鄭運(yùn)歡　黃茜莉　張秀珊

摘要 為比較不同的外植體滅菌時(shí)間、培養(yǎng)基質(zhì)等對(duì)金線蘭離體組織叢生芽誘導(dǎo)、壯苗生根的影響，尋求最適合的培養(yǎng)方法，達(dá)到快速獲得大量幼苗的目的，特進(jìn)行了金線蘭組織培養(yǎng)技術(shù)試驗(yàn)。結(jié)果表明，外植體的滅菌時(shí)間對(duì)誘導(dǎo)成功率有較大影響；QZ（MS+6-BA 10 mg/L+蔗糖30 g/L+椰子汁30 mL/L+瓊脂7 g/L，pH值5.5～5.8）培養(yǎng)基較適合金線蘭外植體的誘導(dǎo)；SG（添加花寶1號(hào)3 g/L+花寶2號(hào)0.5 g/L+蛋白胨2 g/L+活性炭0.8 g/L+土豆泥50 g/L+蔗糖20 g/L+瓊脂5.5 g/L，pH值5.5～5.8）培養(yǎng)基較適合金線蘭的生根培養(yǎng)。

關(guān)鍵詞 金線蘭；組織培養(yǎng)；外植體

中圖分類(lèi)號(hào) S567.23+9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2017）14-0045-01

Abstract To compare the influences of different explant sterilization time，culture medium on the shoot induction in vitro，rooting and tran-splantation of Anoectochilus roxburghii，find out the most suitable culture method，test was carried out.The results showed that the sterilization time of the explant had a great influence on the induction success rate.The QZ（MS+6 BA 10 mg/L+sucrose 30 g/L+coconut milk 30 mL/L+agar 7 g/L，pH value is 5.5～5.8） culture medium was suitable for the induction of explants of Anoectochilus roxburghii.The SG（Huabaol 0.5 g/L+peptone 2 g/L+activated carbon 0.8 g/L+mashed potato 50 g/L+sucrose 20 g/L+agar 5.5 g/L，pH value is 5.5～5.8） medium was suitable for the rooting culture of Anoectochilus roxburghii.

Key words Anoectochilus roxburghii；tissue culture；explants

金線蘭[Anoectochilus roxburghii（Wall.） Lindl.]，屬蘭科作物，別稱(chēng)花葉開(kāi)唇蘭、金錢(qián)風(fēng)、金線蓮等。生于海拔50～1 600 m的常綠闊葉林下或溝谷陰濕處，產(chǎn)于中國(guó)、日本、泰國(guó)、老撾、越南、印度、不丹，尼泊爾、孟加拉國(guó)也有分布[1]。金線蘭氨基酸組成成分含量、抗衰老活性微量元素的含量均高于國(guó)產(chǎn)和野生西洋參，是我國(guó)傳統(tǒng)珍貴藥材，素有“金草”“神藥”“烏人參”“藥王”等美稱(chēng)[2]。其全草味甘性平，具有清熱涼血、解毒消腫、潤(rùn)肺止咳、祛風(fēng)利濕等功效，用于咯血、咳嗽痰喘、小便澀痛、消渴、乳糜尿、小兒急驚風(fēng)、對(duì)口瘡、心臟病、毒蛇咬傷等。金線蘭種子微小，由未成熟的胚及數(shù)層種皮細(xì)胞構(gòu)成，自然萌發(fā)率和繁殖率低，市場(chǎng)上貨源主要來(lái)自于野生采挖，產(chǎn)品一直處于供不應(yīng)求的狀況。近年來(lái)，隨著對(duì)其藥用價(jià)值認(rèn)識(shí)的進(jìn)一步提高、藥效學(xué)和臨床應(yīng)用研究的深入，金線蘭市場(chǎng)貨源緊缺的狀況更為嚴(yán)峻，野生資源不斷遭到破壞性采挖，以致瀕臨滅絕。

本研究利用快繁技術(shù)，進(jìn)行金線蘭離體組織培養(yǎng)，旨在快速增殖金線蘭植株，供市場(chǎng)藥用及觀賞之途，滿(mǎn)足人們不斷增長(zhǎng)的多種需求，保護(hù)其野生種質(zhì)資源，并實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)和持續(xù)開(kāi)發(fā)利用[3]。

本課題選用健康、壯實(shí)的金線蘭帶芽莖段作為外植體，比較不同的外植體滅菌時(shí)間、培養(yǎng)基質(zhì)、有機(jī)添加物、激素、培養(yǎng)環(huán)境等對(duì)其叢生芽誘導(dǎo)、增殖、分化、壯苗生根的影響，尋求最適合的培養(yǎng)方法，達(dá)到快速獲得大量幼苗的目的。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

選用健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的金線蘭植株。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體滅菌。切取健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的金線蘭植株莖段[4] 6～10 cm帶芽，去除葉片葉鞘，用低濃度洗潔精水浸泡4～5 min，自來(lái)水沖洗30 min，在超凈工作臺(tái)上用75% 酒精浸泡30 s，放入1% NaClO（每100 mL消毒液加1～2滴吐溫20）中消毒7、9、11 min，無(wú)菌水沖洗5～6次，置于滅菌濾紙上吸干表面水分待用。

1.2.2 莖段誘導(dǎo)培養(yǎng)。將消毒好的金線蘭帶芽莖段，切成2～3 cm長(zhǎng)，基部向下接入JD（MS+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L，瓊脂7 g/L，pH值5.5～5.8）、ZZ（MS+6-BA 5 mg/L+蔗糖30 g/L+椰子汁30 mL/L，瓊脂7 g/L，pH值5.5～5.8）、QZ（MS+6-BA 10 mg/L+蔗糖30 g/L+椰子汁30 mL/L+瓊脂7 g/L，pH值5.5～5.8）、CM（花寶1號(hào)3 g/L+蛋白胨2 g/L+活性炭0.8 g/L+香蕉泥15 g/L+土豆泥50 g/L+蔗糖20 g/L+瓊脂5.5 g/L，pH值5.5～5.8）等4種基本誘導(dǎo)培養(yǎng)基[5]，每種培養(yǎng)基10瓶，每瓶3個(gè)莖段，室溫（26±2）℃黑暗培養(yǎng)30 d。

1.2.3 叢芽繼代增殖。將誘導(dǎo)成功的金線蘭小芽接入ZZ培養(yǎng)基中，置于室溫（26±2）℃、光照（2 000 lx）8 h/d環(huán)境下培養(yǎng)30 d。

1.2.4 壯苗與生根培養(yǎng)。將健壯的金線蘭無(wú)根幼苗（高約3 cm，具有3～4個(gè)節(jié)間）接入CM（花寶1號(hào)3 g/L+蛋白胨2 g/L+活性炭0.8 g/L+香蕉泥15 g/L+土豆泥50 g/L+蔗糖20 g/L+瓊脂5.5 g/L，pH值5.5～5.8）、SG（添加花寶1號(hào)3 g/L+花寶2號(hào)0.5 g/L+蛋白胨2 g/L+活性炭0.8 g/L+土豆泥50 g/L+蔗糖20 g/L+瓊脂5.5 g/L，pH值5.5～5.8）培養(yǎng)基中，每種培養(yǎng)基10瓶，每瓶10苗，置于室溫（26±2）℃、光照（2 000 lx）10 h/d環(huán)境下培養(yǎng)15 d。

1.2.5 煉苗移栽。將經(jīng)過(guò)壯苗生根培養(yǎng)的金線蘭幼苗放入煉苗棚進(jìn)行自然光照培養(yǎng)，30 d后選取高7～8 cm、莖基直徑約2 mm、叢生根3條或以上的小苗洗凈晾干，用育苗盤(pán)進(jìn)行假植培養(yǎng)，在18～25 ℃、3層75%活動(dòng)遮蔭網(wǎng)自然光下培養(yǎng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同外植體滅菌時(shí)間對(duì)污染率、萌發(fā)率和死亡的影響

外植體經(jīng)過(guò)滅菌，培養(yǎng)30 d后，部分污染，部分萌發(fā)，部分死亡。由表1可知，10% NaClO消毒7 min時(shí)間較短，污染率較高；消毒9 min效果居中；消毒11 min時(shí)間較長(zhǎng)，死亡率較高。因此，把握外植體的滅菌時(shí)間對(duì)誘導(dǎo)成功率有較大影響。

2.2 不同培養(yǎng)基對(duì)誘導(dǎo)率的影響

外植體經(jīng)過(guò)培養(yǎng)30 d后，JD、ZZ、QZ、CM培養(yǎng)基上的外植體誘導(dǎo)率分別為50.6%、75.1%、82.3%、47.2%。QZ培養(yǎng)基上的外植體誘導(dǎo)率較高。因此，QZ培養(yǎng)基較適合金線蘭外植體的誘導(dǎo)。

2.3 不同培養(yǎng)基對(duì)壯苗、生根培養(yǎng)的影響

幼苗接入2種培養(yǎng)基培養(yǎng)30 d后，由表2可知，SG培養(yǎng)基上的幼苗新生葉片數(shù)和生根條數(shù)較多，較為合適。因此，SG培養(yǎng)基較適合金線蘭的生根培養(yǎng)。

3 結(jié)論與討論

金線蘭屬陰性植物，喜涼溫，應(yīng)在組織培養(yǎng)過(guò)程中根據(jù)其特性進(jìn)行合理的光溫調(diào)控[6]，如在誘導(dǎo)期黑暗培養(yǎng)，有利芽體分化，繼代增殖期弱光培養(yǎng)，減緩苗體老化，壯苗生根期加強(qiáng)光照，促進(jìn)植株增粗。金線蘭的快繁技術(shù)已經(jīng)十分成熟，在今后的組織培養(yǎng)擴(kuò)繁中，要根據(jù)選用的外植體品種、部位來(lái)選擇相應(yīng)的培養(yǎng)基種類(lèi)和添加物，制定相應(yīng)的培養(yǎng)方案，以期提高產(chǎn)量和質(zhì)量，獲得更大的效益，促進(jìn)農(nóng)戶(hù)增收，幫助當(dāng)?shù)噩F(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展[7-8]。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 張金國(guó).金線蓮組培快繁技術(shù)研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2014（14）：68-69.

[2] 曾建軍，李軍，李曉紅，等.金線蓮增殖培養(yǎng)研究[J].井岡山大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2013（3）：34-36.

[3] 李艷冬，葉紅霞，陳麗萍.金線蓮組培快繁技術(shù)體系的研究[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2013（4）：52-54.

[4] 張文珠，林德欽，李梅.花葉開(kāi)唇蘭組培工廠化育苗技術(shù)[EB/OL].[2017-03-20].http：//www.doc88.com/p-7522991153023.html.

[5] 江建銘，俞旭平，沈曉霞，等.金線蓮組培快繁技術(shù)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009（2）：408-410.

[6] 林海，郝慧敏.金線蘭愈傷組織誘導(dǎo)的最佳激素配比[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011（12）：2568-2570.

[7] 楊紅麗，胡靖鋒，徐學(xué)忠，等.金線蓮的組織培養(yǎng)與快速繁殖研究[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2013（6）：2485-2488.

[8] 范子南，肖華山，范曉紅，等.金線蓮的組織培養(yǎng)研究[J].福建師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），1997（2）：85-90.