李芳，田明，國紫薇，高士平，賈靜麗，姚麗琴

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

中 藥 研 究

大黃煎煮提取主要成分含量變化規(guī)律研究

李芳，田明*，國紫薇，高士平，賈靜麗，姚麗琴

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

目的：對大黃水煎煮提取游離蒽醌、結(jié)合性蒽醌和鞣質(zhì)類成分含量的變化規(guī)律進(jìn)行研究。方法：采用分光光度法，測定大黃不同煎煮時(shí)間游離蒽醌、結(jié)合蒽醌和鞣質(zhì)成分的含量。結(jié)果：隨著大黃煎煮時(shí)間的延長，蒽醌類和鞣質(zhì)成分含量均逐漸增加，120 min左右達(dá)峰值。結(jié)論：大黃久煎后，結(jié)合蒽醌含量較穩(wěn)定，鞣質(zhì)含量增加。

大黃；蒽醌；鞣質(zhì)；含量測定

大黃味苦性寒，具有瀉下導(dǎo)滯，清熱瀉火的功效，是臨床常用中藥。大黃中主要含有蒽醌類、鞣質(zhì)類等多種成分[1-2]。研究表明，蒽醌類是大黃瀉下作用的主要有效成分，其中結(jié)合型蒽醌作用最強(qiáng)[3]。但是，對其煎煮時(shí)間與有效成分的溶出有很多不同的認(rèn)識(shí)[4-5]，本文采用紫外-分光光度法，對大黃不同煎煮時(shí)間蒽醌類和鞣質(zhì)類成分含量的變化規(guī)律進(jìn)行研究。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥材與試藥

大黃飲片購自哈爾濱華泰大藥房，經(jīng)鑒定為蓼科植物掌葉大黃(RheumpalmatumL.)的根和根莖。1,8二羥基蒽醌，購自中國醫(yī)藥上?；瘜W(xué)試劑公司；沒食子酸，購自中國藥品生物制品鑒定所。其余試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水。

1.2 儀器

電子天平BSA224S(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52A(上海亞榮生化儀器廠)；UV-1601PC紫外-可見分光光度計(jì)(日本島津公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 大黃不同煎煮時(shí)間樣品的制備

取大黃飲片粉碎成最粗粉，稱取20 g。取水200 mL，置于500 mL雙口圓底燒瓶中，回流加熱至沸騰，加入大黃粗粉，計(jì)時(shí)。分別在10、20、30、40、60、80、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300 min吸取提取液10 mL，并極時(shí)補(bǔ)充等量的水。分別將各取樣點(diǎn)提取液濾過，收集濾液，密封保存。即得大黃17個(gè)不同煎煮時(shí)間點(diǎn)的樣品。

2.2 樣品中蒽醌類成分的含量測定

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取干燥至恒重的1,8-二羥基蒽醌對照品1.05 mg，加甲醇定容在10 mL量瓶中，搖勻，得0.105 mg/mL的對照品溶液。分別精密量取對照品溶液0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL、1.4 mL、1.6 mL置10 mL容量瓶中，1%醋酸鎂甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻。以1%醋酸鎂溶液作為空白對照，在510 nm處測定吸收值[6-7]，以濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，吸收值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=0.042 2X+0.049 4，R2=0.999 4。

結(jié)果表明：1,8-二羥基蒽醌含量在2.10～16.8 μg/mL的范圍內(nèi)與吸收值呈良好線性關(guān)系。

2.2.2 游離蒽醌的含量測定

取2.1項(xiàng)下大黃不同煎煮時(shí)間點(diǎn)的樣品2.0 mL，分別置于分液漏斗中，加入10%鹽酸5 mL，加入三氯甲烷溶液萃取4次，每次10 mL，分取三氯甲烷層，剩余的溶液備用。合并三氯甲烷液，減壓回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙?，定量轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中。從中取2 mL于10 mL量瓶中，加1%醋酸鎂甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻。以1%醋酸鎂溶液作為空白對照，在510 nm處測定吸收值。

2.2.3 結(jié)合蒽醌的含量測定

取2.2.2項(xiàng)下剩余的溶液，加入10%鹽酸溶液5 mL，100 ℃水浴回流1 h，放冷，置分液漏斗中，加入三氯甲烷萃取4次，每次10 mL，分取三氯甲烷層，剩余的溶液備用。合并三氯甲烷液，減壓回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙?，定量轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中。從中取2 mL于10 mL量瓶中，加1%醋酸鎂甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻。以1%醋酸鎂溶液作為空白對照，在510 nm處測定吸收值。

2.3 鞣質(zhì)類成分的含量測定

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱定沒食子酸對照品2.5 mg，加甲醇定容在50 mL量瓶中，制成0.05 mg/mL的溶液。分別精密量取對照品溶液1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL至25 mL棕色量瓶中，加磷鉬鎢酸溶液1.0 mL，再加水11 mL、10 mL、9 mL、8 mL、7 mL，用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻。以隨行溶液為空白，在760 nm處測定吸收值[8-9]，以濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，吸收值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=0.042 4X+0.139，R2=0.999 4。

2.3.2 鞣質(zhì)類含量測定

取2.2.3項(xiàng)下剩余的溶液分別置于50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，得貯備液。精密量取貯備液各2.0 mL，置于25 mL棕色量瓶中，加水10.0 mL，加磷鉬鎢酸溶液1.0 mL，用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻。以隨行溶液為空白，在760 nm處測定吸收值。

2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

以上述實(shí)驗(yàn)測得的吸收度值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別計(jì)算游離蒽醌、結(jié)合蒽醌和鞣質(zhì)相對含量，累積折合計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)每100 mL煎煮液中的總含量。總蒽醌含量是游離蒽醌和結(jié)合蒽醌含量的加和。計(jì)算結(jié)果如表1；不同提取時(shí)間各含量變化曲線如圖1～2。

圖1 大黃不同提取時(shí)間游離蒽醌、結(jié)合蒽醌及總蒽醌含量變化曲線圖

圖2 大黃不同提取時(shí)間鞣質(zhì)含量變化曲線圖

時(shí)間/min游離蒽醌含量結(jié)合蒽醌含量總蒽醌含量鞣質(zhì)總蒽醌含量∶鞣質(zhì)含量106.924.0410.96104.721∶9.6209.804.3614.16159.601∶11.33014.114.7618.87234.401∶12.44016.595.0721.66280.091∶12.96016.835.7022.53303.251∶13.58017.045.7722.81349.781∶15.310017.355.7723.12358.151∶15.512017.515.8623.37383.891∶16.414017.595.9823.57382.891∶16.216017.636.6924.32407.631∶16.718017.666.7924.45466.811∶19.120017.696.8224.51509.031∶20.822017.767.0724.83559.881∶22.524017.837.1224.95574.741∶23.026017.747.2725.01588.611∶23.528017.777.2425.01581.431∶23.230017.967.1125.07583.941∶23.3

3 討論

現(xiàn)代藥學(xué)研究表明：大黃中主要活性成分主要是蒽醌類和鞣質(zhì)，蒽醌類成分是致瀉下作用的主要成分，其中結(jié)合蒽醌作用最強(qiáng)。而鞣質(zhì)確有止瀉作用，長期服用使致瀉作用減弱或致便秘[10]。由上述驗(yàn)結(jié)果可見，隨著大黃煎煮時(shí)間的延長，游離蒽醌和結(jié)合蒽醌的含量逐漸增加，游離蒽醌含量從100 min后趨于平穩(wěn)；結(jié)合蒽醌從160 min后趨于平穩(wěn)；鞣質(zhì)含量至240 min后趨于平穩(wěn)。有些文獻(xiàn)[11-12]或傳統(tǒng)理論認(rèn)為大黃久煎煮結(jié)合蒽醌不穩(wěn)定，易水解生成游離蒽醌而使瀉下作用減弱，所以要后下，短時(shí)間煎煮。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：結(jié)合蒽醌是比較穩(wěn)定的，并沒有水解而使游離蒽醌增加。大黃久煎使鞣質(zhì)含量增加，可能是導(dǎo)致瀉下作用減弱的原因，這還需要藥效學(xué)進(jìn)一步的驗(yàn)證，從大黃總蒽醌和鞣質(zhì)隨煎煮時(shí)間溶出比值來看，大黃后下煎煮20 min以內(nèi)為好。

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Study on Variation Regularity of Main Components in Rhubarb Decocting

LI Fang, TIAN Ming, GUO Zi-wei, GAO Shi-ping, JIA Jing-li, YAO Li-qin

(HeilongjiangUniversityofChineseMedicine,Harbin150040,China)

Objective:To study the contents of free anthraquinone, bound anthraquinone and tannin in water-coction extract. Methods: The contents of free anthraquinone, bond anthraquinone and tannin in rhubarb were determined by spectrophotometry. Results: The contents of anthraquinones and tannins increased gradually with the prolonging decocting time, and reached the peak in about two hours. Conclusion:The content of bound anthraquinone was stable in long-time decoction of rhubarb with increased tannin.

Rhubarb; Anthraquinone; Tannin; Content determination

2016-11-24

2016-12-15

李芳(1992-)，女，碩士研究生，研究方向：中藥新藥研究與開發(fā)。

*通訊作者：田明(1963-)，男，教授，碩士研究生導(dǎo)師，研究方向：中藥新藥研究與開發(fā)。

R284.1

A

1002-2392(2017)04-0062-02