盧豐才，彭文暉

(濟(jì)南市長清區(qū)人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，山東 濟(jì)南250399)

抗-HCV、HCV-RNA及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶聯(lián)合檢測在丙型肝炎診斷中的價值

盧豐才，彭文暉

(濟(jì)南市長清區(qū)人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，山東 濟(jì)南250399)

丙型肝炎是由于感染丙型肝炎病毒(hepatic C virus，HCV)所引起的肝臟損害，該病為傳染病，主要通過血液和體液傳播。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計顯示，全球感染HCV的患者約有1.7億[1]，我國HCV感染率為3.2%，嚴(yán)重影響著人類的健康[2]。早期丙型肝炎的臨床表現(xiàn)不十分典型，基本與乙型肝炎相類似，癥狀比較輕，難以早期發(fā)現(xiàn)。但是，與乙肝相比，丙型肝炎早期更加容易出現(xiàn)肝硬化，導(dǎo)致肝癌的發(fā)生，病死率也較高[3]。目前，臨床上主要依靠檢測抗丙型肝炎病毒抗體(抗-HCV)和丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV-RNA)來診斷丙型肝炎，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine amino acid trans-fer，ALT)也是反映肝臟損傷靈敏的指標(biāo)之一。本研究探討了聯(lián)合檢測血清HCV抗體、HCV-RNA以及ALT在早期診斷丙型肝炎中的臨床應(yīng)用價值，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2013年1月至 2016年6月到本院就診的疑似丙型肝炎患者120例。其中男79例，女41例；年齡21-75歲，平均年齡(60.2±11.4)歲。所有患者均排除甲型肝炎、乙型肝炎以及戊型肝炎等其它類型的病毒性肝炎。

1.2 檢測方法

1.2.1 血清HCV-RNA檢測采用美國SLAN Real Time PCR Detection System7300熒光定量檢測儀并應(yīng)用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-RT-PCR)檢測HCV-RNA，試劑購自上海科華生物有限公司，陽性結(jié)果為HCV-RNA超過103IU/ml。

1.2.2 血清抗-HCV檢測采用上海新波生物技術(shù)有限公司ANYTEST型時間分辨熒光分析儀并應(yīng)用免疫熒光法檢測抗-HCV，試劑為原裝配套試劑，按照說明書進(jìn)行操作。陽性為抗-HCV抗體為≧1PEIU/ml，反應(yīng)性為0.04-1.0 PEIU/ml，陰性為0-1.0 PEIU/ml；如果檢測結(jié)果為反應(yīng)性，則再次進(jìn)行檢測，如果結(jié)果仍然為反應(yīng)性，則按陽性結(jié)果計算。

1.2.3 肝功能生化指標(biāo)ALT檢測使用西門子Dimension RxL Max全自動生化分析儀采用雙試劑速率法檢測，試劑購自溫州東甌津瑪生物科技有限公司。ALT超過50 U/L為異常。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 疑似HCV感染者血清HCV-RNA含量與抗-HCV及ALT檢測結(jié)果關(guān)系

120例標(biāo)本中HCV-RNA陽性者75例，陽性率為62.50%；抗-HCV陽性者91例，陽性率為75.83%；ALT異常者63例，異常率為52.50%，三者比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=14.21，P<0.05)。

相關(guān)分析顯示，HCV-RNA含量與抗-HCV陽性率及S/CO值均呈正相關(guān)(r=0.528，r=0.246，P均<0.001)；HCV-RNA含量與ALT異常率呈線性正相關(guān)(r=0.401，P<0.001)；而與ALT的活性值無明顯相關(guān)(r=0.046，P=0.375)，詳見表1。

表1 疑似HCV感染者血清HCV-RNA含量與抗-HCV及ALT檢測結(jié)果關(guān)系

2.2 血清HCV-RNA、抗-HCV與ALT聯(lián)合檢測結(jié)果分析

抗-HCV(+)且HCV-RNA(+)者ALT異常率明顯高于其他三組(P<0.05)?？?HCV(+)且HCV-RNA(+)者ALT的活性值明顯高于抗-HCV(-)且HCV-RNA(-)者、抗-HCV(+)而HCV-RNA(-)者(P<0.05)，但明顯低于抗-HCV(-)而HCV-RNA(+)者(P<0.05)，詳見表2。

表2 血清HCV-RNA、抗-HCV與ALT聯(lián)合檢測結(jié)果分析

3 討論

HCV是導(dǎo)致人類發(fā)生丙型病毒性肝炎(簡稱丙肝)的病原體，當(dāng)機(jī)體感染HCV后，僅有15%-25%的患者可以自動將病毒清除，絕大多數(shù)的患者將轉(zhuǎn)為慢性肝病，進(jìn)而發(fā)展為肝纖維化，部分患者甚至進(jìn)展為肝癌，危及患者的生命[4，5]。因此，早期診斷和治療丙肝可以延緩或終止病情的進(jìn)展，改善患者的預(yù)后。目前，臨床上診斷丙肝的指標(biāo)主要包括抗-HCV，HCV-RNA以及肝功能相關(guān)指標(biāo)的檢測。關(guān)于HCV-RNA載量與抗-HCV定量以及生化指標(biāo)ALT之間的相關(guān)性目前仍然存在著爭議[6]，聯(lián)合檢測HCV感染患者血清中的HCV-RNA載量、抗-HCV以及ALT的活性的報道則更少。

在機(jī)體感染HCV 3-4周內(nèi)，采用生物學(xué)檢測方法可以檢測到抗-HCV，但是，抗體檢測存在著一些不足之處[7-9]，主要有以下幾點(diǎn)：一是由于使用HCV基因重組抗原的質(zhì)量以及各抗原片段包被的比例不同，各試劑生產(chǎn)廠家試劑的靈敏度和特異性也存在著一定的差異，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)差異性；二是HCV-Ab產(chǎn)生存在窗口期，大約為70 d左右，因此，即使是抗-HCV陰性也不能夠排除攜帶HCV且具有傳染性的可能；三是在檢測抗-HCV的免疫熒光法試劑盒中，由于標(biāo)記抗體是廣譜的抗人IgG抗體，或單克隆抗體純度不高等因素，因此，使得檢測的特異性明顯的降低。HCV RNA是HCV的核心成分，檢測HCV RNA被認(rèn)為是診斷HCV感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”[10]。研究表明[11]，當(dāng)機(jī)體感染HCV后，血液中HCV濃度約為102-108/ml，在感染后的第一周即可以在血液中檢測到HCV-RNA。但是，由于感染后的病毒血癥分為三種模式，即持續(xù)性、一過性和間隙性，因此，有時的檢測結(jié)果可以是假陰性。另外，由于某些晚期肝病患者的病毒載量太低，導(dǎo)致無法檢測出，也使得出現(xiàn)陰性的結(jié)果。因此，需要聯(lián)合檢測抗-HCV以及HCV-RNA，來有效的防止窗口期為產(chǎn)生抗體以及抗體產(chǎn)生后的長期存在，導(dǎo)致難以判斷患者是近期感染還是既往感染的缺陷，還可以減少慢性丙肝患者HCV-RNA的間歇性出現(xiàn)導(dǎo)致的誤差，避免漏診和誤診[12]。感染HCV后，肝細(xì)胞受到嚴(yán)重的損害，存在于肝細(xì)胞的胞質(zhì)中的ALT被釋放入血中，導(dǎo)致血清ALT水平的升高。但是，單純檢測ALT也不能完全反映肝組織的損害程度，仍然有44%的HCV RNA陽性患者的ALT水平處于正常水平，但是，肝臟活組織檢查結(jié)果卻顯示有明顯的肝纖維化、肝硬化的病理改變[13，14]。

本次研究結(jié)果顯示，隨著HCV-RNA含量的增加，抗-HCV的陽性率也隨之增加，且ALT的異常率也明顯的升高，相關(guān)分析顯示均呈正相關(guān)(P均<0.001)。說明丙肝患者抗-HCV的變化趨勢以及肝細(xì)胞的損傷程度與HCV病毒載量的變化趨勢均有著一定程度的同步性。但是，HCV-RNA陽性率(62.50%)低于抗-HCV的陽性率(75.83%)(P<0.05)，分析認(rèn)為可能是由于丙型肝炎恢復(fù)期的患者，機(jī)體內(nèi)HCV病毒的復(fù)制減少或消失，導(dǎo)致水平低于檢測下限，但是抗-HCV仍然持續(xù)存在，而HCV-RNA的陽性率(62.50%)高于ALT的異常率(52.50%)(P<0.05)。目前的研究認(rèn)為，HCV的發(fā)病機(jī)制不僅是由于HCV在肝細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，導(dǎo)致肝細(xì)胞受到嚴(yán)重的破壞，還有宿主自身免疫應(yīng)答反應(yīng)所引起的肝細(xì)胞炎癥反應(yīng)和損傷[15]。因此，ALT濃度變化還與患者個體差異、自身免疫功能以及肝細(xì)胞再生等因素有著密切的關(guān)系。在感染HCV的患者中，抗-HCV陽性且HCV-RNA陽性的患者最多，同時，患者的ALT異常率也最高，此種類型的受檢者在臨床上可以確診為HCV感染；而抗-HCV陽性而HCV-RNA陰性的患者可能是由于雖然體內(nèi)HCV-RNA已經(jīng)被清除，但是抗-HCV仍然存在；抗-HCV陰性而HCV-RNA陽性的患者可能是因?yàn)榛颊咛幱诩毙员胃腥镜脑缙?，?HCV處于窗口期，因此，ALT的異常率也最低。

綜上所述，聯(lián)合檢測HCV患者血清中抗-HCV、HCV-RNA載量以及ALT活性濃度可以了解HCV在體內(nèi)的復(fù)制狀況以及肝臟的炎癥狀態(tài)，對提高丙肝的臨床診斷率具有十分重要的臨床意義。

[1]Craxì A,Laffi G,Zignego AL.Hepatitis C virus (HCV) infection:a systemic disease[J].Mol Aspects Med,2008,29(1-2):85.

[2]丁 柳,周 易,宋興勃,等.HCV RNA載量與肝臟組織損傷的關(guān)系[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2011,15(3):481.

[3]李雪蓮,時金艷.HCV感染患者ALT、AST水平與肝癌、肝硬化關(guān)系的研究[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2014,35(21):2977.

[4]Chen SL1,Morgan TR.The natural history of hepatitis C virus (HCV) infection[J].Int J Med Sci,2006,3(2):47.

[5]陳作芬,曹永平.丙肝患者治療前后HCV RNA與抗-HCV 及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平的分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2010,7(12):1175.

[6]臧桂珍,丁 艷,李 君,等.丙型肝炎患者HCV RNA載量與 ALT、TBil及抗HCV IgG的相關(guān)性[J].江蘇醫(yī)藥,2014,40(17):2013.

[7]Kurtz JB,Boxall E,Qusir N,et al.The diagnostic significance of an assay for 'total' hepatitis C core antigen[J].J Virol Methods,2001,96(2):127.

[8]王茉莉,姜 濤,潘 煜,等.HCV感染患者436例丙型肝炎病毒載量與抗-HCV及ALT異常的關(guān)系[J].中國老年學(xué)雜志,2011,31(5):770.

[9]梁愛玲,何瑞芬,杜宗孝.血清HCV-RNA含量與抗-HCV及ALT的相關(guān)性研究[J].寧夏醫(yī)學(xué)雜志,2016,38(10):925.

[10]張英哲,沈哲式,張美蘭,等.丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒核酸含量與丙型肝炎病毒抗體和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的相關(guān)性[J].延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報,2015,38(4):309.

[11]王 燕,竇恒利,徐 軍.酶聯(lián)法抗-HCV和HCV-cAg聯(lián)檢對丙型肝炎實(shí)驗(yàn)室診斷的應(yīng)用價值[J].放射免疫學(xué)雜志,2012,25(3):279.

[12]王江南,陳秀榮,李 健.ELISA法檢測抗-HCV-IgG抗體以及FQ-PCR檢測血清HCV-RNA在丙型肝炎診斷中的應(yīng)用價值[J].廣東醫(yī)學(xué),2015,36(24):7973.

[13]Zechini B,Pasquazzi C,Aceti A.Correlation of serum aminotransferases with HCV RNA levels and histological findings in patients with chronic hepatitis C:the role of serum aspartate transaminase in the evaluation of disease Eur J Gastroenterol Hepatol[J].2004,16(9):891.

[14]彭澤軍.丙型肝炎患者血清中HCV抗體、HCV-RNA、ALT聯(lián)合檢測及臨床意義[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011,29(6):635,662.

[15]尚慧鋒.丙型肝炎患者血清HCV-RNA載量與抗-HCV及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶聯(lián)合檢測的意義[J].臨床醫(yī)藥實(shí)踐,2012,21(10):757.

1007-4287(2017)08-1353-03

盧豐才(1962-)，男，山東省濟(jì)南市人，本科，副主任醫(yī)師，研究領(lǐng)域:醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)。

2016-09-21)