李 林，王望東

(湖北省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 檢驗(yàn)科，湖北 武漢430015)

原發(fā)性肝癌患者血清PCIII、IV-C、LN、HA的表達(dá)

李 林，王望東

(湖北省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 檢驗(yàn)科，湖北 武漢430015)

原發(fā)性肝癌的確切的分子機(jī)制及發(fā)病原因尚未完全明確，迄今為止多數(shù)學(xué)者認(rèn)為其由遺傳和環(huán)境的因素共同作用，并且多個(gè)步驟、多種原因共同作用導(dǎo)致了其發(fā)生并進(jìn)一步進(jìn)展。肝臟纖維化是慢性肝臟炎癥發(fā)展至肝硬化，乃至最后演變?yōu)楦伟┍亟?jīng)的病理變化過(guò)程。肝臟纖維化是指在各種慢性肝臟疾病時(shí)，肝臟細(xì)胞受到各種刺激和炎癥因子的作用，最后導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生壞死，機(jī)體與此同時(shí)發(fā)生了反復(fù)的自我修復(fù)反應(yīng)，出現(xiàn)大量纖維組織的異常增生變化，長(zhǎng)期持續(xù)發(fā)展會(huì)導(dǎo)致肝硬化的進(jìn)一步發(fā)生，最后乃至演變?yōu)樵l(fā)性肝癌。

膠原酶類、細(xì)胞因子和細(xì)胞外基質(zhì)成分是肝臟纖維化的三大類血清學(xué)指標(biāo)，其中相對(duì)常用的為細(xì)胞外基質(zhì)成分。本研究探討了四種細(xì)胞外基質(zhì)成分水平在原發(fā)性肝癌患者和健康對(duì)照組人群中的變化，分別是血清透明質(zhì)酸(HA)、血清III型前膠原(PCIII)、層粘蛋白(LN)、IV型膠原(IV-C)，旨在了解其水平變化與原發(fā)性肝癌及肝功能指標(biāo)的相關(guān)關(guān)系。

細(xì)胞外基質(zhì)成分較為復(fù)雜，而且其升高的機(jī)制也不盡相同，導(dǎo)致其測(cè)定某一種成分不足以正確判斷肝纖維化的嚴(yán)重性及程度，近年來(lái)學(xué)者們開(kāi)始推薦聯(lián)合測(cè)定[1]，建立相關(guān)非創(chuàng)診斷體系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院腫瘤科2014年1月至2016年5月住院的原發(fā)性肝癌患者48例，其中男27例，女21例，平均年齡為46±15歲，其均為通過(guò)手術(shù)或肝臟穿刺活檢病理學(xué)檢查確診，健康正常對(duì)照組為我院體檢中心的健康自愿者52例，其中男29例，女23例，平均年齡為42±17歲。整項(xiàng)研究在原發(fā)性肝癌患者及健康體檢者的知情同意下完成，并經(jīng)過(guò)我院的倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

參與本研究的研究對(duì)象需在空腹(8-14 h無(wú)任何熱量攝入)后，于次日早晨7-9點(diǎn)抽取肘前靜脈血5 ml于EDTA抗凝管中，保存于-20℃的冰箱進(jìn)行備用。血清透明質(zhì)酸(HA)、IV型膠原(IV-C)、Ⅲ型前膠原(PCIII)、層粘蛋白(LN)(試劑來(lái)源:深圳新產(chǎn)業(yè)全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀器配套試劑)檢測(cè)均采用化學(xué)發(fā)光免疫法進(jìn)行測(cè)定。采用全自動(dòng)生化儀器(日本HITACHI公司)檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶(γ-GT)、堿性磷酸酶(ALP)、膽堿醋酶(ChE)、腺苷脫氨酶(ADA)、總膽紅素(TB)、直接膽紅素(DB)、膽汁酸(TBA)、白細(xì)胞(WBC)、血小板(PLT)、AST/ALT、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、蛋白A/G比值(A/G)、甲胎蛋白(AFP)相關(guān)肝功能指標(biāo)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 18.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間臨床變量比較采用不配對(duì)Studentt檢驗(yàn)，肝纖維化指標(biāo)與肝癌相關(guān)性應(yīng)用spearman等級(jí)相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 原發(fā)性肝癌患者組和健康正常對(duì)照組肝功能指標(biāo)(見(jiàn)表1)

原發(fā)性肝癌患者組和健康對(duì)照組t檢驗(yàn)提示年齡、血清AST、血清ALT、堿性磷酸酶、γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶、甲胎蛋白等指標(biāo)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。原發(fā)性肝癌患者組高于健康對(duì)照組。

表1 原發(fā)性肝癌組和健康對(duì)照組肝功能指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果±s)

2.2 患者常見(jiàn)無(wú)創(chuàng)指標(biāo)與肝癌相關(guān)性的單因素相關(guān)分析(見(jiàn)表2)

Spearman等級(jí)相關(guān)分析提示：原發(fā)性肝癌患者人口學(xué)參數(shù)和常見(jiàn)血液指標(biāo)中，除血清ALT、性別外，其他指標(biāo)均與原發(fā)性肝癌有相關(guān)性，其中與γ-GT、PT、CHE、AFP、AST、ALB、PLT、A/G、DB、TB等血液指標(biāo)有顯著相關(guān)性(P<0.01)。

表2 原發(fā)性肝癌與相關(guān)指標(biāo)spearman's rho等級(jí)相關(guān)系數(shù)

表2 原發(fā)性肝癌與相關(guān)指標(biāo)spearman's rho等級(jí)相關(guān)系數(shù)(續(xù))

2.3 原發(fā)性肝癌患者組和健康正常對(duì)照組血清 PCIII、IV-C、LN、HA水平(見(jiàn)表3)

肝纖維化的血清學(xué)指標(biāo)在原發(fā)性肝癌患者組和健康對(duì)照組比較采用不配對(duì)Studentt檢驗(yàn)，存在顯著性差異(P<0.01)。結(jié)果說(shuō)明原發(fā)性肝癌各項(xiàng)肝纖維化血清學(xué)指標(biāo)PCIII、IV-C、LN、HA顯著高于健康正常對(duì)照組。

表3 原發(fā)性肝癌組和健康對(duì)照組PCIII、IV-C、LN、HA檢測(cè)結(jié)果

3 討論

原發(fā)性肝癌高發(fā)地帶位于我國(guó)東南沿海地區(qū)，是我國(guó)地區(qū)較為常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，目前其發(fā)病機(jī)制和發(fā)病原因尚未十分明確。隨著通過(guò)不同檢查手段，實(shí)現(xiàn)了早期診斷，早期治療原發(fā)性肝癌，而且其總體治療效果出現(xiàn)了明顯的提高。甲胎蛋白AFP是一種白蛋白，此種蛋白通常由胚胎干細(xì)胞分泌，但其在出生后兩周的胎兒中，會(huì)發(fā)現(xiàn)AFP從血液中消失，該生化指標(biāo)是到迄今為止最廣泛地被應(yīng)用于早期篩查和診斷原發(fā)性肝癌的。血清AFP水平與分化程度、生物學(xué)特性和腫瘤大小明顯相關(guān)，是反映治療效果和病情變化的較為敏感的指標(biāo)。有大量相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道在原發(fā)性肝癌患者中血清AFP水平早期就會(huì)升高，而且隨著原發(fā)性肝癌的進(jìn)一步進(jìn)展，其AFP水平就會(huì)越高[2]。本研究中原發(fā)性肝癌組AFP水平顯著高于健康對(duì)照組(P<0.01)。

慢性肝炎是由于各種因素導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷，隨之以膠原纖維為主的細(xì)胞外基質(zhì)在肝內(nèi)發(fā)生增生、沉積，最后導(dǎo)致了肝臟纖維化的發(fā)生[3]。正常肝臟細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分有蛋白多糖、層粘蛋白和膠原。HA是一種蛋白多糖，肝臟纖維化的程度被證實(shí)與其血清的含量相一致[4]。慢性肝炎患者的PCIII持續(xù)升高提示了病情向肝硬化發(fā)生了進(jìn)一步進(jìn)展，而其血清含量的降低則預(yù)示了病情有所緩解。在肝臟纖維化早期合成PCIII的速度較快，然而越到晚期其合成速度愈慢，因而PCIII可作為診斷活動(dòng)性纖維化的輔助檢測(cè)指標(biāo)。何云等[5]報(bào)道，PCIII診斷肝硬化的陰性預(yù)測(cè)值在91.3%-93.2%之間，故可作為排除肝硬化的一項(xiàng)輔助檢測(cè)指標(biāo)。IV型膠原含量升高能較為靈敏地反映出來(lái)肝臟纖維化程度的進(jìn)展，可在早期輔助發(fā)現(xiàn)及診斷肝臟纖維化。IV型膠原被相關(guān)學(xué)者證實(shí)能較敏感的反映出來(lái)肝臟纖維化的進(jìn)展程度，隨著病程的進(jìn)展，血清含量中的IV-C膠原逐漸升高。層粘蛋白是一種非膠原性結(jié)構(gòu)蛋白，為基底膜中特有，與門(mén)靜脈壓力和肝臟纖維化活動(dòng)程度呈正相關(guān)，在原發(fā)性肝癌、肝硬化和慢性活動(dòng)性肝炎患者血清中均出現(xiàn)了明顯的升高。LN被證實(shí)也可以反映肝臟纖維化嚴(yán)重程度及其進(jìn)展的過(guò)程。作為細(xì)胞基質(zhì)成分之一的透明質(zhì)酸酶，能較為準(zhǔn)確并靈敏地反映肝細(xì)胞受損狀況和肝臟內(nèi)合成的纖維含量，是肝硬變和肝纖維化檢測(cè)的敏感性指標(biāo)。血清HA在慢性遷延性肝炎、急性肝炎時(shí)被發(fā)現(xiàn)其輕度增高，在慢性活動(dòng)性肝炎患者中其血清含量明顯升高，在肝硬化患者中其血清含量發(fā)生了極度的升高。HA是一種蛋白多糖，肝組織發(fā)生纖維化時(shí)其分泌會(huì)明顯增加，其進(jìn)入體循環(huán)還可通過(guò)側(cè)支分流，同時(shí)其內(nèi)皮細(xì)胞受體相應(yīng)減少，造成其降解減少，因此肝臟纖維化時(shí)，HA變化最大，是反映肝臟纖維化較為敏感的一項(xiàng)生化指標(biāo)[6]。

對(duì)血清 PCIII、IV-C、LN和HA 進(jìn)行聯(lián)合的檢測(cè)在肝纖維化和肝硬化中的研究的報(bào)道相對(duì)較多，在原發(fā)性肝癌中是不是有價(jià)值的報(bào)道比較少見(jiàn)。本文經(jīng)過(guò)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝癌組的PCIII、IV-C、LN和HA相對(duì)于健康對(duì)照組顯著的升高了。PCIII、IV-C、LN和HA既可以反映肝功能的損害程度，也可以反映肝臟纖維化程度，并與血清肝功能ALT、AST、ALP、γ-GT具有顯著的相關(guān)性。本研究顯示肝癌的發(fā)生可能是由于肝細(xì)胞受損導(dǎo)致纖維化和肝功能的損害的共同作用所致。

目前臨床常見(jiàn)輔助檢查指標(biāo)中大多數(shù)指標(biāo)與原發(fā)性肝癌有一定的關(guān)聯(lián)性。這些指標(biāo)包含：①血清透明質(zhì)酸、Ⅲ型前膠原、層粘蛋白、Ⅳ型膠原；②γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、總膽紅素、膽堿酯酶、血小板、直接膽紅素、白細(xì)胞、白蛋白、蛋白A/G比值、甲胎蛋白；③病人年齡。本實(shí)驗(yàn)顯示原發(fā)性肝癌組年齡、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶、γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶、甲胎蛋白等指標(biāo)高于健康對(duì)照組。Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示除血清ALT和性別以外，其他血液生化指標(biāo)均與和原發(fā)性肝癌有相關(guān)性，其中以γ-GT、PT、CHE、AFP、AST、ALB、PLT、A/G、DB、TB等血液生化指標(biāo)相關(guān)性較大(P<0.01)。

這些指標(biāo)參與原發(fā)性肝癌診斷模型的構(gòu)建有其合理性：①病人年齡：慢性肝病病程是時(shí)間累積的結(jié)果，是慢性肝炎活動(dòng)，肝臟纖維化進(jìn)一步進(jìn)展乃至最后演變?yōu)樵l(fā)性肝癌的時(shí)間體現(xiàn)；②白蛋白相對(duì)減少與球蛋白相對(duì)升高導(dǎo)致的蛋白A/G比值降低更能較為直接地反映炎癥活躍程度增加和肝臟合成功能減弱；間接膽紅素增高反映肝臟排泄及和合成功能均受損，直接膽紅素和血清白蛋白反映肝臟合成的功能，其降低反映了肝功能減退，兩者均是肝臟功能受損、纖維化的進(jìn)一步進(jìn)展乃至最后漸變?yōu)樵l(fā)性肝癌的表現(xiàn)。③血小板減少反映了慢性肝臟細(xì)胞遭受破壞，導(dǎo)致纖維化的進(jìn)一步形成，從而造成了門(mén)靜脈系統(tǒng)壓力的增加，脾臟進(jìn)行性腫大，同時(shí)也可能由于肝炎病毒的慢性感染進(jìn)一步抑制了骨髓造血功能。

本研究顯示：選擇血清 HA、LN、IV-C和PCIII四者聯(lián)合檢測(cè)，原發(fā)性肝癌血清 PCIII、IV-C、LN和HA、肝功能指標(biāo)與健康正常對(duì)照組之間比較顯著升高(P<0.01)；此四項(xiàng)血清指標(biāo)與肝癌存在一定的相關(guān)性。因此，血清 PCIII、IV-C、LN和HA可作為診斷肝癌和監(jiān)測(cè)其病情的重要參考指標(biāo)。血清 PCIII、IV-C、LN和HA檢測(cè)的臨床價(jià)值已得到普遍認(rèn)可，被認(rèn)為是判斷肝纖維化或肝硬化較為敏感的檢測(cè)指標(biāo)。血清 PCIII、IV-C、LN和HA與血清肝功能堿性磷酸酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶具有顯著的相關(guān)性。本研究可能系肝臟細(xì)胞受損導(dǎo)致纖維化和肝功能損害共同作用所致。有學(xué)者提出血清HA在慢性肝炎患者人群中診斷明顯肝纖維化、重度肝纖維化與肝硬化的ROC曲線下面積分別為0.75、0.82和0.89。研究支持HA水平可能作為肝纖維化或肝硬化臨床有用的無(wú)創(chuàng)指標(biāo)[7-9]。血清LN在肝臟纖維化及肝硬化時(shí)明顯增加，且肝功能越愈差，其血清水平愈高，提示其可能和晚期的食管靜脈曲張和門(mén)靜脈高壓有關(guān)。在IV-C的合成過(guò)程中，由于其沉積于細(xì)胞外基質(zhì)不需要去除端肽，因此其在血清中的含量變化可能與肝血竇基底膜的更新速度有關(guān)，既往臨床與基礎(chǔ)研究均提示了IV-C在血清中的水平變化和與肝臟炎癥活動(dòng)相關(guān)性較小，卻和門(mén)靜脈高壓、肝臟纖維化程度息息相關(guān)[10]。聯(lián)合多指標(biāo)診斷可以提高診斷的精確度，常見(jiàn)的聯(lián)合指標(biāo)包括HA、LN、PIIIP、IV-C等。研究表明這些組合診斷準(zhǔn)確率在80%以上。

總之，本研究顯示血清PCIII、IV-C、LN和HA和肝功能指標(biāo)水平的改變均與原發(fā)性肝癌有一定的相關(guān)性，聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌有一定的預(yù)測(cè)性。聯(lián)合檢測(cè)可提高預(yù)測(cè)原發(fā)性肝癌的準(zhǔn)確性和可靠性。作為判斷肝纖維化、原發(fā)性肝癌有良好的預(yù)測(cè)作用，無(wú)創(chuàng)傷，重復(fù)性良好，臨床較為實(shí)用。

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1007-4287(2017)08-1358-04

2016-08-24)