李 琳，陳 志，孫 韜，吳 昊

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院 腎病科，吉林 長(zhǎng)春130021)

CD3+CD4+、CD3+CD8+T細(xì)胞在IgA腎病患者外周血的表達(dá)及臨床意義

李 琳，陳 志，孫 韜，吳 昊*

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院 腎病科，吉林 長(zhǎng)春130021)

IgA腎病(immunoglobin A nephropathy)是最常見的原發(fā)性腎小球腎炎[1],也是導(dǎo)致終末期腎衰竭最常見的原因之一[2]。IgA腎病的病因未明，被認(rèn)為多種免疫細(xì)胞及相關(guān)因子參與了其發(fā)病機(jī)制[3]。

T細(xì)胞亞群主要包括CD3+CD8+的細(xì)胞毒性T 細(xì)胞(cytotoxic T cells，Tc)和CD3+CD4+的輔助性T 細(xì)胞(helper T cells，Th)等[4]，CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞在調(diào)節(jié)宿主免疫中發(fā)揮了重要作用[5，6]。本文擬通過檢測(cè)IgA腎病患者外周血CD3+CD4+T細(xì)胞、CD3+CD8+T細(xì)胞的水平以及CD4+/CD8+的比值，來(lái)反映IgA腎病患者的細(xì)胞免疫狀態(tài)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對(duì)象 研究對(duì)象為2015年3月到2017年3月吉林大學(xué)第一醫(yī)院收治IgA腎病患者26例。所有患者經(jīng)腎穿刺經(jīng)病理明確診斷。所有病例排除了合并有嚴(yán)重感染和自身免疫性疾病，以及既往有惡性腫瘤病史的患者。所有入組病例3個(gè)月內(nèi)未用過激素及免疫抑制劑。 隨機(jī)選擇20 例年齡與性別匹配的健康正常者,均排除心、肝、腎等疾病為對(duì)照組。

1.1.2 試劑和儀器 試劑：CD3 anti-human PE cy7,CD4 anti-human FITC,CD8 anti-human pacific blue均購(gòu)自美國(guó)BD公司，淋巴細(xì)胞分離液Ficoll-Histopaque 1.077購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。儀器：FACS Fortessa 流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本收集 取IgA腎病患者組及健康對(duì)照組清晨空腹靜脈人乙二胺四乙酸(ethylene diamietetraacetic acid，EDTA)抗凝血5 mI,立即輕搖混勻,室溫保存,3 h內(nèi)測(cè)定。

1.2.2 外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)的提取 超凈臺(tái)中，將采到的抗凝血加PBS1∶1混勻。取離心管，每管加5 ml淋巴細(xì)胞分離液。將稀釋的抗凝血沿管壁緩慢勻速加到分離液的上面。將離心管置于水平離心機(jī)，室溫下2 000 rpm，離心20 min。離心結(jié)束后，用毛細(xì)吸管輕輕穿過血漿層至白膜層，沿離心管周緣吸出白膜層細(xì)胞，置于新離心管中。加PBS液，吸管吹打細(xì)胞均勻，室溫1 200 rpm，離心5 min，洗滌2次。用含0.1%BSA的PBS重懸提取的PBMC細(xì)胞。

1.2.3 熒光標(biāo)記細(xì)胞外抗原染色 流式管中每管細(xì)胞數(shù)為5×105，1 650 rpm，離心5 min，棄上清。加入100 μl流式洗液，并加入細(xì)胞表面抗原h(huán)CD3 PE-cy7/hCD4 FITC/hCD8 pacific blue各10 μl?；靹蚝笾?℃避光孵育20 min。冷流式FACS洗液洗滌細(xì)胞2次。棄上清，重懸至500 μl流式洗液中。

1.2.4 流式分析 應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)IgA腎病患者組和健康對(duì)照組外周血中CD3+CD4+T細(xì)胞和CD3+CD8+T細(xì)胞的表達(dá)情況。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用GraphPad Prism 5.0作圖，流式數(shù)據(jù)采用Flowjo分析數(shù)據(jù)并作圖，組別間差異比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 流式分析IgA腎病患者組與健康對(duì)照組CD3+CD4+T細(xì)胞的比例

結(jié)果表明IgA腎病患者外周血CD3+CD4+T細(xì)胞的比例低于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。結(jié)果見表1及圖1。

2.2 流式分析IgA腎病患者組與健康對(duì)照組CD3+CD8+T細(xì)胞的比例

結(jié)果表明IgA腎病患者外周血CD3+CD8+T細(xì)胞的比例高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果見表1及圖1。

2.3 測(cè)定IgA腎病患者組與健康對(duì)照組CD4+/CD8+比值

結(jié)果提示IgA腎病患者外周血CD4+/CD8+比值低于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，結(jié)果見表1。

表1 IgA腎病患者外周血T 細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果比較(%，

Note:**,P<0.01;***,P<0.001

圖1 健康對(duì)照組、IgA腎病患者組CD3+CD4+T細(xì)胞、CD3+CD8+T細(xì)胞及CD4+/CD8+比值的比較**,P<0.01;***,P<0.001

3 討論

IgA腎病為最常見的原發(fā)性腎小球疾病[7],據(jù)統(tǒng)計(jì)，IgA腎病發(fā)生率占全部原發(fā)性腎小球疾病的45%-50%[8]。IgA腎病發(fā)病機(jī)制不明，目前認(rèn)為與免疫因素、基因異常及上呼吸道感染有關(guān)。盡管IgA腎病的發(fā)病機(jī)制尚未闡明，但I(xiàn)gA腎病腎組織中明確有IgA免疫球蛋白沉積，提示與免疫炎癥性反應(yīng)相關(guān)[9]。多種免疫細(xì)胞和相關(guān)細(xì)胞因子參與IgA腎病發(fā)病機(jī)制[10]。

T細(xì)胞亞群是目前臨床上較常用的反映免疫功能狀態(tài)的指標(biāo)，T細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用主要由CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞完成[11]。其中，CD4+T細(xì)胞可協(xié)調(diào)B細(xì)胞分化產(chǎn)生抗體，CD8+T細(xì)胞可抑制抗體的合成及T細(xì)胞增殖，兩者的穩(wěn)態(tài)維持著機(jī)體正常的免疫應(yīng)答[12]。我們檢測(cè)了IgA腎病患者的這兩種T淋巴細(xì)胞亞群，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，IgA腎病患者CD4+T細(xì)胞數(shù)量及CD4+/CD8+比值均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，顯示患病機(jī)體T淋巴細(xì)胞數(shù)量異常，免疫功能低下。此外這也提示了IgA腎病患者容易并發(fā)感染。

綜上，我們認(rèn)為IgA腎病患者外周血的CD4+T細(xì)胞減少而CD8+T細(xì)胞增多，這種T細(xì)胞亞群改變也反映了IgA腎病中免疫功能的紊亂及容易并發(fā)感染。

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本研究受國(guó)家自然科學(xué)基金(81641064)，吉林省省級(jí)產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新專項(xiàng)資金項(xiàng)目(2016C041-2)，吉林省教育廳“十三五”科學(xué)技術(shù)研究規(guī)劃項(xiàng)目(JJKH20170841KJ),吉林省發(fā)改委產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究開發(fā)專項(xiàng)(2015Y036-1)資助

1007-4287(2017)08-1305-02

2017-06-15)

*通訊作者