鄭鵬　張玥

摘要 以MS、WPM、SHb、1/2MS為基本培養(yǎng)基，附加相同濃度的激素，將青刺果莖段置于不同溫度條件下進行培養(yǎng)。結(jié)果表明，青刺果無法誘導(dǎo)愈傷組織或胚狀體，主要原因可能是培養(yǎng)基不適合；取材時間、部位不正確。

關(guān)鍵詞 青刺果；莖段；微繁殖

中圖分類號 S567.9 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）14-0053-01

青刺果別名青刺尖、打油果，生長于海拔1 800～3 200 m的山坡、荒地、房前屋后，是一種藥用、食用兼?zhèn)涞奶赜薪?jīng)濟作物[1]。本項目對青刺果莖段進行組織培養(yǎng)，以期為青刺果種質(zhì)資源的遺傳改良奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗概況

試驗在麗江師范高等?？茖W(xué)校園藝技術(shù)校內(nèi)實驗室進行。試驗所需外植體為野生青刺果母株上的一年生新枝，于2016年11月3日上午在天氣晴朗時采自云南省麗江市周邊山上。新采的外植體用濕報紙包裹，防止水分流失，取樣后立即保藏于4 ℃冰箱中。

1.2 培養(yǎng)基條件

以MS、WPM、SHb、1/2MS為基本培養(yǎng)基，附加相同濃度的激素，并置于不同溫度條件下進行培養(yǎng)。培養(yǎng)基中蔗糖濃度均為30 g/L，瓊脂濃度均為8.0 g/L，pH值5.7～5.8；培養(yǎng)基在121 ℃條件下滅菌15～20 min后冷卻備用。光照時間晝夜交替為12 h。

1.3 試驗方法

2016年11月3日，從麗江周邊山上取野生青刺果一年生枝健壯部位，剪去花蕾、葉片，剪成長2～3 cm帶有2～3個莖刺的莖段，用洗滌劑清洗后，用流水沖洗10 min。將沖洗好的莖段放入燒杯中移至無菌工作臺，先用75%酒精消毒50 s，無菌水沖洗2次，再用0.2%次氯酸鈉溶液浸泡30 min，無菌水沖洗3次，分別置于MS、WPM、SHb、1/2MS培養(yǎng)基中，并分別置于13、18、22 ℃條件下進行培養(yǎng)。每個培養(yǎng)瓶中放3個外植體，1周后觀察記錄培養(yǎng)基內(nèi)莖段生長情況。

將野生青刺果莖段分別接種在MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L、WPM+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L、SHb+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L培養(yǎng)基中，并分別置于13、18、22 ℃條件下進行培養(yǎng)，1周后觀察記錄培養(yǎng)基內(nèi)莖段生長情況[2-3]。

2 結(jié)果與分析

青刺果接種到MS、WPM、SHb、1/2MS培養(yǎng)基中，并分別置于13、18、22 ℃溫度條件下培養(yǎng)2周后，經(jīng)觀察可知，青刺果莖段沒有生長跡象，隨著培養(yǎng)時間的延長，青刺果逐漸被污染。

將野生青刺果莖段分別接種在MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L、WPM+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L、SHb+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L培養(yǎng)基中，并分別置于13、18、22 ℃溫度條件下培養(yǎng)2周后，經(jīng)觀察可知，青刺果莖段也沒有生長跡象，隨著培養(yǎng)時間的延長，青刺果也逐漸被污染。

3 結(jié)論與討論

組織培養(yǎng)作為一種無性繁殖方式，不僅繁殖系數(shù)高，而且具有較高的遺傳穩(wěn)定性，能夠很好地保持材料性狀已經(jīng)獲得的遺傳增益[4]。

該試驗結(jié)果表明，將野生青刺果植物莖段分別培養(yǎng)在MS、WPM、SHb、1/2MS培養(yǎng)基中以及添加了6-BA（0.5 mg/L）、NAA（0.5 mg/L）激素的MS、WPM、SHb、1/2MS培養(yǎng)基中，其莖段不產(chǎn)生愈傷組織，也無生長的跡象，說明野生青刺果植物莖段不適合在MS、WPM、SHb、1/2MS培養(yǎng)基中以及添加了6-BA（0.5 mg/L）、NAA（0.5 mg/L）激素的MS、WPM、SHb、1/2MS培養(yǎng)基中生長。

此外，野生青刺果植物莖段隨著培養(yǎng)時間的延長，自身逐漸產(chǎn)生菌，導(dǎo)致青刺果莖段無法生長，其原因可能與本試驗的消毒處理方法有關(guān)。下一步，應(yīng)優(yōu)化消毒程序，更換消毒試劑。導(dǎo)致野生青刺果植物莖段無法生長的另外一個重要原因就是取材時節(jié)不適宜，取材的時間是11月，正是處于青刺果盛花期，但青刺果開花期較早，春節(jié)前后即開花，花期1～2個月[5]，此期有可能青刺果莖段處于生長末期，外植體對誘導(dǎo)反應(yīng)遲鈍或無反應(yīng)[6]。對于青刺果莖段培養(yǎng)失敗的另一原因可能是木本植物的位置效應(yīng)比較明顯，不同取樣部位，培養(yǎng)結(jié)果不一[7-8]。

4 參考文獻

[1] 范志遠，習(xí)學(xué)良，歐陽和，等.青刺果的植物學(xué)特性及其人工栽培技術(shù)[J].西部林業(yè)科學(xué)，2005（4）：47-52.

[2] 張宇，蔣召雪.野生青刺果研究綜述[J].西昌學(xué)院學(xué)報（自然科學(xué)版），2007（3）：34-36.

[3] 鄭鵬，張玥.我國青刺果研究進展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011（24）：14624-14625.

[4] 楊曉紅，林洋，于建軍.短梗胡枝子優(yōu)良單株組培快繁技術(shù)研究[J].北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報，2015，30（2）：59-62.

[5] 和瓊姬，和加衛(wèi)，王宇萍，等.青刺果研究概述[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2016，32（7）：74-78.

[6] 鄭春明，羅君琴，呂偉德.植物組織培養(yǎng)技術(shù)[M].杭州：浙江大學(xué)出版社，2011：64-65.

[7] 王水琦.植物組織培養(yǎng)技術(shù)[M].北京：中國輕工業(yè)出版社，2008：59-60.

[8] 楊建華，范志遠，李淑芳，等.青刺果育苗技術(shù)[J].林業(yè)實用技術(shù)，2012（1）：28-29.