王興輝蒙炳超龔才偉猶銀俊吳朝福

（1，貴州省都勻市動物疫病預(yù)防控制中心558000；

2，貴州省黔南州動物疫病預(yù)防控制中心558000；

3，貴州省都勻市勻東鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心558000）

黔南州某種豬場豬瘟免疫凈化探索

王興輝1蒙炳超2龔才偉2猶銀俊2吳朝福3

（1，貴州省都勻市動物疫病預(yù)防控制中心558000；

2，貴州省黔南州動物疫病預(yù)防控制中心558000；

3，貴州省都勻市勻東鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心558000）

動物疫病凈化工作主要以長期監(jiān)測與豬瘟免疫程序相結(jié)合的方式，即通過分群→檢測→淘汰→免疫→檢測→淘汰的形式進行循環(huán)式多階段分層次凈化，病種由點及面，累積經(jīng)驗，分步實施。通過開展豬瘟這一單病種的免疫凈化探索，積累經(jīng)驗，為開展其他病種的凈化工作奠定基礎(chǔ)。

豬瘟；抗體；疫病凈化

豬瘟是由豬瘟病毒引起的一種高度接觸性傳染病，其特征為高熱稽留、先便秘后腹瀉、發(fā)病快、死亡率高，是威脅養(yǎng)豬業(yè)的主要傳染病之一。近年來，國內(nèi)豬瘟的流行特點和發(fā)病特征發(fā)生了明顯的變化，病程由急性變?yōu)槁?。臨床癥狀由典型變?yōu)榉堑湫偷臏睾托拓i瘟，特別是低毒力豬瘟病毒的存在，常導(dǎo)致豬瘟病毒持續(xù)感染，母豬表現(xiàn)不孕、流產(chǎn)、早產(chǎn)、產(chǎn)死胎或木乃伊胎，初生弱仔豬表現(xiàn)為精神沉郁、間歇性腹瀉、死亡或免疫耐受，易形成持續(xù)性感染帶毒豬，造成豬瘟長期流行[1,2]。為在源頭控制豬瘟病毒影響，2014年開始，我們在黔南州某種豬場開展豬瘟免疫凈化試驗。

1 免疫凈化方案

1.1 免疫程序

種公豬、經(jīng)產(chǎn)母豬一年免疫4次，后備豬配種前2次，商品豬35日齡進行首免、65日齡二免。

1.2 淘汰及補免

對豬瘟病原檢測陽性的種豬淘汰并進行無害化處理。對豬瘟免疫抗體不合格的種豬進行補免，對多次免疫豬瘟抗體仍不合格的豬予以淘汰。

1.3 對新引進豬的監(jiān)測和處理

對新引種豬檢測豬瘟抗體和豬瘟病原，淘汰病原檢測陽性豬；豬瘟抗體不合格的豬進行加強免疫，加強免疫后抗體仍不合格的豬予以淘汰。

1.4 采樣檢測

1.4.1 本地調(diào)查階段

對免疫豬瘟疫苗3周后的種公豬后備母豬100%采集、10%經(jīng)產(chǎn)母豬和后備母豬采集血清進行免疫抗體檢測。對種100%公豬、10%種母豬和后備母豬采集豬扁桃體進行病原學檢測。調(diào)查豬場豬群豬瘟基礎(chǔ)情況。

1.4.2 免疫控制階段

對免疫豬瘟疫苗3周后的100%種公豬、5%后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬采集血清進行免疫抗體檢測。對100%種公豬、2%種母豬和后備母豬采集豬扁桃體進行病原學檢測，一年兩次。

1.4.3 凈化評估階段

對免疫豬瘟疫苗3周后的100%種公豬、5%后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬采集血清進行免疫抗體檢測。對100%種公豬、2%種母豬和后備母豬采集豬扁桃體進行病原學檢測，一年兩次。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 疫苗

武漢中博生物股份有限公司豬瘟疫苗 （細胞源）。

2.1.2 試劑名稱

豬瘟ELISA抗體檢測試劑盒購自武漢科前生物科技有限公司，豬瘟病毒實時熒光RT-PCR試劑盒購自北京世紀元亨生物有限公司。

2.1.3 儀器設(shè)備

酶標儀 （Biotek 200XL）、熒光PCR 儀 （ABI 7500）。

2.2 方法

2.2.1 豬瘟抗體檢測

用武漢科前生物有限公司豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測試劑盒說明書方法對分離的豬血清樣品進行ELISA抗體檢測。

2.2.2 豬瘟病原檢測

RNA提取：按照世紀元亨公司豬瘟病毒實時熒光RT-PCR試劑盒A盒說明書方法對采集的豬扁桃體豬頭提取總RNA，總RNA立即使用或-20℃臨時保存。

熒光RT-PCR：按世紀元亨公司豬瘟病毒實時熒光RT-PCR試劑盒B盒說明書配置25μl反應(yīng)體系后在熒光PCR儀器上擴增。

熒光RT-PCR結(jié)果判定：根據(jù)試劑盒判定標準進行判定。

3 檢測結(jié)果

3.1 豬瘟免疫抗體檢測

對3個階段豬群采集血清進行免疫抗體檢測，具體檢測數(shù)據(jù)見表1。

3.2 豬瘟病毒病原學檢測

采集3個階段豬扁桃體，用實時熒光RT-PCR檢測豬瘟病原學，結(jié)果都是陰性，具體檢測數(shù)據(jù)見表2。

4 分析與討論

動物疫病凈化工作主要以長期監(jiān)測與豬瘟免疫程序相結(jié)合的方式，即通過分群→檢測→淘汰→免疫→檢測→淘汰的形式進行循環(huán)式多階段分層次凈化，病種由點及面，累積經(jīng)驗，分步實施[3,5]。在開展該項工作前，對該場近幾年的監(jiān)測和調(diào)查分析，沒有發(fā)現(xiàn)豬瘟臨床病例或檢測陽性，為開展該項工作奠定了比較好的基礎(chǔ)。在凈化工作中，除豬瘟病原檢測出現(xiàn)陽性必須淘汰并無害化處理外，免疫抗體分本底調(diào)查階段、免疫控制階段和評估階段3個階段制定相應(yīng)標準進行評估，達到標準后，才能進入下以階，并且抗體必須檢測合格才能作為種豬。

表1 豬瘟抗體檢測統(tǒng)計表

表2 豬瘟病原學檢測統(tǒng)計表

在免疫控制階段，少部分經(jīng)產(chǎn)母豬經(jīng)過第二次重新補免后，抗體才合格；有些后備種豬按照免疫程序開展免疫，經(jīng)過兩次免疫后，豬瘟抗體檢測仍然不合格，最終作淘汰處理。免疫失敗除可能與免疫接種技術(shù)有關(guān)外，可能豬圓環(huán)、高致病性藍耳病和豬偽狂犬病病毒等豬的免疫抑制性疾病，降低了豬對疫苗的免疫應(yīng)答能力，這個階段的工作在免疫、檢測、淘汰中重復(fù)，也是整個凈化工作的難點。經(jīng)過免疫控制階段免疫技術(shù)的積累，后備豬群的群體免疫合格率提高了5.6%，達到97.3%，但仍有部分后備種豬因為其他免疫抑制性疾病影響，導(dǎo)致經(jīng)過兩次免疫，抗體檢測仍然不合格。這也反映了豬病種類多，可能會相互影響，致使疫病凈化是一個系統(tǒng)而又漫長的過程[4,5]。我們通過開展豬瘟這一單病種的免疫凈化探索，積累經(jīng)驗，為開展其它病種的凈化工作奠定基礎(chǔ)。

[1]李達,馬萍,湯德元,等.規(guī)?；i場豬瘟和偽狂大病的凈化方案 [J].畜牧與獸醫(yī),2015(7)：119-123.

[2] 王海洋,柴方紅,李春花,等.吉林市不同規(guī)模豬場種豬豬瘟抗體檢測與豬瘟凈化措施初探[J].吉林畜牧獸醫(yī),2015(1)：20-21.

[3] 楊林,張淼潔,付雯,等.種豬場主要疫病凈化程序[J].中國畜牧業(yè),2016(1)：52-60.

[4]李嬌,祖立闖,王金良,等.我國 4 省豬瘟、豬藍耳病、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的血清流行病學調(diào)查[J].養(yǎng)豬,2014(4)：123-124.

[5] 王昌建,范仲鑫,唐小明,等.規(guī)模豬場垂直傳播疫病的凈化實踐與思考[J].中國畜牧業(yè),2016(4)：40-42.

項目來源：黔南州科技計劃項目基金黔南科技合農(nóng)字 （2015）10號。

王興輝 （1979.5-），男，本科，獸醫(yī)師，從事動物疫病診斷和檢測工作。