潘孝成，趙瑞宏，沈?qū)W懷，胡曉苗，戴 銀，周學(xué)利，侯宏艷，張丹俊

（安徽省農(nóng)科院畜牧獸醫(yī)研究所，安徽 合肥 230031）

安徽種豬場(chǎng)仔豬豬瘟免疫效果分析

潘孝成，趙瑞宏，沈?qū)W懷，胡曉苗，戴 銀，周學(xué)利，侯宏艷，張丹俊

（安徽省農(nóng)科院畜牧獸醫(yī)研究所，安徽 合肥 230031）

為了解安徽省種豬生產(chǎn)企業(yè)的仔豬階段豬瘟免疫效果，選擇不同地區(qū)6家種豬場(chǎng)，用ELISA方法，對(duì)其仔豬豬瘟一免和二免后3周左右的抗體水平進(jìn)行了檢測(cè)，并對(duì)其抗體陽(yáng)性率、合格率和離散度等進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示：在仔豬階段，6家豬場(chǎng)均使用傳代細(xì)胞源疫苗實(shí)施兩次豬瘟免疫，首免和二免日齡分別為23～28日齡和49～60日齡。二免后的抗體陽(yáng)性率均達(dá)到較高水平，為81.81%～100%。二免后的抗體合格率均較首免有明顯提高，提升幅度為9.75～50個(gè)百分點(diǎn)，其中5家達(dá)到較高水平，為72.73%～100%，但仍有一家較低，為45.45%。各場(chǎng)抗體離散度稍高，為17.4% ～28.87%。研究結(jié)果將為種豬場(chǎng)乃至其他規(guī)模豬場(chǎng)的豬瘟免疫提供參考和依據(jù)。

豬瘟；種豬場(chǎng)；仔豬；免疫效果

豬瘟（Classical Swine Fever,CSF）是一種急性、高度接觸性傳染病，是目前危害我國(guó)養(yǎng)豬生產(chǎn)的主要傳染病之一。該病1833年首先發(fā)現(xiàn)于美國(guó)的俄亥俄州[1]，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（Office International des Epizooties,OIE）列為必須上報(bào)的傳染病，我國(guó)將其列為一類(lèi)動(dòng)物疫病。弱毒疫苗免疫是目前我國(guó)控制豬瘟的主要手段，在生產(chǎn)中起到了極其重要的作用，但是仍有少部分豬場(chǎng)反映豬瘟免疫沒(méi)有達(dá)到理想的效果。豬瘟病毒可通過(guò)水平傳播，也可通過(guò)垂直傳播，因此種豬群的豬瘟控制就顯得尤為重要。為了解安徽省種豬企業(yè)的豬瘟免疫狀況，2016年3—8月，我們選擇安徽省不同地區(qū)的6家種豬生產(chǎn)企業(yè)，對(duì)其仔豬豬瘟一免和二免后3周左右的抗體水平進(jìn)行了抽樣檢測(cè)和分析，以期給豬瘟的控制提供參考和借鑒。

1 材料與方法

1.1 血清樣本來(lái)源

血清樣本采自安徽省不同地區(qū)的6家種豬場(chǎng)，分別命名為A、B、C、D、E和F場(chǎng)，這6家種豬場(chǎng)均為有一定規(guī)模的種豬生產(chǎn)企業(yè)，建場(chǎng)均在10年以上，存欄生產(chǎn)母豬數(shù)最少的也在500頭以上，多的存欄生產(chǎn)母豬幾千頭乃至上萬(wàn)頭，分別位于肥東縣、宿州市、亳州市、利辛縣、鳳陽(yáng)縣、滁州市等地。

1.2 采樣及處理

每個(gè)豬場(chǎng)采樣兩次，采樣時(shí)間為仔豬首免和二免后的3周左右，首免和二免后采樣的豬群均為同一批豬，二免后的采樣豬可能與首免后的采樣豬相同，但也有可能不同。每個(gè)豬場(chǎng)選10窩以上的仔豬進(jìn)行采樣，每窩采樣1～3頭，采樣豬的品種為長(zhǎng)白豬和大白豬，B場(chǎng)只有大白豬，A、C、D、E和F場(chǎng)均有長(zhǎng)白豬和大白豬，采樣時(shí)盡量保證樣本中的長(zhǎng)白豬和大白豬各占一半。前腔靜脈采集血液，分離血清保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試劑盒和儀器

豬瘟病毒抗體阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒，美國(guó)IDEXX公司產(chǎn)品；BIO-RAD680型酶標(biāo)儀，美國(guó)伯樂(lè)公司；低溫冷凍離心機(jī)，美國(guó)貝克曼公司；37℃恒溫培養(yǎng)箱，上海三發(fā)科學(xué)儀器公司。

1.4 免疫情況調(diào)查

對(duì)采樣豬場(chǎng)豬瘟免疫所使用的疫苗種類(lèi)、疫苗生產(chǎn)場(chǎng)家、免疫接種時(shí)間、免疫劑量、免疫途徑等幾個(gè)方面進(jìn)行調(diào)研。

1.5 ELISA檢測(cè)

按照IDEXX公司的豬瘟病毒抗體阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行試驗(yàn)操作。結(jié)果判定：若被檢樣本的阻斷率≥40%，該樣本就可以被判為陽(yáng)性；若被檢樣本的阻斷率≤30%，該樣本就可以被判為陰性；若被檢樣本的阻斷率為30%～40%，數(shù)日后再對(duì)樣本進(jìn)行重測(cè)。若被檢樣本的阻斷率≥50%，該樣本判為抗體合格。

2 結(jié)果

2.1 免疫情況調(diào)查

采樣的6家種豬場(chǎng)均使用的是豬瘟傳代細(xì)胞源活疫苗，分別來(lái)自4個(gè)疫苗生產(chǎn)廠家。仔豬階段的免疫程序，6家豬場(chǎng)均采用兩次免疫的方式，首次免疫時(shí)間為23～28日齡，二次免疫時(shí)間為49～60日齡，A、B和E場(chǎng)的首次免疫劑量為1頭份，二次免疫劑量為2頭份，C、D和F場(chǎng)的首次免疫和二次免疫所使用的免疫劑量均為2頭份，具體見(jiàn)表1。

2.2 首次免疫后抗體檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)顯示，A、B、C、D、E和F場(chǎng)的豬瘟抗體陽(yáng)性率（被檢樣本的阻斷率≥40%）存在較大差異，其中最高的是B場(chǎng)，達(dá)到了100%，E場(chǎng)和A場(chǎng)次之，為86.67%和84.09%，最低的是F場(chǎng)，為44.64%；6家豬場(chǎng)的豬瘟抗體合格率（被檢樣本的阻斷率≥50%）與陽(yáng)性率相比較低，雖存在一定的相關(guān)性，但并不是等比關(guān)系，抗體合格率最高的變成了E場(chǎng)，合格率為63.33%，A和 B場(chǎng)次之，合格率為 52.27%和50.00%，最低的還是F場(chǎng)，合格率只有17.86%。6家豬場(chǎng)的抗體離散度為17.40%～26.78%，平均抗體阻斷率為35.50%～55.68%，具體見(jiàn)表2。

表2 第1次免疫后抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 第2次免疫后抗體檢測(cè)結(jié)果

二免后，C、D、E和F場(chǎng)的豬瘟抗體陽(yáng)性率（被檢樣本的阻斷率≥40%）分別為81.81%、100.00%、100.00%和90.90%，與一免后的抗體檢測(cè)相比均存在大幅度提高，提高幅度分別為17.52、43.33、13.33和46.26個(gè)百分點(diǎn)，A場(chǎng)雖有提高，但變化不大，提高幅度為2.02個(gè)百分點(diǎn)，B場(chǎng)抗體陽(yáng)性率仍保持為100%；6家豬場(chǎng)的豬瘟抗體合格率（被檢樣本的阻斷率≥50%）分別為 75.00%、100.00%、72.73%、85.71%、73.08%和45.45%，與一免后的抗體檢測(cè)相比，均大幅度提高，提高幅度為9.75～50個(gè)百分點(diǎn)。6家豬場(chǎng)的抗體離散度為19.76%～28.87%，平均抗體阻斷率相較于第1次免疫后有較大提高，提高幅度為4.97～20.98個(gè)百分點(diǎn)，具體見(jiàn)表3。

表3 第2次免疫后抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討論

豬瘟一直是影響?zhàn)B豬生產(chǎn)的關(guān)鍵疫病之一，是需要加快控制和凈化的重要豬病，2016年以前一直是國(guó)家強(qiáng)制免疫的豬病之一，雖然2016年7月21日，農(nóng)業(yè)部聯(lián)合財(cái)政部發(fā)布公告稱(chēng)，豬瘟與高致病性藍(lán)耳病暫不實(shí)施強(qiáng)制免疫政策，并且《2017年國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃》中也取消了對(duì)豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病強(qiáng)免。但這不代表豬瘟的免疫不重要，應(yīng)該是現(xiàn)階段暫不實(shí)施強(qiáng)制免疫更利于豬瘟的控制和凈化。《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》中對(duì)豬瘟提出要求，到2015年，原種豬場(chǎng)達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)，到2020年，全國(guó)所有種豬場(chǎng)達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)。這說(shuō)明種豬群豬瘟的控制和凈化處于更加重要和緊迫的位置。

據(jù)《國(guó)家動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃》，豬瘟免疫21天后，進(jìn)行免疫效果監(jiān)測(cè)，采用抗體阻斷ELISA和抗體間接ELISA，抗體陽(yáng)性判定為合格，正向間接血凝試驗(yàn)抗體效價(jià)≥25判定為合格。本試驗(yàn)中，由于6家豬場(chǎng)生產(chǎn)的不同步性，導(dǎo)致采樣時(shí)間點(diǎn)不能完全一致，但盡量選擇了差別不大的時(shí)間點(diǎn)，從檢測(cè)結(jié)果看，并不影響分析和比較。首次免疫后3周左右，6家豬場(chǎng)的豬瘟抗體陽(yáng)性率為44.64%～ 100%；二免后3周左右，抗體陽(yáng)性率為81.81%～ 100%，全部達(dá)到國(guó)家農(nóng)業(yè)部規(guī)定的ELISA陽(yáng)性≥70%的合格標(biāo)準(zhǔn)。本試驗(yàn)使用的豬瘟病毒抗體阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒，是美國(guó)IDEXX公司產(chǎn)品，據(jù)有關(guān)研究表明，該試劑盒檢測(cè)豬瘟抗體阻斷率達(dá)到50%時(shí)的水平相當(dāng)于中和抗體滴度1∶32，此水平的中和抗體水平才對(duì)豬群具有保護(hù)力，實(shí)際生產(chǎn)中要以阻斷率≥50%作為豬瘟免疫抗體的合格標(biāo)準(zhǔn)[2-4]。如果按此標(biāo)準(zhǔn)，一免后3周左右抗體合格率為17.86%～63.33%；二免后3周左右抗體合格率為45.45%～100%，除F場(chǎng)外，其他5家豬場(chǎng)抗體合格率均≥70%。另外，韓崇江和張大丙建議種豬豬瘟抗體免疫合格標(biāo)準(zhǔn)提高到1∶64[5]，即便是按此標(biāo)準(zhǔn)（豬瘟抗體阻斷率≥50%判為免疫合格），F(xiàn)場(chǎng)的抗體合格率僅為45.45%，因此該場(chǎng)豬瘟免疫程序的合理性需進(jìn)一步探究。

關(guān)于豬瘟在仔豬階段免疫程序報(bào)道較多，普遍的認(rèn)識(shí)是在仔豬階段開(kāi)展兩次免疫是較為合理的免疫方式。研究表明，對(duì)當(dāng)前的豬場(chǎng)僅僅實(shí)施一次免疫是不夠的，只有實(shí)施二次免疫，才能獲得較高的免疫抗體水平，有效地防控豬瘟疫病的發(fā)生。本試驗(yàn)調(diào)查的6家種豬生產(chǎn)企業(yè)，在仔豬階段，均實(shí)行兩次豬瘟免疫，首免時(shí)間為23～28日齡，二免時(shí)間為49～60日齡，與人們常在20～35日齡和50～70日齡分別進(jìn)行首免和二免基本相符[6-10]。也有研究認(rèn)為，40日齡或50日齡是最佳豬瘟首次免疫開(kāi)展時(shí)間[9,11]，首免時(shí)間的合理選擇與母源抗體水平的高低有關(guān)，因此，豬瘟免疫程序的合理制訂需要因場(chǎng)而異，在抗體水平監(jiān)測(cè)的前提下，制訂適合本場(chǎng)的免疫程序。豬瘟活疫苗（脾淋苗）因其免疫原性好，一直是眾多豬場(chǎng)的首選，豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源），由于其可傳代的特點(diǎn)，不僅生產(chǎn)工藝更加穩(wěn)定，批間差異較小，并可以顯著提高病毒滴度，近年來(lái)得到了廣泛的應(yīng)用。本試驗(yàn)的6家豬場(chǎng)使用的都是豬瘟傳代細(xì)胞源活疫苗，二免均使用二倍免疫劑量，首次免疫，各有3家豬場(chǎng)使用1倍免疫劑量和2倍免疫劑量進(jìn)行免疫，從檢測(cè)結(jié)果看，抗體陽(yáng)性率或合格率與免疫劑量不存在必然相關(guān)性。

抗體離散度是評(píng)價(jià)抗體水平均勻度的指標(biāo)，種豬群一般要求在20%以下，商品豬可放寬到25%[12]，兩次抗體檢測(cè)，首免后豬瘟抗體檢測(cè)，各場(chǎng)抗體離散度在17.40%～26.78%之間，二免后豬瘟抗體檢測(cè)，各場(chǎng)抗體離散度在19.76%～28.87%，只有B場(chǎng)的兩次豬瘟抗體檢測(cè)離散度均低于20%，說(shuō)明B場(chǎng)的豬瘟抗體水平均勻度較好，是否與B場(chǎng)只采樣了大白豬有關(guān)，這可能需要進(jìn)一步研究和分析，但也僅僅稍低于20%（17.40%和19.76%），說(shuō)明這6家種豬場(chǎng)的抗體水平個(gè)體間相對(duì)差異較大。本試驗(yàn)雖然只是對(duì)種豬企業(yè)的仔豬階段免疫進(jìn)行了檢測(cè)和分析，但對(duì)其他類(lèi)型的規(guī)模豬場(chǎng)均具有借鑒作用。

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（編輯：柳青）

中國(guó)多人感染黏菌素耐藥菌

【美聯(lián)社倫敦1月27日電】新研究顯示，在中國(guó)，一些人可能染上對(duì)用作最后治療手段的抗生素具有耐藥性的細(xì)菌，且感染者數(shù)量令人擔(dān)憂。

研究人員分析了超過(guò)1.7萬(wàn)份樣本，它們出自浙江省和廣東省兩家醫(yī)院的普通腸道感染患者。

這些樣本約有1%對(duì)黏菌素具有耐藥性，而黏菌素常常被視為各種抗生素中的最后選擇。

這項(xiàng)研究周五發(fā)表在英國(guó)《柳葉刀》周刊上，是率先記錄中國(guó)多個(gè)省份耐藥性感染情況的文件之一。

幾十年來(lái)，中國(guó)一直把黏菌素用于農(nóng)業(yè)，以加速動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育，但這種藥物沒(méi)有用于人的治療。

科學(xué)家說(shuō)，這項(xiàng)最新研究進(jìn)一步證明，對(duì)動(dòng)物過(guò)度使用抗生素可能波及人類(lèi)。

衛(wèi)生官員早就擔(dān)心能抵抗黏菌素的細(xì)菌可能廣泛傳播，從而導(dǎo)致理論上無(wú)法醫(yī)治的超級(jí)細(xì)菌感染。在世界范圍內(nèi)，人們只發(fā)現(xiàn)很少的此類(lèi)病例。

對(duì)耐藥細(xì)菌日益加劇的擔(dān)憂促使聯(lián)合國(guó)鼓勵(lì)各國(guó)減少抗生素的使用并研制新的藥物。

感染了這類(lèi)耐藥細(xì)菌的患者通?？捎矛F(xiàn)有的抗生素治療。但醫(yī)生警告說(shuō)，隨著這些細(xì)菌產(chǎn)生對(duì)現(xiàn)有藥物的耐藥性，感染可能無(wú)法醫(yī)治。

專(zhuān)家還指出一個(gè)令人意外的情況：耐藥基因在細(xì)菌之間的傳播看起來(lái)非常容易。

英國(guó)微生物學(xué)學(xué)會(huì)發(fā)言人奈杰爾·布朗說(shuō)：“現(xiàn)在看來(lái)這種耐藥基因有可能四處擴(kuò)散，在不同類(lèi)型的細(xì)菌之間傳播?！彼€說(shuō)，這可能導(dǎo)致感染急劇增加。

（轉(zhuǎn)自參考消息[N]，2017-01-30）

S858.285.3

A

1002-1957(2017)04-0102-03

2017-06-14

安徽省科技攻關(guān)（1704a07020066）；安徽省農(nóng)科院創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)（13C0405）；安徽省生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目；安徽省生豬產(chǎn)業(yè)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)發(fā)展資金項(xiàng)目

潘孝成（1971-），男，安徽霍邱人，助理研究員，博士，主要從事畜禽傳染病研究.E-mail:pxcpyq@sina.com

張丹俊（1962-），男，安徽含山人，研究員，主要從事畜禽傳染病研究.E-mail:zhangdj694@sina.com