杜少芳， 劉金龍* ，樊瑋鑫，楊博凱，荊小院

(1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 文理學(xué)院化學(xué)生態(tài)研究所，山西 太谷 030801；2. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 分析測(cè)試中心，山西 太谷 030801；3. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，山西 太谷 030801)

梨小食心蟲(chóng)性誘芯中活性成分的毛細(xì)管氣相色譜定量分析

杜少芳1， 劉金龍* 1，樊瑋鑫2，楊博凱1，荊小院3

(1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 文理學(xué)院化學(xué)生態(tài)研究所，山西 太谷 030801；2. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 分析測(cè)試中心，山西 太谷 030801；3. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，山西 太谷 030801)

采用毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定了梨小食心蟲(chóng)性誘芯中主要成分順-8-十二碳烯醇乙酸酯(Z8-12:Ac)的含量。反口橡皮塞誘芯中Z8-12:Ac采用正己烷提取，在濃度為20～100 μg·mL-1范圍內(nèi)測(cè)定，方法具有良好的線性，R2為0.9768，檢出限(LOD)為0.023 μg·mL-1，定量限(LOQ)為0.116 μg·mL-1，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差2.76 %。方法測(cè)定的結(jié)果準(zhǔn)確可靠，能滿(mǎn)足性誘芯中Z8-12:Ac的檢測(cè)要求。

毛細(xì)管氣相色譜法；定量分析；梨小食心蟲(chóng)性誘芯；順-8-十二碳烯醇乙酰酯

梨小食心蟲(chóng)為我國(guó)果區(qū)發(fā)生嚴(yán)重的害蟲(chóng)之一，主要為害蘋(píng)果、梨、桃等果樹(shù),繁殖快且代數(shù)重疊[1-2]，多年來(lái)以化學(xué)農(nóng)藥防治為主[3]，雖然對(duì)梨小食心蟲(chóng)有較強(qiáng)的防治作用，但也造成了害蟲(chóng)抗藥性增強(qiáng)、污染環(huán)境和傷害有益天敵等問(wèn)題，因此使用性信息素來(lái)生物防治的無(wú)公害手段得以迅速發(fā)展[4]。在目前的梨小食心蟲(chóng)監(jiān)測(cè)防治工作中，使用較多的是載有性誘劑的反口橡皮塞誘芯[5]，誘芯中的主要成分是順-8-十二碳烯醇乙酸酯(Z8-12:Ac)[6]，在使用過(guò)程中其揮發(fā)量易受風(fēng)速、溫度等外界條件的影響，而性誘劑產(chǎn)品的劑量會(huì)直接影響到種群監(jiān)測(cè)與誘捕效果[7]，因此定量測(cè)定性信息素是很重要的，但關(guān)于性誘芯中活性成分的定量分析及其方法鮮有報(bào)道。文獻(xiàn)所報(bào)道的氣相色譜檢測(cè)[8-9]，主要是用于考察不同誘捕器或誘芯的誘捕效果，或者研究性誘劑釋放載體[10]。因此本文通過(guò)毛細(xì)管氣相色譜法，采用外標(biāo)法研究了性誘芯活性成分，測(cè)定了梨小食心蟲(chóng)性誘芯中Z8-12:Ac的含量，確定了兩種方法對(duì)Z8-12:Ac的檢出限，為性誘芯在實(shí)際應(yīng)用提供一種可靠的定量分析方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器：Trace 1300氣相色譜儀帶工作站(Thermo SCIENTIFIC公司)，配AI 1301自動(dòng)進(jìn)樣器，HG-1803A型高純氫氣發(fā)生器，G-1602型空氣泵，F(xiàn)ID檢測(cè)器。

試劑：梨小食心蟲(chóng)性誘劑Z8-12:Ac標(biāo)準(zhǔn)品(本實(shí)驗(yàn)室自主合成，色譜檢驗(yàn)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為92%，另文發(fā)表)；正己烷(色譜純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)；梨小食心蟲(chóng)誘芯(中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所研制生產(chǎn)，含96個(gè)單體的橡膠板，單個(gè)約重0.3～0.5 g)

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 氣相色譜條件

石英毛細(xì)管色譜柱：Test Column (7 mt, 0.32 ID)，TR-5，7 m×0.32 mm，中等極性色譜柱：TRACE TR-V1 GC Column， 30 m，0.32 mmID，1.8μm Film。

氫氣：35 mL·min-1，空氣：350 mL·min-1；尾吹氣：40 mL·min-1；采用恒流模式，載氣為高純氮?dú)?，流量?.000 mL·min-1；分流進(jìn)樣，分流比為1∶20.0，分流流量，20 mL·min-1，進(jìn)樣量為1 μL；柱溫：50 ℃，進(jìn)樣口溫度：200 ℃，檢測(cè)器溫度：280 ℃。柱溫采用程序升溫：初溫50 ℃，保持1 min后以15 ℃·min-1的速率升至260 ℃，保持3 min，再以10 ℃·min-1的速率升至280 ℃，保持1 min。

1.2.2 樣品預(yù)處理

隨機(jī)取7個(gè)未使用的梨小食心蟲(chóng)誘芯，用刀片把每個(gè)誘芯切成厚度約1 mm的碎片，并全部轉(zhuǎn)移入具塞三角瓶?jī)?nèi)，加入30 mL正己烷，搖勻后放置1～2h，抽取上次清夜，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾轉(zhuǎn)移入樣品瓶中，旋緊瓶蓋避光保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 氣相色譜檢測(cè)

準(zhǔn)確移取適量的梨小食心蟲(chóng)性誘劑標(biāo)準(zhǔn)品和上述儲(chǔ)備液于樣品瓶中，加正己烷至1 mL，搖勻，進(jìn)樣檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 氣相色譜分析

Z8-12:Ac標(biāo)準(zhǔn)品與樣品氣相色譜測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖1與圖2。結(jié)果表明性誘芯樣品液中的Z8-12:Ac的出峰情況與Z8-12:Ac標(biāo)準(zhǔn)品的相同，峰型較好，保留時(shí)間都為11.863 min，標(biāo)準(zhǔn)品沒(méi)有雜峰干擾；從樣品液的色譜圖可以看出Z8-12:Ac的峰高最高，峰面積最大，為性誘芯的主要成分。

圖1 Z8-12:Ac標(biāo)準(zhǔn)品氣相色譜圖

圖2 樣品液的氣相色譜圖

2.3 方法考察與性能評(píng)價(jià)

2.3.1 方法的線性范圍

圖 3 Z8-12:Ac的標(biāo)準(zhǔn)曲線

采用外標(biāo)法測(cè)定了濃度分別為20、40、60、80、100 μg·mL-1的Z8-12:Ac標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖3。結(jié)果表明，在該濃度范圍內(nèi)，氣相色譜圖中Z8-12:Ac的色譜峰面積與Z8-12:Ac濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，其線性方程為A=0.0574c-0.1077， R2為0.9768。

2.3.2 樣品分析與回收率測(cè)定

準(zhǔn)確移取適量的樣品液，按試驗(yàn)方法測(cè)定Z8-12:Ac的含量，以4.0、6.0、8.0 μg·mL-1為添加水平對(duì)方法進(jìn)行加標(biāo)回收。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 樣品中Z8-12:Ac含量的測(cè)定結(jié)果(n=5)

2.3.3 方法的檢出限(LOD)、定量限(LOQ)、精密度(RSD)

以Z8-12:Ac標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣，檢出限(LOD)根據(jù)S/N = 3計(jì)算，為0.023 μg·mL-1；定量限(LOQ)根據(jù)S/N=10計(jì)算，為0.116 μg·mL-1；精密度(RSD)以相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，對(duì)20 μg·mL-1的Z8-12:Ac標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行分析，重復(fù)測(cè)定6次，為2.76 %。

3 討論

采用外標(biāo)法研究了性誘芯活性成分，建立了利用毛細(xì)管氣相色譜測(cè)定梨小食心蟲(chóng)性誘芯中Z8-12:Ac含量的方法，確定了方法的檢出限和定量限，分別是0.023 μg·mL-1、0.116 μg·mL-1，并對(duì)方法進(jìn)行了精密度、回收率試驗(yàn)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.76 %，加標(biāo)回收率為100.4%～103.1%。方法具有操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確度和靈敏度高的特點(diǎn)，可以滿(mǎn)足對(duì)常用梨小食心蟲(chóng)性誘芯中Z8-12:Ac含量的測(cè)定，也可以用來(lái)檢測(cè)性誘芯在使用過(guò)程中Z8-12:Ac的含量變化。

性信息素本身是易揮發(fā)性化合物，而且在實(shí)際應(yīng)用中在性誘芯中的含量非常小，一般是微克級(jí)，易受氣候和溫度等外界因素的影響，導(dǎo)致釋放量難以控制，而不能很好的確定性誘芯的高效釋放時(shí)間和使用時(shí)限會(huì)對(duì)蟲(chóng)情預(yù)測(cè)和誘殺造成一定影響?；谶@一問(wèn)題，目前人們主要將性信息素增效劑[12]、緩釋劑[13]等不同劑型的制備作為研究重點(diǎn)，用于達(dá)到提高性信息素的防治效果和緩釋作用，很少有定量分析性信息素產(chǎn)品中性信息素的文獻(xiàn)報(bào)道。本文首次采用毛細(xì)管氣相色譜法定量分析了梨小食心蟲(chóng)性誘芯中主要成分Z8-12:Ac含量，可以用于性誘芯在使用前和使用狀態(tài)下的含量測(cè)定，但是此次分析還有一些問(wèn)題需要克服。氣相色譜通過(guò)已知物色譜峰的保留時(shí)間來(lái)定性分析，設(shè)備基線等會(huì)對(duì)保留時(shí)間有一定影響，定性結(jié)果不一定準(zhǔn)確；此外受檢測(cè)器限制，樣品中雜質(zhì)也會(huì)影響主成分的色譜峰，使得線性相關(guān)系數(shù)不高，因此需要尋找一種定性與定量更為準(zhǔn)確的測(cè)定技術(shù)來(lái)分析昆蟲(chóng)性信息素的含量。

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(本文文獻(xiàn)格式：杜少芳， 劉金龍，樊瑋鑫，等.梨小食心蟲(chóng)性誘芯中活性成分的毛細(xì)管氣相色譜定量分析[J].山東化工，2017，46(06)：84-85，91.)

Quantitative Analysis of Active Constituent of Grapholitha Molesta Busck Sex Pheromone in Sex Attractant Lure by Capillary Gas Chromatography

DuShaofang1，LiuJinlong*1，F(xiàn)anWeixin2，YangBokai1，JingXiaoyuan3

(1. Shanxi Agricultural University College of Arts and Sciences & Institute of Chemical Ecology，Taigu 030801，China;2. Shanxi Agricultural University Analytical and Testing Center，Taigu 030801，China;3. Shanxi Agricultural University College of Life Science，Taigu 030801，China)

The (Z)-8-dodecylene-1-ol acetate ( Z8-12:Ac) which is active constituent of Grapholitha molesta Busck sex attractant lure was extracted by n-hexane and was determined by capillary gas chromatography. Linearity was obeyed in the range of 20～100 μg/mL of Z8-12:Ac with the correlation coefficients(R2) was 0.9768. The detection limit was 0.023 μg·mL-1and the quantitation limit was 0.116 μg·mL-1. The relative standard deviation was 2.76% . The method is accurate and reliable, and could meet the requirements of the Z8-12:Ac analysis in sex attractant lure products．

capillary gas chromatography(CGC)；quantitative analysis；Grapholitha molesta Busck pheromone lure core；(Z)-8-dodecylene-1-ol acetate

2017-02-16

山西農(nóng)業(yè)大學(xué)引進(jìn)人才科研啟動(dòng)項(xiàng)目(412576)

杜少芳(1992—)，女，山西忻州人，碩士研究生，研究方向：生物化學(xué)分析；通信作者：劉金龍，教授。

O657.7+1

A

1008-021X(2017)06-0084-02