徐雅琴，王躍鵬，牛小杰，倪耀成，王麗波*，楊 昱，周 濤

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030）

黑穗醋栗果實(shí)多糖的制備、結(jié)構(gòu)鑒定及生物活性研究

徐雅琴，王躍鵬，牛小杰，倪耀成，王麗波*，楊 昱，周 濤

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030）

以黑穗醋栗果實(shí)為原料，采用超聲波法提取黑穗醋栗果實(shí)粗多糖。利用大孔樹脂D4006，陰離子交換劑Q-Sepharose FF和葡聚糖凝膠Sephadex G-100對(duì)粗多糖進(jìn)行分離純化，得到均一黑穗醋栗多糖（black currant polysaccharide，BCP）。高效液相色譜法測(cè)定BCP的重均分子質(zhì)量為16 329 kD。氣相色譜法測(cè)定BCP單糖組成及物質(zhì)的量比為：n（半乳糖醛酸）∶n（鼠李糖）∶n（阿拉伯糖）∶n（木糖）∶n（甘露糖）∶n（葡萄糖）∶n（半乳糖）＝0.31∶0.66∶1.63∶0.36∶0.23∶0.31∶1.00。傅里葉變換紅外光譜分析表明BCP含有多糖的特征吸收峰，紫外光譜和定性實(shí)驗(yàn)表明BCP不含花色苷、蛋白質(zhì)、核酸和淀粉。剛果紅實(shí)驗(yàn)表明BCP不具有三螺旋結(jié)構(gòu)。生物活性研究結(jié)果表明：在0.2～1.2 mg/mL范圍內(nèi)，BCP對(duì)1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基、?OH、超氧陰離子自由基（O2-?）均有較明顯的清除作用，隨著質(zhì)量濃度增大，清除率明顯升高。BCP對(duì)糖基化反應(yīng)3 個(gè)階段產(chǎn)物（Amadori產(chǎn)物、二羰基化合物和糖基化終產(chǎn)物）的形成均表現(xiàn)出良好的抑制作用，抑制率高于陽(yáng)性對(duì)照氨基胍，且隨質(zhì)量濃度的增加，抑制率升高。BCP對(duì)α-淀粉酶具有一定的抑制活性，但抑制效果低于陽(yáng)性對(duì)照阿卡波糖。

黑穗醋栗果實(shí)；多糖；提取分離；結(jié)構(gòu)表征；生物活性

多糖是一類生物大分子物質(zhì)，廣泛分布于自然界，具有重要的生理活性[1-3]，且對(duì)機(jī)體幾乎無(wú)毒性。近年來(lái)，多糖已逐漸成為當(dāng)前關(guān)注焦點(diǎn)和研究熱點(diǎn)。研究較多地集中在藥用植物多糖和真菌多糖[4]，而對(duì)于日常食用的果蔬中含有的多糖的研究相對(duì)較少。

黑穗醋栗（Ribes nigrum L.），又名黑加侖、黑豆果、黑夏果，屬虎草科（Saxifragace）茶麓子屬（Ribes），起源于亞洲北部和歐洲，是多年生小灌木，在我國(guó)種植區(qū)主要分布在黑龍江、吉林、遼寧、新疆等地。黑穗醋栗果實(shí)含有豐富的花色苷、黃酮、多糖、維生素等多種活性物質(zhì)[5-6]，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血壓、降血脂等活性[7]。在亞洲和歐洲，黑穗醋栗果實(shí)和葉片已作為中藥，用于治療多種疾病[8]。目前對(duì)于黑穗醋栗果實(shí)活性物質(zhì)研究主要集中在花色苷、黃酮等組分[9]，對(duì)于黑穗醋栗果實(shí)多糖研究報(bào)道較少。已有研究表明黑穗醋栗果實(shí)多糖是重要的活性成分，具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎等活性，并且黑穗醋栗果實(shí)中含有不同組分的多糖，提取方法不同得到的多糖組分也不同[10]。目前對(duì)于黑穗醋栗果實(shí)多糖的研究主要集中在粗多糖提取及活性研究[11]。本課題組前期研究結(jié)果表明，超聲波法提取黑穗醋栗果實(shí)粗多糖體外具有清除自由基和降血糖的功效[12]。本實(shí)驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上，通過(guò)超聲波法提取得到粗多糖，采用色譜方法純化，制備均一多糖，利用儀器分析方法對(duì)多糖結(jié)構(gòu)初步表征，并且研究均一多糖體外清除自由基和降血糖活性。為深入開展黑穗醋栗果實(shí)多糖生物活性及構(gòu)效關(guān)系的研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

黑穗醋栗（黑豐）果實(shí) 黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院牡丹江農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所。

3,5-二硝基水楊酸 西昊精細(xì)化工有限公司；大孔吸附樹脂D4006 南開大學(xué)化工廠；Q-Sepharose FF杭州費(fèi)樂爾生物科技有限公司；Sephadex G-100 瑞典Pharmacia公司；D-半乳糖醛酸 上海源葉生物科技有限公司；葡聚糖T-10、T-40、T-70、T-110、T-2000北京拜爾迪生物公司；D-葡萄糖、D-半乳糖、D-鼠李糖美國(guó)Sigma公司；α-淀粉酶 北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任公司。

1.2 儀器與設(shè)備

JY92-2D超聲波細(xì)胞粉碎機(jī) 寧波新芝生物科技股份有限公司；TU-1901雙光束紫外-可見分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；FTS135型傅里葉變換紅外光譜儀 美國(guó)Bio-Rad公司；LC-10AVP高效液相色譜儀、氣相色譜儀 日本Shimadzu公司。

1.3 方法

1.3.1 黑穗醋栗果實(shí)多糖的制備

稱取一定量黑穗醋栗果實(shí)勻漿，按液料比20∶1（V/m）加入去離子水，超聲功率400 W，超聲波提取25 min，提取液過(guò)濾、濃縮，用4 倍體積的無(wú)水乙醇沉淀，于4 ℃冰箱靜置過(guò)夜，所得沉淀凍干，得到粉紅色黑穗醋栗果實(shí)粗多糖。

選取大孔樹脂D4006對(duì)黑穗醋栗果實(shí)粗多糖進(jìn)行初步純化，上樣質(zhì)量濃度4.00 mg/mL，洗脫流速1.0 mL/min，洗脫劑為去離子水，所得多糖溶液濃縮、凍干。將該多糖配制成20 mg/mL溶液，利用陰離子交換劑Q-Sepharose FF（2.0 cm×30 cm）進(jìn)一步分離，上樣量為5.00 mL，洗脫流速2.00 mL/min，洗脫劑為去離子水。苯酚-硫酸法跟蹤檢測(cè)，收集多糖洗脫液，濃縮凍干。將得到的多糖配制成15 mg/mL溶液，再利用葡聚糖凝膠Sephadex G-100（1.8 cm×40 cm）分離純化，上樣量為1.00 mL，洗脫流速0.60 mL/min，洗脫劑為去離子水，每1.00 mL為一管，收集洗脫液，苯酚-硫酸法跟蹤檢測(cè)至無(wú)糖檢出。分別以洗脫管數(shù)（個(gè)）和吸光度為橫縱坐標(biāo)來(lái)繪制曲線。收集多糖主要組分，凍干，命名為（black currant polysaccharide，BCP），苯酚-硫酸法測(cè)其純度。1.3.2 BCP的理化性質(zhì)測(cè)定

BCP加于去離子水、乙醇、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、氯仿等溶劑中，觀察其溶解性。BCP化學(xué)特性測(cè)定利用茚三酮實(shí)驗(yàn)、碘-碘化鉀實(shí)驗(yàn)、菲林試劑反應(yīng)、三氯化鐵反應(yīng)。糖醛酸含量通過(guò)咔唑-硫酸法測(cè)定[13]。

1.3.3 BCP的分子質(zhì)量測(cè)定

1.3.3.1 色譜條件

高效液相色譜儀；色譜柱：Ultrahydroge 2000（7.8 mm×300 mm，2 000 ?）；洗脫劑：超純水；檢測(cè)器：RID-10A示差折光檢測(cè)器；數(shù)據(jù)處理工作站：Shimadzu CLASS-Vp；進(jìn)樣量：10 μL；流速：1.0 mL/min，壓力：2.3 MPa。

1.3.3.2 分子質(zhì)量測(cè)定

精密稱取各葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品（T-10、T-40、T-70、T-110、T-2000）及多糖BCP配制成2.0 mg/mL溶液，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣，體積10 μL，測(cè)定色譜峰保留時(shí)間，GPC分析軟件計(jì)算得到多糖分子質(zhì)量。

1.3.4 BCP單糖組成分析

1.3.4.1 色譜條件

石英毛細(xì)管色譜柱；檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器（flame ionization detector，F(xiàn)ID）；程序升溫：180 ℃（5 ℃/min）至220 ℃（保持5 min），220 ℃（10 ℃/min）至280 ℃（保持20 min）；氣化溫度280 ℃；檢測(cè)器280 ℃；載氣：高純氮?dú)狻?/p>

1.3.4.2 BCP的單糖組成分析

按照聶永心等[14]的方法，將多糖BCP進(jìn)行酸水解和衍生化后進(jìn)樣，各單糖標(biāo)準(zhǔn)品也進(jìn)行衍生化后混合進(jìn)樣，氣相色譜儀進(jìn)行分析檢測(cè)（肌醇作為內(nèi)標(biāo)），計(jì)算BCP的單糖組成。

1.3.5 BCP的傅里葉變換紅外光譜和紫外光譜分析

采用溴化鉀壓片法，在4 000～500 cm-1波數(shù)范圍內(nèi)進(jìn)行傅里葉變換紅外光譜掃描，鑒定主要官能團(tuán)。用去離子水將多糖BCP配成0.5 mg/mL的溶液，采用雙光束紫外-可見分光光度計(jì)在波長(zhǎng)190～550 nm范圍內(nèi)進(jìn)行光度掃描。

1.3.6 剛果紅實(shí)驗(yàn)

[15]的方法，將BCP和剛果紅試劑配制成不同濃度NaOH溶液，紫外-可見光譜掃描，測(cè)量樣品溶液的最大吸收波長(zhǎng)。

1.3.7 BCP的生物活性研究

1.3.7.1 BCP清除自由基活性測(cè)定

按照文獻(xiàn)[16-18]方法，測(cè)定不同質(zhì)量濃度（0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20 mg/mL）BCP溶液的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine，DPPH）自由基清除能力、?OH清除能力、O2-?清除能力，以VC為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3.7.2 BCP抗糖基化反應(yīng)活性測(cè)定

參考文獻(xiàn)[17]的方法，建立牛血清白蛋白-葡萄糖糖基化反應(yīng)體系，以氨基胍作為陽(yáng)性對(duì)照，測(cè)定不同質(zhì)量濃度（0.40、0.20、0.05 mg/mL）BCP溶液對(duì)Amadori產(chǎn)物、二羰基化合物、糖基化終產(chǎn)物（advanced glycation end products，AGEs）的抑制作用。

1.3.7.3 BCP對(duì)α-淀粉酶抑制活性測(cè)定

根據(jù)文獻(xiàn)[19]的方法，測(cè)定不同質(zhì)量濃度（0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、2.00、4.00 mg/mL）BCP溶液對(duì)α-淀粉酶溶液的抑制活性，以阿卡波糖作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.4 數(shù)據(jù)處理

所有實(shí)驗(yàn)均進(jìn)行3 次重復(fù)，數(shù)據(jù)均以表示。SPSS軟件進(jìn)行差異顯著性分析，以P＜0.05作為顯著性差異標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 BCP的制備

圖1 BCP的洗脫曲線Fig. 1 Elution curve of BCP

超聲波法得到的黑穗醋栗果實(shí)多糖粗提物，經(jīng)過(guò)大孔樹脂、陰離子Q-Sepharose FF和葡聚糖凝膠Sephadex G-100純化后，得到主要組分BCP，洗脫曲線見圖1。洗脫峰為單一吸收峰，峰形狹窄并對(duì)稱，且無(wú)拖尾現(xiàn)象，說(shuō)明BCP為均一組分，苯酚-硫酸法測(cè)其純度為（90.70±1.25）%。

2.2 BCP的理化性質(zhì)

BCP外觀為白色疏松狀（棉花糖狀）固體，易溶于水，難溶于乙醇、乙醚、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑。BCP與茚三酮反應(yīng)呈陰性，表明不含有氨基酸、蛋白質(zhì)；與碘-碘化鉀試劑作用后不顯藍(lán)色，表明不含淀粉；與三氯化鐵反應(yīng)呈陰性，表明不含多酚類物質(zhì)；與菲林試劑反應(yīng)后，無(wú)磚紅色沉淀氧化亞銅生成，表明不含有游離還原糖。硫酸-咔唑法測(cè)定BCP中糖醛酸含量為（20.72±0.72）%。

2.3 BCP分子質(zhì)量

圖2 BCP的高效液相色譜圖Fig. 2 HPLC chromatogram of BCP

由圖2可知，保留時(shí)間TR為8.558 min，GPC分析軟件分析得到BCP的重均分子質(zhì)量mw為16 329 kD，數(shù)均分子質(zhì)量mn為14 439 kD，mw/mn為1.131，表明分子質(zhì)量分布均一且較為集中。

2.4 BCP的單糖組成

圖3 單糖標(biāo)準(zhǔn)品（a）和BCP（b）的氣相色譜圖Fig. 3 GC prof i les of mixed monosaccharide standards (a) and BCP (b)

在相同色譜條件下，保留時(shí)間可作為定性分析的依據(jù)，通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)單糖的保留時(shí)間相比較，可確定多糖樣品中的單糖組分。各標(biāo)準(zhǔn)品和BCP的氣相色譜圖見圖3。

依據(jù)保留時(shí)間和峰面積，分析計(jì)算得到BCP是由7 種單糖組成的雜多糖，各單糖組成的物質(zhì)的量比為：n（半乳糖醛酸）∶n（鼠李糖）∶n（阿拉伯糖）∶n（木糖）∶n（甘露糖）∶n（葡萄糖）∶n（半乳糖）＝0.31∶0.66∶1.63∶0.36∶0.23∶0.31∶1.00。

2.5 BCP傅里葉變換紅外光譜和紫外光譜分析

圖4 BCP的紅外光譜圖Fig. 4 Fourier transform infrared spectrum of BCP

紅外光譜如圖4所示，BCP在4 000～500 cm-1范圍內(nèi)具有明顯的多糖特征吸收峰。3 418.56 cm-1處和2 974.26 cm-1處分別為O—H的伸縮振動(dòng)峰和C—H伸縮振動(dòng)峰，1 733.36 cm-1為酯化羰基C＝O伸縮振動(dòng)峰[20]，1 608.23 cm-1處為酯化羧基COO-的伸縮振動(dòng)峰，此外在1 418.32 cm-1處有吸收峰，表明BCP中含有糖醛酸，這與硫酸-咔唑測(cè)定結(jié)果一致。1 100～1 010 cm-1范圍內(nèi)存在3 個(gè)吸收峰，表明BCP為吡喃糖[21]。914.92 cm-1處和826.50 cm-1處均有吸收峰，表明存在吡喃環(huán)α-和β-兩種端基差向異構(gòu)體[22-23]。

圖5 BCP的紫外光譜圖Fig. 5 Ultraviolet spectrum of BCP

紫外光譜掃描結(jié)果如圖5，BCP僅在201 nm波長(zhǎng)處有多糖的紫外末端吸收峰。在260、280 nm波長(zhǎng)處無(wú)吸收，表明不含蛋白質(zhì)、核酸、花色苷[24]。

2.6 BCP剛果紅實(shí)驗(yàn)結(jié)果

BCP與在不同濃度NaOH溶液條件下剛果紅復(fù)合物最大吸收波長(zhǎng)λmax的變化如圖6。在一定NaOH濃度范圍內(nèi)，BCP與剛果紅混合溶液與對(duì)照溶液的λmax變化相近，表明多糖BCP不具有三股螺旋結(jié)構(gòu)[25]。

圖6 不同NaOH濃度條件下BCP與剛果紅絡(luò)合物λmax的變化Fig. 6 Effect of NaOH concentration on maximum absorption wavelength (λmax) of Congo red-BCP complex

2.7 BCP清除自由基活性

圖7 BCP及VC對(duì)DPPH自由基（a）、?OH（b）、的清除作用Fig. 7 Scavenging effects of BCP and VC on radical DPPH (a), hydroxyl (b) and superoxide anion (c) radicals

由圖7a可以看出，BCP具有較強(qiáng)的清除DPPH自由基的能力，在質(zhì)量濃度為1.2 mg/mL時(shí)，清除率最大，為（91.01±2.41）%，與陽(yáng)性對(duì)照VC（95.91±0.39）%接近，半抑制濃度（half maximal inhibitory concentration，IC50）為0.22 mg/mL。

由圖7b可知，BCP具有一定清除?OH的能力，最高清除率為（58.48±4.24）%，IC50為1.11 mg/mL；弱于同等質(zhì)量濃度下的VC清除能力，VC最高清除率達(dá)到（90.66±1.37）%，其IC50為0.33 mg/mL。

圖7c結(jié)果表明，多糖具有較明顯的清除O2-?的能力。BCP和VC最高清除率分別為（77.50±3.37）%和（87.74±0.18）%，IC50分別為0.64 mg/mL和0.30 mg/mL。

綜上所述，多糖BCP對(duì)DPPH自由基、?OH、O2-?均有一定的清除作用。目前關(guān)于多糖清除自由基的活性機(jī)理還處于探討階段，可能的機(jī)理主要有以下兩大類型：1）多糖分子直接作用于自由基。多糖中含有活性羥基提供活潑氫（?H），可以和自由基結(jié)合生成穩(wěn)定的化合物，起到清除自由基的作用[26]。2）多糖分子間接作用于自由基。一是通過(guò)提高體內(nèi)超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）等抗氧化酶的活性，減少體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化，達(dá)到抑制自由基的目的[27]；二是多糖分子絡(luò)合產(chǎn)生活性自由基所必需的金屬離子，如Fe2+、Cu2+等，使?OH、O2-?等的產(chǎn)生受到抑制[28]。對(duì)黑穗醋栗果實(shí)多糖清除自由基的活性機(jī)理鮮見報(bào)道，有待于進(jìn)一步深入探討。

2.8 BCP抗糖基化能力

蛋白質(zhì)游離氨基與還原糖的羰基經(jīng)過(guò)一系列反應(yīng)可以產(chǎn)生穩(wěn)定的AGEs，AGEs在糖尿病患者體內(nèi)蓄積，可引起多種慢性糖尿病并發(fā)癥。糖基化反應(yīng)主要包括反應(yīng)初期Amodori產(chǎn)物形成階段、反應(yīng)中期二羰基化合物形成階段和反應(yīng)末期終產(chǎn)物AGEs形成階段。能抑制任何過(guò)程的抑制劑可以減輕AGEs的形成，有利于治療糖尿病的慢性并發(fā)癥[29]。

2.8.1 BCP對(duì)Amadori產(chǎn)物形成的影響

圖8 BCP和氨基胍抗糖基化作用Fig. 8 Antiglycated activities of BCP and aminoguanidine

由圖8a可知，在0～13 d內(nèi)，不同質(zhì)量濃度的多糖在糖基化體系中，對(duì)Amadori產(chǎn)物的產(chǎn)生都有一定抑制作用，而且隨著多糖質(zhì)量濃度的增加抑制作用逐漸增加。0.40、0.20、0.05 mg/mL BCP對(duì)Amadori產(chǎn)物最大抑制率分別為（42.82±1.14）%、（39.19±0.99）%、（29.64±0.81）%；而氨基胍的最大抑制率分別為（26.53±0.98）%、（20.34±1.10）%和（16.92±0.92）%。BCP對(duì)Amadori產(chǎn)物的抑制效果明顯高于陽(yáng)性對(duì)照氨基胍。

BCP和氨基胍對(duì)二羰基化合物生成的抑制作用如圖8b所示。在1～7 d，BCP和氨基胍對(duì)二羰基化合物的抑制作用較平穩(wěn)，7 d后，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制效果逐漸增強(qiáng)。在第15天，抑制率達(dá)到最大，且質(zhì)量濃度越高，抑制作用越強(qiáng)。當(dāng)質(zhì)量濃度為0.40 mg/mL時(shí)，BCP最大抑制率為（73.24±0.99）%，高于陽(yáng)性對(duì)照氨基胍（63.41±0.99）%。

BCP和氨基胍對(duì)糖基化終產(chǎn)物AGEs的抑制作用見圖8c。在1～7 d，多糖BCP對(duì)AGEs的抑制作用較平穩(wěn)；7～13 d，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，對(duì)AGEs的抑制效果逐漸增強(qiáng)；13 d后，抑制效果趨于穩(wěn)定。高質(zhì)量濃度的BCP或氨基胍對(duì)AGEs的抑制作用較低質(zhì)量濃度的抑制效果明顯，且BCP的抑制作用強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照氨基胍。在質(zhì)量濃度為0.40 mg/mL時(shí)，BCP和氨基胍最大抑制分別為（76.84±0.95）%、（53.63±0.93）%。

上述結(jié)果可知BCP對(duì)糖基化反應(yīng)3 個(gè)階段產(chǎn)物的形成均表現(xiàn)出良好的抑制作用，且效果要優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照氨基胍。此外，多糖BCP對(duì)反應(yīng)中期二羰基化合物和末期AGEs終產(chǎn)物的抑制率均高于對(duì)反應(yīng)初期Amadori產(chǎn)物的抑制率，表明多糖BCP對(duì)蛋白質(zhì)非酶糖基化反應(yīng)的抑制作用主要發(fā)生在反應(yīng)中期和反應(yīng)末期。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果與陽(yáng)性對(duì)照組氨基胍的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。綜上所述，黑穗醋栗果實(shí)多糖可作為較好的糖基化反應(yīng)抑制劑。

2.9 多糖BCP對(duì)α-淀粉酶活性抑制實(shí)驗(yàn)

α-淀粉酶抑制劑能有效抑制唾液淀粉酶和胰液淀粉酶活性，阻礙食物中碳水化合物的代謝，降低機(jī)體的血糖和血脂水平，防止餐后高血糖的發(fā)生，對(duì)于預(yù)防并改善糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展有重要作用[30]。

圖9 BCP對(duì)α-淀粉酶的抑制作用Fig. 9 Inhibitory effect of BCP on the activity of α-amylase

BCP和阿卡波糖對(duì)α-淀粉酶活性的抑制作用如圖9所示。在0.0～1.2 mg/mL范圍內(nèi)，二者對(duì)α-淀粉酶的抑制率迅速增大，且清除作用均表現(xiàn)出劑量依賴關(guān)系。在1.2～4.0 mg/mL范圍內(nèi)，抑制率變化不明顯，基本趨于穩(wěn)定。BCP和阿卡波糖最大抑制率分別為（36.67±1.10）%和（62.07±1.67）%。可見BCP對(duì)α-淀粉酶具有一定的抑制作用，但抑制效果不如阿卡波糖。

3 結(jié) 論

多糖BCP是均一組分的雜多糖，重均分子質(zhì)量為16 329 kD，單糖組成及物質(zhì)的量比為：n（半乳糖醛酸）∶n（鼠李糖）∶n（阿拉伯糖）∶n（木糖）∶n（甘露糖）∶n（葡萄糖）∶n（半乳糖）＝0.31∶0.66∶1.63∶0.36∶0.23∶0.31∶1.00。BCP具有多糖的特征吸收，不含蛋白、核酸和多酚類物質(zhì)，不具有三股螺旋結(jié)構(gòu)。多糖BCP對(duì)DPPH自由基、?OH、O2-?均有明顯的清除作用；對(duì)糖基化反應(yīng)3 個(gè)階段產(chǎn)物的形成均表現(xiàn)出良好的抑制作用，效果強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照氨基胍；對(duì)α-淀粉酶活性有一定的抑制活性，但抑制效果弱于陽(yáng)性對(duì)照阿卡波糖。

參考文獻(xiàn)：

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Preparation, Structural Identif i cation and Bioactivities of Polysaccharides from Black Currant Fruits

XU Yaqin, WANG Yuepeng, NIU Xiaojie, NI Yaocheng, WANG Libo*, YANG Yu, ZHOU Tao
(College of Science, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China)

A homogeneous polysaccharide (BCP) from black currant fruits was obtained by ultrasound-assisted extraction followed by successive purif i cation using macroporous resin D4006, anion-exchange Q-Sepharose FF and Sephadex G-100 columns. The molecular weight of BCP was determined as 16 329 kD by HPLC. BCP consisted of galacturonic acid, rhamnose, arabinose, xylose, mannose, glucose, and galactose at a molar ratio of 0.31:0.66:1.63:0.36:0.23:0.31:1.00 as determined by gas chromatography (GC). Fourier transform infrared (FTIR) spectra revealed that BCP had the characteristic absorption peaks of polysaccharides. Qualitative tests and UV spectra indicated the absence of protein, nucleic acid, starch, and pigment. Congo red test showed that BCP lacked triple helix structure. In the concentration range of 0.2–1.2 mg/mL, BCP presented high scavenging activities toward 1,1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine (DPPH), hydroxyl, superoxide anion radicals in a concentration-dependent manner. BCP exhibited a signif i cant ability to inhibit the formation of glycation products at three stages which was in a concentration-dependent manner and higher than that of the control aminoguanidine. Moreover, BCP showed inhibitory activity against α-amylase lower than that of the control acarbose.

black currant fruit; polysaccharides; extraction and separation; structure characterization; biological activities

10.7506/spkx1002-6630-201715002

TS218

A

1002-6630（2017）15-0007-07

徐雅琴, 王躍鵬, 牛小杰, 等. 黑穗醋栗果實(shí)多糖的制備、結(jié)構(gòu)鑒定及生物活性研究[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(15): 7-13.

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201715002. http://www.spkx.net.cn

XU Yaqin, WANG Yuepeng, NIU Xiaojie, et al. Preparation, structural identif i cation and bioactivities of polysaccharides from black currant fruits[J]. Food Science, 2017, 38(15): 7-13. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201715002. http://www.spkx.net.cn

2016-06-29

國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（31600276）；黑龍江省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（C2015004）；黑龍江省SITP計(jì)劃項(xiàng)目（201610224112）

徐雅琴（1964—），女，教授，碩士，主要從事天然產(chǎn)物提取及活性研究。E-mail：xu-yaqin@163.com

*通信作者：王麗波（1979—），女，副教授，博士，主要從事天然產(chǎn)物提取及活性研究。E-mail：wanglibo99166@163.com