張艷麗，丁慧玲，張紅梅

(山東步長制藥股份有限公司，山東 菏澤 274000)

脂肝寧膠囊大黃素含量測(cè)定方法學(xué)研究

張艷麗，丁慧玲，張紅梅

(山東步長制藥股份有限公司，山東 菏澤 274000)

目的：改進(jìn)脂肝寧膠囊含量測(cè)定方法。方法：采用液相色譜法，色譜柱型號(hào)為ZORBAX SB-C18色譜柱(4.6×250mm,5.0μm)，以甲醇-1%磷酸水溶液(90:10)為流動(dòng)相，流速1mL/min，檢測(cè)波長為254nm，柱溫為25℃。結(jié)果：大黃素在15.46～77.30μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R=0.9998)，平均回收率為100.07%，RSD=1.27%(n=6)。結(jié)論：該方法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

脂肝寧膠囊；大黃素；含量測(cè)定；高效液相色譜法

脂肝寧膠囊是在多年臨床應(yīng)用確有療效方劑基礎(chǔ)上開發(fā)的中藥新藥，全方由9味中藥組成，為治療和預(yù)防脂肪肝較好的藥物[1]。大黃素是臣藥虎杖的主要活性成分[2]，本文結(jié)合虎杖藥材的含量測(cè)定法定方法[3]將前處理過程相對(duì)于文獻(xiàn)[1]中方法簡化，耗時(shí)短，操作相對(duì)簡單，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于脂肝寧膠囊中大黃素的含量測(cè)定。

1 儀器與試劑

1260液相色譜儀(安捷倫，紫外檢測(cè)器，Chemstation色譜工作站)，SQP型電子天平(賽多利斯)，MSA-225S-1CE-DU型電子天平(賽多利斯)，KQ-300VDE型超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)，F(xiàn)DY4002-UV型底有機(jī)物超純水機(jī)(青島富勒姆科技有限公司)。

大黃素(110756-200110)，購自中國食品藥品檢定研究院；脂肝寧膠囊(自制樣品，批號(hào)為150501、150502、150503)，水為超純水，甲醇為色譜純，三氯甲烷、硫酸、磷酸為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

采用ZORBAX SB-C18色譜柱(4.6×250mm,5.0μm)，以甲醇-1%磷酸水溶液(90:10)為流動(dòng)相，流速為1mL/min，檢測(cè)波長為254nm，柱溫為25℃，進(jìn)樣量為10μL。理論塔板數(shù)按大黃素峰計(jì)應(yīng)不低于7500，大黃素與相鄰峰的分離度應(yīng)大于1.5。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

取大黃素對(duì)照品約10mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液；吸取3mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度制成濃度為30.92μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物，混勻，精密稱取本品0.25g，精密稱定，精密加入三氯甲烷25mL和2.5mol/L的硫酸溶液20mL，稱定重量，置80℃水浴中加熱回流2小時(shí)，冷卻至室溫，再稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻。分取三氯甲烷溶液，精密量取10mL，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45μm的微孔濾膜過濾，即得。

2.3 干擾試驗(yàn)

圖1 脂肝寧膠囊HPLC圖譜

按脂肝寧膠囊處方制備不含虎杖藥材的陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液，按上述色譜條件注入液相色譜儀，見圖1。結(jié)果供試品溶液出現(xiàn)對(duì)照品色譜峰，陰性則無對(duì)照品峰出現(xiàn)，表明陰性對(duì)照無干擾，方法專屬性強(qiáng)。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密量取大黃素貯備溶液1,2,3,4,5mL置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。分別精密量取上述溶液注入液相色譜儀，按上述色譜條件操作，記錄峰面積，見表1。以大黃素濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積值(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=18.968X-4.7698,相關(guān)系數(shù)R=0.9998，線性范圍為：15.46μg/mL～77.30μg/mL。

表1 大黃素濃度與峰面積

2.5 精密度試驗(yàn)

取脂肝寧膠囊(批號(hào)150501)，按上述方法制備供試品溶液，并按上述條件操作，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，見表2，其RSD為0.4%，表明精密度良好。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取上述脂肝寧膠囊(批號(hào)150501)供試品溶液，按上述色譜條件操作，分別于0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h進(jìn)樣，記錄峰面積，見表3，其RSD為0.4%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取脂肝寧膠囊(批號(hào)150501)樣品6份，按上述方法制備供試品溶液，按上述色譜條件操作，記錄峰面積，計(jì)算含量，見表4，其RSD為1.2%，表明本方法重復(fù)性良好。

表4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的膠囊內(nèi)容物6份，各約0.12g，精密稱定，分別加入一定量的大黃素對(duì)照品溶液(濃度220.32μg/mL)，使大黃素的加入量為脂肝寧膠囊中大黃素含量的50%，100%。按上述方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件操作，記錄峰面積，計(jì)算結(jié)果見表5。結(jié)果表明大黃素平均回收率為100.07%，RSD為1.27%。

表5 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測(cè)定

按上述方法測(cè)定脂肝寧膠囊的含量，結(jié)果見表6

表6 測(cè)定脂肝寧膠囊的含量結(jié)果

3 結(jié)果和討論

改進(jìn)了液相色譜法測(cè)定脂肝寧膠囊大黃素含量測(cè)定的方法，結(jié)果線性關(guān)系良好，大黃素平均回收率為100.07%，表明方法準(zhǔn)確、靈敏、重復(fù)性好，可用于脂肝寧膠囊的質(zhì)量控制。

[1] 姜少灝，蔣 曄，郝曉花.非水反相液相色譜法測(cè)定脂肝寧膠囊中大黃素、大黃素甲醚的含量[J].中國藥物分析雜志,2003,23(6)：437-439.

[2] 姚樹坤，蔣 曄，郝曉花，等.虎杖及其復(fù)方中大黃素在大鼠體內(nèi)的藥代學(xué)研究[J].中國中藥雜志.2005,30(6)：463-465.

[3] 國家藥典委員會(huì).《中華人民共和國藥典：2015年版.一部》[S].1版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2015：208-209.

(本文文獻(xiàn)格式：張艷麗，丁慧玲，張紅梅.脂肝寧膠囊大黃素含量測(cè)定方法學(xué)研究[J].山東化工，2017，46(08)：80-81,84.)

Methodological Research on the Determination of Rhein in Zhiganning Capsules

ZhangYanli,DingHuiling,ZhangHongmei

(Shandong Buchang Pharmaceutical Co.,Ltd.,Heze 274000,China)

Objective：To determine the content of rhein in Zhiganning capsules.Methods The ZORBAX SB-C18 column(4.6×250mm,5.0μm).The mobile phase was methanol-1%orthophosphoric acid (90:10).The flow rate was 1.0mL/min,and the wavelength used for detection 254nm.The column temperature was 25℃.Result::A good linear relationship was obtained in the concerntration of 15.46μg/mL～77.30μg/mL(R=0.9998).The average recovery was 100.07%,with RSD of 1.27%(n=6).Conclusion:The method is simple,accurate,and reproducible to be used in quality control.

Zhiganning capsules; rhein;determination of content;HPLC

2017-03-08

張艷麗(1985—)，女，山東菏澤人，藥師，主要從事藥物分析研究。

O657.7+2

A

1008-021X(2017)08-0080-02