鄧婷　袁煒華

【摘要】 目的 探討乙型肝炎（乙肝）標(biāo)志物定量檢測指標(biāo)與乙肝病毒脫氧核糖核酸（HBV-DNA）定量、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）的關(guān)系， 為臨床治療乙肝提供參考。方法 185例門診、住院及體檢者， 抽取靜脈血， 血液標(biāo)本采用PCR-熒光探針法進(jìn)行HBV-DNA含量測定， 同時采用時間分辨熒光免疫測定法（TRFIA）及酶法進(jìn)行兩對半指標(biāo)及ALT檢測， 對比分析檢測結(jié)果。結(jié)果 185例乙肝患者的血液標(biāo)本中， 大三陽45例；小三陽111例；1， 5陽性模式22例；1， 2， 3， 5陽性模式2例；1， 2， 4， 5模式5例；HBV-DNA檢測陽性率為73.5%（136/185）。結(jié)論 在乙型肝炎表面抗原（HBsAg）均為陽性的情況下， 乙型肝炎e抗原（HBeAg）陽性率與HBV-DNA定量及ALT有關(guān)， 為臨床制定合理的乙肝治療方素提供了依據(jù)， 有利于抑制乙肝病毒的傳染。

【關(guān)鍵詞】 乙型肝炎標(biāo)志物；脫氧核糖核酸定量；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.19.004

Correlation between hepatitis B markers quantification detection index， hepatitis B virus DNA quantification and ALT DENG Ting， YUAN Wei-hua. Guangdong Yunfu City Peoples Hospital， Yunfu 527300， China

【Abstract】 Objective To investigate correlation between hepatitis B markers quantification detection index， hepatitis B virus desoxyribonucleic acid （HBV-DNA）quantification and alanine aminotransferase （ALT）， in order to provide reference for clinical hepatitis B treatment. Methods Venous blood of 185 outpatients， hospitalized patients and people in psychological examination were taken into HBV-DNA content determination by PCR-fluorescent probe method. Time resolved fluorescence immunoassay （TRFIA） and enzymic method were applied to detect hepatitis B five tests and ALT. Detection outcomes were compared and analyzed. Results In 185 blood samples of hepatitis B patients， there were 45 cases with big three positive， 111 case with small three positive， 22 cases with 1， 5 positive， 2 cases with 1， 2， 3， 5 positive， and 5 cases with 1， 2， 4， 5 positive. Positive rate of HBV-DNA detection was 73.5% （136/185）. Conclusion In the condition of positive hepatitis B surface antigen （HBsAg）， positive rate of hepatitis B e antigen （HBeAg） is positively correlated with HBV-DNA quantification and ALT. This method shows reference for clinical establishment of rational hepatitis B treatment， and it is helpful for hepatitis B inhibition.

【Key words】 Hepatitis B markers； Desoxyribonucleic acid quantification； Alanine aminotransferase

乙肝是目前我國主要傳染病之一， 可引起慢性、急性遷移性肝炎或肝癌。我國是乙肝高發(fā)區(qū)， 相關(guān)調(diào)查結(jié)果顯示， 我國乙肝病毒感染人群高達(dá)10%左右[1]。乙肝兩對半檢測是臨床診斷乙肝最常用的指標(biāo)， 可對人體乙肝病毒的免疫反應(yīng)狀態(tài)進(jìn)行反映。HBV-DNA是衡量乙肝傳染性最精確的手段， 是確定乙肝病毒感染不同復(fù)制狀態(tài)的重要方法， HBV-DNA陽性顯示病毒具有傳染性[2]。ALT是反映肝損害的指標(biāo)。為探究乙肝兩對半模式與HBV-DNA定量、ALT的關(guān)系， 為制定合理治療方案提供科學(xué)依據(jù)， 本院對2016年4～12月185例HBV-DNA含量及乙肝兩對半定量、ALT指標(biāo)進(jìn)行檢測， 現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 對2016年4～12月在云浮市人民醫(yī)院門診、住院及體檢者185例進(jìn)行乙肝兩對半定量、ALT檢測及HBV-DNA定量檢測， 其中男140例， 女45例， 年齡11～98歲。

1. 2 標(biāo)本采集及保存 采用真空干燥管3支， 各抽取受檢者靜脈血2 ml， 室溫放置≤4 h， 待樣本自行析出血清， 或直接室溫1600 rpm離心5 min分離出血清， 其中2支用于定量檢測乙肝兩對半及ALT檢測， 另一支分離血清后轉(zhuǎn)移到1.5 ml

滅菌離心管中備用。經(jīng)上述處理后的待測血清可立即用于檢測， 或（-20±5）℃保存（3個月）， 長期保存置于-70℃以下， 避免反復(fù)凍融。

1. 3 方法與試劑 采用TRFIA及蘇州新波試劑檢測乙肝兩對半， 儀器為Anytest；采用上?？迫A試劑檢測ALT， 儀器為日立7600全自動生化分析儀。采用PCR-熒光探針法及乙型肝炎病毒核酸定量測定試劑盒定量檢測HBV-DNA， 試劑來自湖南圣湘生物科技有限公司， 本試劑盒的最低檢出量為 1.0×102 IU/ml， 定量線性范圍為 5.0×102～5.0×109 IU/ml。儀器為CFX96型熒光定量PCR儀（Bio-rad公司）， 本次所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒及儀器說明書操作。

2 結(jié)果

本研究185例乙肝患者的血液標(biāo)本中， 血乙肝兩對半模式定量檢測有以下5種模式：大三陽（1， 3， 5陽性）45例， HBV-DNA平均含量 3.91×106 IU/ml， ALT值122.6 IU/L；小三陽（1， 4， 5陽性）111例， HBV-DNA平均含量 3.74×104 IU/ml，

ALT值94.8 IU/L；1， 5陽性模式22例， HBV-DNA平均含量5.19E×105 IU/ml， ALT平均值43.6 IU/L；1， 2， 3， 5陽性模式2例， 1， 2， 4， 5模式5例；HBV-DNA定量檢測結(jié)果以HBV-DNA表達(dá)水平高于1×102 IU /ml為陽性結(jié)果， 本研究185例血清樣本中， HBV-DNA檢測陽性率為73.5%（136/185）。見表1。

3 討論

HBV感染呈世界性流行， 但不同地區(qū)HBV感染的流行強(qiáng)度差異很大， 傳播途徑不確定[3-6]。據(jù)世界衛(wèi)生組織報道， 全球約20億人曾感染過HBV， 其中3.5億人為慢性HBV感染者， 每年約有100萬人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌[7-10]。HBV感染者部分發(fā)展成肝炎， 部分為正常攜帶者， 也有部分發(fā)展成肝硬化和肝癌[11-13]。HBV感染率高， 不僅危害社會公共健康， 也是醫(yī)務(wù)人員職業(yè)暴露時容易感染的病毒[14， 15]， HBV感染一部分人群為正常人群， 無傳染性， 也有部分人群具有傳染性， 判斷HBV感染者是否具有傳染性， 對做好HBV感染控制和預(yù)防工作， 具有重要意義[16-19]。時間分辨免疫熒光法是一種繼放射免疫、酶免疫和發(fā)光免疫后的一種非放射性標(biāo)記免疫分析技術(shù)。鑭系元素的螯合物為TRFIA所使用標(biāo)記物， 具有發(fā)出的熒光時間長、強(qiáng)度高等特點， 因為大部分背景非特異熒光都是短暫存在的短時間熒光， 鑭系金屬螯合物發(fā)出的熒光時間長， 可有效地避免本底非特異熒光的干擾， 故稱TRFIA[20]。TRFIA是一種定量檢測 HBV 標(biāo)志物的新方法， 具有靈敏度高、特異性好等特點。乙肝病毒 DNA 是判斷乙肝病毒有無復(fù)制的黃金指標(biāo)， 其主要用來判斷體內(nèi)乙肝病毒含量的多少及傳染程度， HBV-DAN 含量越高則表示病毒復(fù)制能力越強(qiáng)， 傳染性越強(qiáng)[21]。從本次實驗可見， 1， 3， 5大三陽和1， 2， 3， 5模式的HBV-DNA的陽性率及其平均含量均較其他模式的高， 且反映肝功能損害的ALT也較高， 說明在HBsAg陽性的情況下， 反映乙肝病毒復(fù)制的標(biāo)志物HBeAg陽性與HBV-DNA的陽性率及其平均含量、ALT存在著一定的正相關(guān)性。當(dāng)然本次的1， 2， 3， 5模式的標(biāo)本量較少會有一定的影響。但應(yīng)該準(zhǔn)確測出乙肝標(biāo)志物HBsAg和HBeAg發(fā)現(xiàn)其陽性后應(yīng)高度重視并做好后續(xù)HBV-DNA含量及ALT的檢測， 盡快采取醫(yī)學(xué)干預(yù)。

參考文獻(xiàn)

[1] 于永歌， 佟靜， 陳瑩潔.乙型肝炎病毒與HBV-DNA定量的相關(guān)性分析.中外健康文摘， 2014（20）：186-187.

[2] 孫翠平. 乙肝兩對半與HBV-DNA復(fù)制的臨床對比以及聯(lián)系. 中國保健營養(yǎng)旬刊， 2013（3）：590-591.

[3] 陳欽艷， 方鐘燎， 楊益超， 等. 廣西乙型肝炎病毒感染及肝功能情況調(diào)查. 廣西醫(yī)學(xué)， 2013（11）：1432-1434.

[4] Martinotpeignoux M， Marcellin P， Asselah T. Hepatitis B： clinical application of HBsAg quantification. Annales De Biologie Clinique， 2013， 71（71）：19.

[5] 楊富強(qiáng)， 王平， 朱磊. 乙型肝炎患者檢測血清前白蛋白及α1 - 抗胰蛋白酶含量的意義. 臨床誤診誤治， 2009， 22（12）：52.

[6] 李愛輝， 常晉玲. 慢性乙型肝炎患者的心理障礙及護(hù)理對策. 中國煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志， 2010， 13（3）：467.

[7] Burdino E， Ruggiero T， Proietti A， et al. Quantification of hepatitis B surface antigen with the novel DiaSorin LIAISON XL Murex HBsAg Quant： Correlation with the ARCHITECT quantitative assays. J Clin Virol， 2014， 60（4）：341-346.

[8] Woo SM， Park JW， Lee WJ， et al. Clinical and virological responses to clevudine therapy of hepatocelluar carcinoma patients with chronic hepatitis B. Gut Liver， 2011， 5（1）：82-87.

[9] 李青峰， 畢雷， 尚鵬程， 等. Pre-S1、S2 抗原檢測在乙型 肝炎臨床診斷中的作用及價值. 中國醫(yī)藥科學(xué)， 2013， 3（14）：119- 120.

[10] 諸葛璐， 金玲湘， 林巍. 輕度慢性乙型肝炎患者肝組織中HBcAg及 TGF-β1 的表達(dá)及臨床意義. 中國現(xiàn)代醫(yī)生， 2011， 49（26）：17-19.

[11] 黃金鳳. 乙型肝炎病毒 X 蛋白相關(guān)原發(fā)性肝癌發(fā)生中的表觀遺傳學(xué)機(jī)制研究. 第二軍醫(yī)大學(xué)， 2012.

[12] Assar S， Arababadi MK， Ahmadabadi BN， et al. Occult hepatitis B virus （HBV）infection： a global challenge for medicine. Clinical Laboratory， 2012， 58（11-12）：1225-1230.

[13] Lin CL， Kao JH. Hepatitis B viral factors and clinical outcomes of chronic hepatitis B. J Biomed Sci， 2008， 15（2）：137-145.

[14] 周斌， 王效雷， 李宗香， 等. 乙型肝炎病毒經(jīng)手術(shù)傳播 感染閾值的實驗研究. 解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志， 2013， 31（5）：411-413.

[15] 羅獻(xiàn)偉. 安徽省2006年1～59歲人群乙型病毒性肝炎感染狀況的血清流行病學(xué)調(diào)查. 安徽醫(yī)科大學(xué)， 2012.

[16] Chen GY， Zhu MF， Zheng DL， et al. Baseline HBsAg predicts response to pegylated interferon-α2b in HBeAgpositive chronic hepatitis B patients. World J Gastroenterol， 2014， 20（25）：8195-8200.

[17] Poljak M， Lepej SZ， Rode OD. Recent developments in serologic and molecular diagnosis of hepatitis B and C. Acta Medica Croatica Casopis Hravatske Akademije Medicinskih Znanosti， 2013， 67（4）：281.

[18] 黃靜.熒光定量PCR檢測 HBV-DNA與ELISA法乙肝免疫學(xué)檢測的探討.中國醫(yī)藥科學(xué)， 2013， 3（6）：110-111， 123.

[19] 何冰， 曹茜， 曹武奎， 等.應(yīng)用 SELDI-TOF-MS技術(shù)分析慢性乙肝患者血清差異表達(dá)蛋白. 武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報， 2007， 16（3）： 225-227.

[20] Hu Z， Li M， Huang B， et al. Detection of hepatitis B virus PreS1 antigen using a time-resolved fluoroimmunoassay. J Immunoassay Immunochem， 2012， 33（2）：156-165.

[21] 黎莉.探討乙肝兩對半模式與乙肝病毒DNA定量的相關(guān)性. 醫(yī)學(xué)信息， 2015， 28（2）：210-211.

[收稿日期：2017-04-11]