祝麗超 畢 夏 張 錦

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院，沈陽，110000)

犀角地黃湯對膿毒癥大鼠肝保護作用的影響效果分析

祝麗超 畢 夏 張 錦

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院，沈陽，110000)

目的：研究分析犀角地黃湯對膿毒癥大鼠肝保護作用的影響效果。方法：選擇2016年9月在我院實驗室中飼養(yǎng)的SPF級SD大鼠90只進行研究，根據(jù)簡單數(shù)字隨機表法將其分成觀察組(制成膿毒癥大鼠的模型后利用犀角地黃湯處理)、模型組(制成膿毒癥大鼠的模型)、假手術(shù)組，每組30只。分別在手術(shù)后的8 h及16 h比較各組肝功能及炎性反應(yīng)指標(biāo)水平，肝組織勻漿的一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)及超氧化物歧化酶(SOD)水平，分析膿毒癥大鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)及谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平與NO、MDA、iNOS及SOD的相關(guān)性。結(jié)果：觀察組及模型組術(shù)后8 h及16 h的ALT、AST、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及白細(xì)胞介素-6(IL-6)水平均分別明顯高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組術(shù)后8 h及16 h的ALT、AST、TNF-α及IL-6水平均分別明顯高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組及模型組術(shù)后8 h及16 h的NO及iNOS水平均明顯高于假手術(shù)組，SOD水平明顯低于假手術(shù)組，術(shù)后16 h的MDA水平均分別明顯高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組術(shù)后8 h及16 h的NO及iNOS水平均明顯低于模型組，術(shù)后16 h的MDA水平明顯低于模型組，SOD水平明顯高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。依據(jù)Spearman法分析相關(guān)性可知，膿毒癥大鼠ALT及AST水平與NO、MDA及iNOS均呈正相關(guān)，而與SOD呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論：犀角地黃湯對膿毒癥大鼠具有較好的肝保護作用，對于大鼠的肝功能及炎性反應(yīng)癥狀存在較好的改善效果。

犀角地黃湯；膿毒癥大鼠；肝保護作用；影響效果

膿毒癥是臨床高發(fā)疾病類型，其發(fā)病機制十分復(fù)雜，目前尚不明確，身體任何部位發(fā)生感染，或者燒傷、多發(fā)傷等各類嚴(yán)重疾病和外科手術(shù)等情況均有可能發(fā)生該病。據(jù)統(tǒng)計，世界上每年約有1900萬人患該病，且該發(fā)病率會伴隨時間推移而不斷上升。由于膿毒癥本身病情十分兇險，具有較高病死率，同時該病并發(fā)癥種類較多，并會對患者多項器官造成嚴(yán)重?fù)p傷，進一步加大患者死亡危險[1]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，膿毒癥發(fā)病機制通常會涉及到機體多項系統(tǒng)，并且會引發(fā)多個器官出現(xiàn)功能障礙，特別是肝臟作為人體重要調(diào)節(jié)器官，其不但能夠產(chǎn)生大量炎性遞質(zhì)，而且會生成多種凝血因子等，所以其在膿毒癥整個病情發(fā)展過程中均十分重要[2]。有學(xué)者指出，以中醫(yī)角度考慮，膿毒癥主要致病因素為熱毒，應(yīng)用具有清熱解毒功效的犀角地黃湯，預(yù)期會收到較滿意效果[3]。鑒于此，本文通過研究分析犀角地黃湯對膿毒癥大鼠肝保護作用的影響效果，旨在為后期臨床治療用藥的選擇提供方案參考，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 選擇2016年9月在我院實驗室中飼養(yǎng)的SPF級SD大鼠90只進行研究，體重為(200±15)g，雌雄不限，均為同批飼養(yǎng)。標(biāo)準(zhǔn)1)均為健康大鼠；2)飼養(yǎng)時間相同；3)初次實驗的大鼠。排除1)非SPF級大鼠；2)制作模型時未成功的大鼠；3)飼養(yǎng)時飲食狀態(tài)不佳的大鼠。剔除1)飼養(yǎng)期間死亡的大鼠；2)患有其他疾病的大鼠。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 根據(jù)簡單數(shù)字隨機表法將其分成觀察組(制成膿毒癥大鼠的模型后利用犀角地黃湯處理)、模型組(制成膿毒癥大鼠的模型)、假手術(shù)組，每組30只。對觀察組及模型組均制成膿毒癥大鼠的模型，具體操作為：將大鼠應(yīng)用1.25 mg/g的烏拉坦(產(chǎn)自上海的源葉生物科技公司，生產(chǎn)批號：YY11122)進行麻醉之后，于無菌條件下順著其腹中線行1 cm長度切口開腹，而后游離盲腸與腸系膜，在盲腸根部進行結(jié)扎，通過9號針頭在所結(jié)扎位置的遠(yuǎn)端進行2次盲腸的貫穿，其中針孔間距約3 cm，為其留置皮片以防閉合，再將結(jié)扎的盲腸送回腹腔，為其縫合切口，放于籠中自由活動，期間不禁飲食。另對假手術(shù)組大鼠進行麻醉后為其開腹，將盲腸游離出腹腔，翻動數(shù)次后送回腹腔為其縫合切口。以上各組在手術(shù)結(jié)束后均給予30 mL/kg的生理鹽水行皮下注射，以補充手術(shù)導(dǎo)致的液體丟失。

1.2.2 給藥方法 在術(shù)前1 h給予模型組及假手術(shù)組大鼠0.01 mL/g的生理鹽水灌胃，給予觀察組0.01 mL/g的由犀角地黃湯制成的混懸液灌胃。其中犀角地黃湯的中藥基本方為：水牛角30 g、生地黃24 g、赤芍12 g、牡丹皮9 g。將上述4種藥材制成顆粒后利用蒸餾水溶解并配置成0.78 g/mL的混懸液。

1.2.3 觀察指標(biāo) 分別在手術(shù)后的8 h及16 h取各組的15只大鼠開腹，并經(jīng)其下腔靜脈提取血液標(biāo)本3 mL，行10 min 1 500 r/min的離心，提取血清后通過貝克曼AU680全自動生化分析儀依據(jù)試劑盒的說明書分別檢測大鼠的肝功能指標(biāo)(ALT、AST、TBiL)及炎性反應(yīng)指標(biāo)(TNF-α、IL-6)。而后分離出大鼠的腹腔臟器，將肝臟取出，將肝組織及生理鹽水在冰浴條件下制成10%的勻漿，利用標(biāo)準(zhǔn)品算出勻漿當(dāng)中的NO及MDA含量以及iNOS與SOD的水平。以上步驟所涉及的試劑盒購自深圳的晶美公司及武漢的博士德公司，嚴(yán)格根據(jù)說明書中的步驟仔細(xì)操作。

2 結(jié)果

2.1 各組肝功能及炎性反應(yīng)指標(biāo)水平的比較 觀察組及模型組術(shù)后8 h及16 h的ALT、AST、TNF-α及IL-6水平均分別明顯高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組術(shù)后8 h及16 h的ALT、AST、TNF-α及IL-6水平均分別明顯高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2 各組肝組織勻漿的NO、MDA、iNOS及SOD水平的比較 觀察組及模型組術(shù)后8 h及16 h的NO及iNOS水平均明顯高于假手術(shù)組，SOD水平明顯低于假手術(shù)組，術(shù)后16 h的MDA水平均分別明顯高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組術(shù)后8 h及16 h的NO及iNOS水平均明顯低于模型組，術(shù)后16 h的MDA水平明顯低于模型組，SOD水平明顯高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.3 膿毒癥大鼠ALT及AST水平與NO、MDA、iNOS及SOD的相關(guān)性分析 依據(jù)Spearman法分析相關(guān)性可知，膿毒癥大鼠ALT及AST水平與NO、MDA及iNOS均呈正相關(guān)，而與SOD呈負(fù)相關(guān)。見表3。

表1 各組肝功能及炎性反應(yīng)指標(biāo)水平的比較

注：與假手術(shù)組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05

表2 各組肝組織勻漿的NO、MDA、iNOS及SOD水平的比較

注：與假手術(shù)組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05

表3 膿毒癥大鼠ALT及AST水平與NO、MDA、iNOS及SOD的相關(guān)性分析

3 討論

膿毒癥是由感染導(dǎo)致的全身性炎性反應(yīng)綜合疾病，是機體對致感染因素作出的反應(yīng)。膿毒癥機制復(fù)雜，涉及全身多個系統(tǒng)，并會引發(fā)多項器官出現(xiàn)病理以及生理性改變。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，肝臟作為能夠平衡代謝機制以及可以發(fā)揮防御功能的關(guān)鍵性器官，其功能完整性對膿毒癥最終能否發(fā)展至全身多項器官出現(xiàn)功能障礙十分重要[4]。研究結(jié)果顯示，合并肝硬化等肝臟疾病患者發(fā)生膿毒癥的幾率更大，其體內(nèi)各項炎性反應(yīng)遞質(zhì)水平顯著增高，且患者發(fā)生膿毒癥后病死率也更高，進一步說明肝臟器官功能健全對膿毒癥病情控制的重要性[5]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，膿毒癥為外感熱病所致，犀角地黃湯作為清熱方劑，十分適于治療該病[6]。同時臨床上以往應(yīng)用該方劑治療肝炎、肝昏迷等類型疾病均起到滿意療效，至于其對膿毒癥患者肝保護作用需進一步研究總結(jié)。

本文經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，觀察組及模型組術(shù)后8 h及16 h的ALT、AST、TNF-α及IL-6水平均分別明顯高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且觀察組術(shù)后8 h及16 h的ALT、AST、TNF-α及IL-6水平均分別明顯高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。提示制成膿毒癥模型的大鼠肝臟功能均具有一定的損害，而應(yīng)用犀角地黃湯處理后，大鼠的肝臟功能具有明顯的改善。原因可能與犀角地黃湯的中藥調(diào)理作用有關(guān)。犀角地黃湯屬于中醫(yī)清熱方劑，具有清熱解毒以及涼血散瘀等治療功效。通常將其用于治療熱入血分證和熱傷血絡(luò)以及蓄血瘀熱等癥。臨床研究證實，該藥對重癥肝炎、尿毒癥以及肝昏迷等多種血分熱盛類疾病均起到滿意治療效果[7-8]。同時，犀角地黃湯內(nèi)存在抑制炎性反應(yīng)作用的細(xì)胞因子，其在降低脂質(zhì)過氧化作用，以及減少并預(yù)防血栓生成等方面均起到積極作用。ALT及AST為2種能夠反映出肝功能是否受損的酶，其水平升高程度和肝功能受損程度有關(guān)。本文研究得出模型組出現(xiàn)ALT及AST水平均上升現(xiàn)象，證實在膿毒癥初期已發(fā)生肝臟受損。然而觀察組ALT及AST兩項水平上升程度均顯著低于模型組，表示犀角地黃湯可起到保護肝臟，防止其受損的功效。庫弗氏細(xì)胞可清除體內(nèi)細(xì)菌及毒素，肝臟中庫弗氏細(xì)胞中貯藏著大量巨噬細(xì)胞，占人體總量的80%，當(dāng)發(fā)生膿毒癥時，肝臟中的庫弗氏細(xì)胞可生成大量不同種類的促炎性因子，包括TNF-α以及IL-6等[9-10]。其中TNF-α為一種重要炎性反應(yīng)因子，其能夠誘導(dǎo)全身性炎性反應(yīng)型綜合征，且其還可以造成肝細(xì)胞凋亡，并同時刺激產(chǎn)生大量IL-6。臨床通常將IL-6活性水平用于預(yù)測肝炎患者肝受損程度，認(rèn)為IL-6活性和肝臟類疾病病情嚴(yán)重程度以及預(yù)后效果等存在直接聯(lián)系。由此可知，對TNF-α以及IL-6等活性進行抑制，有助于降低膿毒癥對肝臟損傷程度。

此外，本文發(fā)現(xiàn)，觀察組及模型組術(shù)后8 h及16 h的NO及iNOS水平均明顯高于假手術(shù)組，SOD水平明顯低于假手術(shù)組，術(shù)后16 h的MDA水平均分別明顯高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組術(shù)后8 h及16 h的NO及iNOS水平均明顯低于模型組，術(shù)后16 h的MDA水平明顯低于模型組，SOD水平明顯高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。這再次表明觀察組經(jīng)犀角地黃湯處理后大鼠的肝功能損害程度更小。膿毒癥初期，機體內(nèi)毒素和多種細(xì)胞因子均會對肝細(xì)胞以及庫弗氏細(xì)胞等產(chǎn)生刺激，導(dǎo)致iNOS呈高表達狀態(tài)，進而生成過多NO，使得血管擴張，引發(fā)低血壓以及心肌受抑等不良后果[11-12]。MDA屬于氧自由基代謝中間產(chǎn)物，可用于表達脂質(zhì)過氧化活動情況。而SOD則為一種抗氧化酶，其大量存在于多種生物體內(nèi)，對超氧陰離子起到催化作用，進而發(fā)生歧化反應(yīng)，SOD可作為一項關(guān)鍵性自由基清除劑。本文結(jié)果證實在膿毒癥對肝臟損傷階段，肝臟產(chǎn)生的氧自由基以及脂質(zhì)過氧化作用為主要原因，犀角地黃湯能夠發(fā)揮抑制作用，進而降低肝損傷程度。水牛角苦寒咸，可清心火，并具有解毒作用。中醫(yī)認(rèn)為心火得以清之，則身體諸經(jīng)絡(luò)之火均可自平，是以將其作為君藥。生地黃有涼血以及滋陰液等功效，其能夠?qū)ο瞧鸬絽f(xié)助作用，進而幫助其獲得解血分熱毒功效，同時生地黃還能夠提高止血效果，因此其為輔藥。而芍藥能夠和營泄熱，同時牡丹皮可以涼血散瘀，其二者可共同為犀角以及生地黃進行協(xié)助，提升解毒化斑等效果，其二者同屬佐使藥[13]。以上4藥合用所組犀角地黃湯方劑，發(fā)揮清熱解毒以及涼血散瘀至功效。需要指出的是，蔣華等[14-15]雖報道犀角地黃湯對大鼠而言具有一定的肝保護作用，但并未深入分析各指標(biāo)之間的關(guān)系，本文依據(jù)Spearman法分析相關(guān)性可知，膿毒癥大鼠ALT及AST水平與NO、MDA及iNOS均呈正相關(guān)，而與SOD呈負(fù)相關(guān)。這再次證實膿毒癥大鼠的肝功能損害與其肝功能指標(biāo)聯(lián)系緊密，也表明了監(jiān)測ALT及AST指標(biāo)能夠在一定程度上反饋出肝功能損害的情況。

綜上所述，犀角地黃湯對膿毒癥大鼠具有較好的肝保護作用，對于大鼠的肝功能及炎性反應(yīng)癥狀存在較好的改善效果。

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(2016-09-29收稿 責(zé)任編輯：張文婷)

Analysis on Influence of Xijiao Dihuang Decoction on Hepatic Protection in rats with sepsis

Zhu Lichao, Bi Xia, Zhang Jin

(TheThirdAffiliatedHospitalofLiaoningUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shenyang110000,China)

Objective:To study the influence of Xijiao Dihuang decoction on liver-protection in rats with sepsis. Methods:A total of 90 SPF SD rats were selected in the laboratory of our hospital in September 2016, they were randomly divided into 3 groups, the observation group (sepsis model rats with Xijiao Dihuang decoction treatment), model group (sepsis model rats), as well as sham operation group. There were 30 rats in each group. Liver function, inflammatory marker levels, nitric oxide (NO), malondialdehyde (MDA), inducible nitric oxide synthase (iNOS) and superoxide dismutase (SOD) in liver homogenate were compared among three groups 8 h and 16 h after surgery respectively. Besides, correlation between alanine aminotransferase(ALT) level as well as aspartate aminotransferase (AST) level and NO, MDA, iNOS, SOD was analized. Results:ALT, AST, tumor necrosis factor alpha (TNF-α) and interleukin-6 (IL-6) levels in the observation group and model group were significantly higher than those in sham operation group both after surgery 8 h and 16 h, the difference was statistically significant (P<0.05). The results in the observation group were significantly higher than those in model group, the difference was statistically significant (P<0.05) The iNOS and NO levels in the observation group and the model group were significantly higher than those in the sham operation group after 8 h and 16 h, while the SOD level was significantly lower than that in the sham operation group 16 h later the operation, the MDA level was higher than that in sham operation group, there was significantly difference. (P<0.05). The iNOS and NO levels in the observation group were significantly lower than those in the model group, MDA level after 16 h was significantly higher than that in model group, the level of SOD was significantly higher than that in model group, and the difference was statistically significant (P<0.05). According to the correlation analyzed by Spearman method, the levels of ALT and AST in septic rats were positively correlated with iNOS, MDA and NO, but negatively correlated with SOD. Conclusion:Xijiao Dihuang decoction is effective on liver in sepsis rats, and the symptoms of liver function and inflammation in rats really improves.

Xijiao Dihuang decoction; Sepsis rats; Hepatic protection; Influence

遼寧省科技廳科技計劃項目(2012225018) 作者簡介：祝麗超(1978.06—)女，本科，中級中藥師，研究方向：中藥學(xué)，E-mail：1754698982@qq.com

R285.5

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10.3969/j.issn.1673-7202.2017.08.038