劉志敏，劉素巧，周淑艷，申艷梅，谷惠芳

(河北省石家莊市第二醫(yī)院病理科，河北 石家莊 050017)

子宮腺肌病內(nèi)膜-肌層界面MMP-7的表達(dá)及其與痛經(jīng)、貧血的關(guān)系

劉志敏，劉素巧，周淑艷，申艷梅，谷惠芳

(河北省石家莊市第二醫(yī)院病理科，河北 石家莊 050017)

目的 探討基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-7在子宮腺肌病患者內(nèi)膜-肌層界面(EMI)的表達(dá)及其與患者痛經(jīng)、貧血的關(guān)系。方法 采用免疫組織化學(xué)方法對(duì)60例子宮腺肌病(實(shí)驗(yàn)組)和60例對(duì)照組患者的EMI及深肌層分別進(jìn)行MMP-7組織標(biāo)記，并對(duì)其與患者痛經(jīng)、貧血的關(guān)系進(jìn)行分析。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組EMI處MMP-7的表達(dá)顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為8.798、8.518，均P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組MMP-7的表達(dá)強(qiáng)度在增殖期和分泌期均高于深肌層，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為8.410、9.552，均P<0.05)。在子宮腺肌病患者EMI處MMP-7的高表達(dá)與患者痛經(jīng)及貧血均存在正相關(guān)關(guān)系(r值分別為0.319、0.271，均P<0.05)。結(jié)論 MMP-7在子宮內(nèi)膜-肌層界面參與了子宮腺肌病的發(fā)生和發(fā)展，并與痛經(jīng)的發(fā)生、貧血密切相關(guān)。

腺肌??；子宮內(nèi)膜-肌層界面；基質(zhì)金屬蛋白酶-7；痛經(jīng)；貧血

子宮腺肌癥是婦科常見(jiàn)病、多發(fā)病，一般認(rèn)為是由多種機(jī)制、多種因素共同作用的結(jié)果，臨床上多采取保守的對(duì)癥處理，但效果并不理想，其病理表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜及其間質(zhì)過(guò)度增生并向肌間浸潤(rùn)、增殖的一種良性疾病。有研究認(rèn)為子宮內(nèi)膜-肌層界面(endometrial-myometrial interface，EMI)的自我損傷與自我修復(fù)與子宮腺肌病的發(fā)生密切相關(guān)[1]。基質(zhì)金屬蛋白酶家族在腺肌病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，現(xiàn)對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metallaproteinases，MMP)-7在子宮內(nèi)膜-肌層界面的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，并分析其與痛經(jīng)、貧血的相關(guān)性，探討基質(zhì)金屬蛋白酶在腺肌病患者痛經(jīng)及貧血中的可能機(jī)制。

1資料與方法

1.1一般資料

收集河北省石家莊市第二醫(yī)院2011年5月至2015年10月因子宮腺肌病而進(jìn)行全子宮切除手術(shù)患者的子宮內(nèi)膜(包含部分肌層)60例作實(shí)驗(yàn)組，另選同期60例因子宮肌瘤、子宮脫垂等原因行全子宮切除患者的子宮內(nèi)膜(包含部分肌層)作對(duì)照組，兩組入選標(biāo)本均包括增殖期30例、分泌期30例。標(biāo)本來(lái)源均為育齡期婦女，且術(shù)后均經(jīng)病理證實(shí)。排除血液系統(tǒng)疾病、肝腎疾病、甲狀腺疾病、有宮內(nèi)節(jié)育器、子宮腺肌病合并肌瘤者，以及非腺肌病原因引起的痛經(jīng)合并貧血患者。實(shí)驗(yàn)組平均年齡為32.40±3.81歲、對(duì)照組為30.92±2.86歲。

1.2方法

1.2.1取材

全子宮切除手術(shù)標(biāo)本，分別于子宮EMI和深肌層進(jìn)行取材，要求子宮EMI包括基底層內(nèi)膜及其鄰近肌層，子宮腺肌病患者深肌層處標(biāo)本應(yīng)包含異位病灶。標(biāo)本于10%中性福爾馬林中固定、常規(guī)制片，觀察其組織學(xué)形態(tài)，篩查入組。

1.2.2免疫組織化學(xué)檢測(cè)及結(jié)果判斷

用萊卡切片機(jī)(2135)切片，采用免疫組化鏈霉素-親和素-生物素-酶復(fù)合物(strept avidin-biotin complex，SABC)法，實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。每組均以已知陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照，用磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)代替一抗作陰性對(duì)照。全面觀察，隨機(jī)抽取5個(gè)具有代表意義的高倍視野，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞百分率及顯色深淺分級(jí)。兔抗人MMP-7多克隆抗體購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。

1.2.3痛經(jīng)及出血量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

應(yīng)用語(yǔ)言評(píng)價(jià)量表，進(jìn)行患者的主訴疼痛分級(jí)；測(cè)定患者血紅蛋白含量了解患者是否貧血。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行配對(duì)資料的方差分析、χ2檢驗(yàn)及相關(guān)性分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 MMP-7在子宮內(nèi)膜-肌層界面和深肌層的表達(dá)

MMP-7一般多在腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中呈陽(yáng)性表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組EMI處MMP-7的表達(dá)在增生期和分泌期均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為8.798、8.518，均P<0.05)。MMP-7在實(shí)驗(yàn)組EMI處的表達(dá)：增殖期MMP-7的表達(dá)強(qiáng)度高于深肌層，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.410，P<0.05)；分泌期MMP-7的表達(dá)亦高于深肌層，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.552，P<0.05)，見(jiàn)表1、圖1。

表1 MMP-7在EMI和深肌層腺上皮的表達(dá)(n)

注：*與本組同一期深肌層比較P<0.05；#與對(duì)照組比較P<0.05。

EMI

深肌層

2.2 MMP-7的表達(dá)與痛經(jīng)的相關(guān)性

在子宮腺肌病患者EMI處MMP-7的表達(dá)與痛經(jīng)的發(fā)生存在相關(guān)性(r=0.319，P=0.013)；在深肌層MMP-7的表達(dá)與痛經(jīng)的發(fā)生關(guān)系不明顯(r=0.172，P=0.188)，見(jiàn)表2。

表2 實(shí)驗(yàn)組MMP-7的表達(dá)與痛經(jīng)的關(guān)系(n)

注：*與無(wú)痛經(jīng)比較，P<0.05。

2.3 MMP-7的表達(dá)與貧血的相關(guān)性

在子宮腺肌病患者EMI處MMP-7的表達(dá)與貧血的發(fā)生存在相關(guān)性：隨著MMP-7水平的增高，血紅蛋白含量下降，貧血程度增加，呈正相關(guān)關(guān)系，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=0.271，P=0.036)。深肌層異位灶中MMP-7的表達(dá)與患者貧血關(guān)系不明顯(r=0.149，P=0.255),見(jiàn)表3。

表3 實(shí)驗(yàn)組MMP-7的表達(dá)與貧血的關(guān)系(n)

注：*與無(wú)貧血比較，P<0.05。

3討論

基質(zhì)金屬蛋白酶是一類(lèi)蛋白水解酶，MMP-7是蛋白酶家族中相對(duì)分子量最小的一種特異性酶，主要降解Ⅳ型、Ⅶ型膠原，糖蛋白，纖維素和鈣黏素等，是降解構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的主要結(jié)構(gòu)蛋白的主要酶系，在細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。

3.1 MMP-7在子宮內(nèi)膜-肌層界面的表達(dá)

子宮EMI由基底層內(nèi)膜和淺肌層組成，沒(méi)有黏膜下層的屏障作用，腺體及其間質(zhì)與平滑肌直接相連，有研究認(rèn)為基底層內(nèi)陷的內(nèi)膜腺體具有更高的侵襲性[2]。本研究發(fā)現(xiàn)MMP-7在實(shí)驗(yàn)組EMI處的表達(dá)，增殖期和分泌期MMP-7的表達(dá)強(qiáng)度均高于深肌層，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示MMP-7在組織中表達(dá)明顯升高，降解大部分細(xì)胞外間質(zhì)，改建宮腔內(nèi)環(huán)境，內(nèi)膜腺體的侵襲性增強(qiáng)。MMP-7是Wnt信號(hào)通路核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子(transcription factors，TCF)的下游靶基因，它的激活對(duì)腫瘤細(xì)胞的失控性增殖具有促進(jìn)作用。同時(shí)MMP-7還可能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡耐受，使其逃避免疫監(jiān)視而抑制其凋亡，使腫瘤細(xì)胞長(zhǎng)期存活，加速腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移[3]。實(shí)驗(yàn)組EMI處MMP-7高表達(dá)，提示MMP-7可能發(fā)揮了在惡性腫瘤中相同或者相似的作用機(jī)制，促使內(nèi)膜異位種植、增殖的同時(shí)凋亡減弱，導(dǎo)致腺肌病表現(xiàn)出與腫瘤相似的生物學(xué)行為。在實(shí)驗(yàn)組EMI處MMP-7的表達(dá)在增生期和分泌期均明顯高于對(duì)照組，推測(cè)可能是MMP-7降解基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的作用增強(qiáng)，為本就具有增殖活性的基底層內(nèi)膜腺體進(jìn)一步侵犯淺肌層形成異位灶提供了便利條件。

3.2 MMP-7在子宮內(nèi)膜—肌層界面的表達(dá)與痛經(jīng)的關(guān)系

實(shí)驗(yàn)組EMI處MMP-7的表達(dá)與痛經(jīng)的發(fā)生存在相關(guān)性，推測(cè)MMP-7活性增強(qiáng)，降解大量細(xì)胞外基質(zhì)、誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)；啟動(dòng)其下游的基質(zhì)金屬蛋白酶家族其他成員，形成鏈索反應(yīng)；無(wú)菌性的炎性過(guò)程中產(chǎn)生的各種細(xì)胞因子、激素、生長(zhǎng)因子等引發(fā)患者的疼痛。

腺肌病是一個(gè)雌激素依賴(lài)性疾病，也有研究發(fā)現(xiàn)雌激素能夠促進(jìn)環(huán)氧化酶-2的分泌[4]，環(huán)氧化酶-2能促進(jìn)既是重要的炎癥介質(zhì)又是重要的致痛因子的前列腺素E2的增加，引起疼痛；尤其是當(dāng)多次宮腔損傷與修復(fù)的情況下，持續(xù)存在炎性反應(yīng)，局部致痛因子濃度增加，加劇了痛經(jīng)。MMP-7可以降解幾乎所有的細(xì)胞外間質(zhì)，基底層內(nèi)膜腺體侵襲性和增殖活性增強(qiáng)，促使腺肌病患者子宮淺肌層平滑肌間形成大小不一、形狀各異、不規(guī)律分布的異位灶，淺肌層質(zhì)地不均，致使月經(jīng)期平滑肌的不平衡收縮，血液循環(huán)不暢，局部酸性代謝產(chǎn)物堆積，刺激神經(jīng)末梢，也會(huì)促使患者疼痛程度升級(jí)。

3.3 MMP-7在子宮內(nèi)膜-肌層界面的表達(dá)與貧血的關(guān)系

子宮EMI作為腺肌病發(fā)生的起始部位，構(gòu)成了宮腔主要內(nèi)環(huán)境。有研究通過(guò)超聲發(fā)現(xiàn)子宮的蠕動(dòng)活性起源于子宮內(nèi)膜-肌層結(jié)合帶，而深肌層處于安靜狀態(tài)[5]。在月經(jīng)期，主要表現(xiàn)為宮底向?qū)m頸方向的蠕動(dòng)波，此時(shí)蠕動(dòng)波的幅度達(dá)到最大，以利于經(jīng)血的排出[6]。本研究中發(fā)現(xiàn)MMP-7的高表達(dá)，大量?jī)?nèi)膜間質(zhì)結(jié)構(gòu)被降解，加劇了子宮宮腔內(nèi)環(huán)境的不穩(wěn)定性，基底層內(nèi)膜腺體增殖活性增強(qiáng)，侵入淺肌層，形成異位灶。淺肌層中夾雜大量的子宮內(nèi)膜及其間質(zhì)，組織結(jié)構(gòu)的不均質(zhì)促使蠕動(dòng)波頻率、強(qiáng)弱不等，平滑肌收縮不協(xié)調(diào)，影響子宮螺旋動(dòng)脈的收縮，減緩了內(nèi)膜的壞死脫落，血管開(kāi)放時(shí)間長(zhǎng)，加大出血量，延長(zhǎng)月經(jīng)期。MMP-7的高表達(dá)與貧血發(fā)生關(guān)系密切，有研究認(rèn)為MMP-7在體外以劑量依賴(lài)的方式加速在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖[6]；還參與了血管內(nèi)皮細(xì)胞的選擇性擴(kuò)展活動(dòng)[7]，促進(jìn)新生血管形成，增加月經(jīng)期開(kāi)放血管數(shù)量及表面積，月經(jīng)量增加，加劇貧血，具有正相關(guān)關(guān)系。

3.4小結(jié)

總之，正常情況下人體內(nèi)存在金屬蛋白酶抑制劑(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases,TIMPs)維持平衡狀態(tài)，使EMI破壞和修復(fù)保持動(dòng)態(tài)平衡。當(dāng)平衡被打破，基質(zhì)金屬蛋白酶高表達(dá)，活性明顯增強(qiáng)，基底層和細(xì)胞間基質(zhì)被降解，加之損傷后的子宮內(nèi)膜細(xì)胞能夠以阿米巴樣運(yùn)動(dòng)的形式蠕動(dòng)和擴(kuò)散，并發(fā)生轉(zhuǎn)移，使子宮內(nèi)膜獲得浸潤(rùn)生長(zhǎng)的能力[8]。MMP-7在實(shí)驗(yàn)組呈高表達(dá)，并與患者的痛經(jīng)、貧血有正相關(guān)關(guān)系，有力地證實(shí)并豐富了“在位內(nèi)膜決定論”，也提示宮腔內(nèi)微環(huán)境，尤其是子宮EMI對(duì)于腺肌病的發(fā)生機(jī)制有重要意義。

MMP-7在腺肌病的發(fā)生發(fā)展及與臨床患者痛經(jīng)、貧血等關(guān)系緊密，從目前的研究中可知MMPs是一個(gè)復(fù)雜的大家族，各成員之間相互協(xié)調(diào)與制約，因此針對(duì)MMP-7與其他MMPs成員的差異，進(jìn)一步探索MMP-7的作用及其表達(dá)的調(diào)控機(jī)制，對(duì)于研制高選擇性的TIMPs，減輕患者痛苦具有重要意義。

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[專(zhuān)業(yè)責(zé)任編輯：張冠軍]

Expression of MMP-7 in endometrial-myometrial interface of adenomyosis and its correlation with dysmenorrhea and anemia

LIU Zhi-min, LIU Su-qiao, ZHOU Shu-yan, SHEN Yan-mei, GU Hui-fang

(DepartmentofPathology,TheSecondHospitalofShijiazhuang,HebeiShijiazhuang050017,China)

Objective To investigate the expression of matrix metalloproteinase (MMP)-7 in endometrial-myometrial interface (EMI) of adenomyosis and its correlation with dysmenorrhea and anemia. Methods Immunohistochemistry SP method was adopted to determine the expression of MMP-7 in EMI and deep myometrium of 60 cases of adenomyosis (adenomyosis group) and 60 cases of control subjects, and the relationship between it and the pathogenesis of dysmenorrhea and anemia was analyzed. Results The expression level of MMP-7 in EMI was significantly higher in adenomyosis group than in control group (χ2value was 8.798 and 8.518, respectively, bothP<0.05). In adenomyosis group the intensity of MMP-7 was also higher in EMI than in deep myometrium both in proliferative phase and secretory phase (P<0.05), and the differences were statistically significant (χ2value was 8.410 and 9.552, respectively, bothP<0.05). Dysmenorrhea and anemia were positively correlated with the high expression of MMP-7 in EMI of cases of adenomyosis (rvalue was 0.319 and 0.271, respectively, bothP<0.05). Conclusion MMP-7 in EMI might participate the pathogenesis of adenomyosis, and it is closely correlated with dysmenorrhea and anemia.

adenomyosis; endometrial-myometrial interface (EMI); matrix metalloproteinase (MMP)-7; dysmenorrhea; anemia

2017-01-01

河北省科技廳科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：122777106)

劉志敏(1979—)，女，副主任醫(yī)師，碩士研究生，主要從事腺肌病的基礎(chǔ)與臨床研究。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.08.013

R711.7

A

1673-5293(2017)08-0929-03