,China)

Objective To study the carrier rate and mutation type of deafness susceptibility gene in military neonates and to analyze the difference in mutation rate and type of deafness gene between military and civilian neonates. Methods Nine mutational hotspots in 4 common deafness susceptibility genes including GJB2 (c.35delG, c.235delC, c.176del16, c.299 del AT), SLC26A4 (IVS7-2A>G and c.2168 A>G), GJB3 (c.538C>T), mitochondrial 12S rRNA (m.1494 C>T and m.1555 A>G) were detected in 937 neonates of officers and soldiers using gene chip technology. Results In 937 neonates, 31 cases had deafness gene mutations (3.31%) among which 13 cases had mutations of GJB2 with carrier rate of 1.39% (13/937), including c.176del16 in 2 cases (0.21%), c.235delC in 6 cases (0.64%), c.299 del AT in 5 cases (0.53%) and c.35delG in 0 case. There were 13 cases having mutation of SLC26A4 with carrier rate of 1.39% (13/937) and all were IVS 7-2 A>G. And 2 cases (0.21%) of heterozygous mutations of GJB3 were found. Homozygous mutations of mitochondrial 12S rRNA 1555 A>G were found in 3 cases (0.32%). Conclusion Comparing with civilian neonates, deafness gene mutation type is same but carrier rate is lower in military neonates, which may be attributed to small sample size or better physical quality of armyman. Genetic deafness gene screening is important for early discovery of drug induced deafness and delayed deafness, and it is the focus of tertiary prevention of birth defect deafness.

military neonates；deafness gene,; gene chip; mutation type

2017-02-06

全軍醫(yī)學科技青年培育資助項目(編號：14QNP004)

郝冬梅(1970—)，女，副主任醫(yī)師，博士，主要從事產(chǎn)前篩查與診斷。

于月新，主任醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.08.032

R715.8

A

1673-5293(2017)08-0985-03