張京霞 鄭紅琴

(登封市婦幼保健院檢驗(yàn)科，河南 登封 452470)

不同抗凝劑濃度及最佳抗凝劑不同放置時(shí)間對(duì)血細(xì)胞參數(shù)的影響

張京霞 鄭紅琴

(登封市婦幼保健院檢驗(yàn)科，河南 登封 452470)

目的：探討不同抗凝劑濃度及最佳抗凝劑不同放置時(shí)間對(duì)血細(xì)胞參數(shù)的影響。方法：選擇2015年12月于我院行健康體檢的35例健康成年人的靜脈血為研究標(biāo)本，分別制成抗凝濃度為2.4 mg·mL-1、3.6 mg·mL-1、4.8 mg·mL-1的A、B、C三組血液檢測(cè)標(biāo)本。采用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行檢測(cè)，其中B組放置時(shí)間延長(zhǎng)至15 min再次檢測(cè)。比較三組血細(xì)胞參數(shù)變化情況，分析不同放置時(shí)間血細(xì)胞參數(shù)。結(jié)果：A組、B組、C組以及B組不同放置時(shí)間血細(xì)胞參數(shù)之間均無(wú)明顯差異(P>0.05)。結(jié)論：EDTA-K2濃度在接近標(biāo)準(zhǔn)濃度時(shí)，或放置時(shí)間在15 min以?xún)?nèi)，抗凝劑的使用濃度與放置時(shí)間對(duì)血細(xì)胞參數(shù)均無(wú)明顯影響。

抗凝劑；放置時(shí)間；血細(xì)胞參數(shù)

血液分析是臨床醫(yī)學(xué)常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目之一，在評(píng)估機(jī)體健康狀態(tài)、診斷疾病方面具有重要意義[1]。由于客觀因素的影響，不少患者標(biāo)本無(wú)法得到及時(shí)檢查，故臨床普遍應(yīng)用抗凝劑以確保檢驗(yàn)結(jié)果[2]。乙二胺四乙酸鹽(Ethylene diamine tetraacetie acid，EDTA-K2)是臨床公認(rèn)為抗凝效果佳、對(duì)血細(xì)胞參數(shù)影響較小的一種抗凝劑。但抗凝劑濃度及放置時(shí)間等因素可能對(duì)血細(xì)胞檢驗(yàn)結(jié)果造成不同的影響[3]。因此，本研究采用全血細(xì)胞分析儀對(duì)EDTA-K2抗凝標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)，探討抗凝劑濃度及放置時(shí)間對(duì)血細(xì)胞參數(shù)的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 臨床資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年12月于我院行健康體檢者35例，男19例，女16例；年齡20-58歲，平均年齡41.52±3.83歲。所有受檢者均知曉本研究，并自愿接受研究?jī)?nèi)容，均于入組后簽署知情同意書(shū)。排除患有影響血液循環(huán)及相關(guān)性疾病者。

1.2 方法

1.2.1 儀器

選用產(chǎn)自日本的希森美康XT-1800血細(xì)胞分析儀以及希森美康配套試劑、定標(biāo)液、質(zhì)控物等。

1.2.2 制備抗凝劑

分別稱(chēng)量240 mg、360 mg、480 mg EDTA-K2，將不同劑量EDTA-K2各自加至5 mL蒸餾水內(nèi)，從而制成濃度為48 mg·mL-1、72 mg·mL-1、96 mg·mL-1的EDTA-K2溶液。所有患者均抽取6 mL靜脈血，分別置入A組、B組、C組試管，各2 mL。三組試管均含有100 μL的EDTA-K2溶液，其中A組試管內(nèi)EDTA-K2濃度為48 mg·mL-1、B組為72 mg·mL-1、C組為96 mg·mL-1，最終A組試管內(nèi)EDTA-K2抗凝濃度為2.4 mg·mL-1、B組為3.6 mg·mL-1、C組為4.8 mg·mL-1。3組標(biāo)本均放置5 min時(shí)采用全血細(xì)胞分析儀進(jìn)行檢測(cè)，另選B組標(biāo)本于放置15 min時(shí)再次檢測(cè)，詳細(xì)記錄測(cè)定結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)

采用電阻抗法檢測(cè)白細(xì)胞(White blood cell，WBC)、紅細(xì)胞(Red blood cell，RBC)、血紅蛋白(Hemoglobin，HGB)、血小板(Platelet，PLT)、淋巴細(xì)胞(Lymphocyte，LYM)等血細(xì)胞參數(shù)，具體方法如下：采用等滲電解質(zhì)溶液對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行稀釋?zhuān)蠹尤氩粚?dǎo)電容器內(nèi)，插入小孔管，小孔管內(nèi)外各有一個(gè)電極，接通電源產(chǎn)生穩(wěn)定電流，細(xì)胞懸液經(jīng)小孔管外側(cè)流向小孔管內(nèi)部，增高小孔感應(yīng)區(qū)電阻，改變瞬間電壓，產(chǎn)生脈沖信號(hào)。脈沖振幅與細(xì)胞體積正相關(guān)，脈沖數(shù)量則反映細(xì)胞數(shù)量，進(jìn)而獲得血細(xì)胞參數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 三組血細(xì)胞參數(shù)比較

三組間血細(xì)胞參數(shù)相比，無(wú)顯著差異(P>0.05)，見(jiàn)表1。

2.2B組不同時(shí)間血細(xì)胞參數(shù)比較

最佳濃度抗凝劑不同時(shí)間放置時(shí)間血細(xì)胞參數(shù)相比，無(wú)明顯差異(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表1 三組血細(xì)胞參數(shù)比較

表2 B組不同時(shí)間血細(xì)胞參數(shù)比較±s)

3 討論

血液分析作為臨床常規(guī)的一項(xiàng)檢測(cè)環(huán)節(jié)，其檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性與患者及時(shí)診斷與治療緊密相關(guān)。樣本分析的質(zhì)量把控是減少檢測(cè)誤差的重要保證，故如何控制好樣本分析前階段質(zhì)量已成為臨床關(guān)注的重點(diǎn)[4]。EDTA-K2與血液中鈣離子親和力較強(qiáng)，結(jié)合鈣離子后，可經(jīng)膜離子通道到達(dá)血小板膜內(nèi)，阻止凝血酶原轉(zhuǎn)化為凝血酶，最終達(dá)到血液抗凝的目的[5-6]。本研究即通過(guò)觀察EDTA-K2不同濃度及不同放置時(shí)間對(duì)血細(xì)胞參數(shù)的影響，探討檢驗(yàn)血液指標(biāo)最佳的抗凝劑濃度及放置時(shí)間。

目前，全血分析儀已廣泛應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)血液參數(shù)，使血液分析的準(zhǔn)確性得到顯著提升。但由于采血過(guò)程受護(hù)士主觀因素影響，采血量往往控制欠佳，過(guò)多的采血量容易導(dǎo)致EDTA-K2比例失調(diào)，從而造成血液標(biāo)本輕微凝血，嚴(yán)重者可堵塞分析儀管道或影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。而采血量過(guò)少亦可因血液標(biāo)本稀釋而降低檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性[7-8]。本研究中，A組、B組、C組試管分別采用不同濃度抗凝劑，三組間WBC、RBC、HGB、PLT等血細(xì)胞參數(shù)均無(wú)顯著差異，表明在濃度為1-3 mg·mL-1范圍內(nèi)，EDTA-K2濃度的變化對(duì)血細(xì)胞參數(shù)并無(wú)明顯影響。本研究采用電阻抗法檢測(cè)血細(xì)胞參數(shù)，其中PLT與RBC檢測(cè)時(shí)，二次稀釋檢測(cè)樣本后進(jìn)入檢測(cè)單元，形成脈沖信號(hào)，而通過(guò)小孔的細(xì)胞數(shù)與脈沖數(shù)相近，細(xì)胞體積與脈沖幅度正相關(guān)，故EDTA-K2濃度未低至造成細(xì)胞破裂時(shí)，PLT與RBC計(jì)數(shù)未受影響[9]。因此該法檢測(cè)結(jié)果具備良好的準(zhǔn)確性，可避免因檢測(cè)方法的不同對(duì)血細(xì)胞水平造成影響。同時(shí)，由于血樣本量與抗凝劑相比為40:1，可忽略抗凝劑對(duì)血液的稀釋作用。另有研究顯示，EDTA加入血液后，可改變WBC形態(tài)，隨著濃度的增加與放置時(shí)間的延長(zhǎng)，可造成部分中性粒細(xì)胞腫脹、崩解，形成碎片。而本研究中不同濃度組間WBC計(jì)數(shù)無(wú)明顯差異，可能與研究中所采用的EDTA-K2濃度與標(biāo)準(zhǔn)濃度較為接近，且檢測(cè)時(shí)間較短，WBC的變化尚未顯現(xiàn)。另外，本研究尚對(duì)B組進(jìn)行15 min的檢測(cè)，仍未發(fā)現(xiàn)血細(xì)胞參數(shù)存在明顯差異。表明在該時(shí)間內(nèi)，適合檢測(cè)血細(xì)胞相關(guān)參數(shù)[10]。因此，抗凝劑濃度為2.4 mg·mL-1～4.8mg·mL-1，放置5-15 min時(shí)均可準(zhǔn)確檢測(cè)血液參數(shù)，從而獲得相對(duì)理想的檢測(cè)結(jié)果。由于本研究檢測(cè)條件受限，關(guān)于EDTA-K2濃度及放置時(shí)間對(duì)血細(xì)胞參數(shù)的影響仍需深入探討，后期研究中可適當(dāng)增加抗凝劑濃度范圍，延長(zhǎng)放置時(shí)間，以進(jìn)一步完善研究結(jié)果。

綜上所述，EDTA-K2濃度在接近標(biāo)準(zhǔn)濃度時(shí)，其濃度的變化對(duì)血細(xì)胞參數(shù)無(wú)明顯影響，同時(shí)標(biāo)準(zhǔn)濃度下，放置15 min檢測(cè)對(duì)血細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果的影響較小。

1 伍亞云,李霞,郭建華,等. 乙二胺四乙酸二鉀濃度對(duì)紅細(xì)胞形態(tài)影響因素的探討[J]. 國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2014, 35(13): 1806-1806,1817.

2 黃亮,梁瑜金. 抗凝劑對(duì)血小板計(jì)數(shù)結(jié)果的影響分析[J]. 國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2015, 36(8): 1104-1105.

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4 王明慧,楊濤. 靜脈血標(biāo)本放置時(shí)間對(duì)血細(xì)胞分析結(jié)果的影響[J]. 中國(guó)基層醫(yī)藥, 2014, 21(16): 2524-2526.

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Different anticoagulant concentration and anticoagulant effects of different placement time of blood cell parameters

Zhang Jing-xia, Zheng Hong-qin

(Laboratory of Dengfeng Maternal and Child Care Service Centre, Henan Dengfeng 452470)

Objective：To study the different anticoagulant concentration and anticoagulant effects of different placement time of blood cell parameters. Methods: The venous blood in 35 healthy adults in our hospital for health examination of December 2015 as study samples, were made from the anticoagulant concentration of 2.4 mg mL-1, 3.6mg mL-1, 4.8mg mL-1A, B, C three groups of blood samples. Automatic blood cell analyzer was used to detect the B group, and the time was extended to 15 min. The changes of blood cell parameters were compared between the three groups. Results: A group, B group, C group and B group had no significant difference in blood cell parameters (P<0.05). Conclusion: EDTA-K2 concentration towards the standard concentration, or placed in less than 15 min, use of anticoagulant concentration and keeping time on blood cell parameters were not significantly affected.

Anticoagulants; Time; Blood cell parameters

張京霞，女，主管技師，主要從事臨床檢驗(yàn)工作，Email：dfzhangjingxia@126.com。

2017-3-7)