馬贊留，蔡紅海，崔成華，錢海云

（江蘇世陽生物科技有限公司，江蘇南通 226364）

瑯玡榆組培快繁技術

馬贊留，蔡紅海，崔成華，錢海云

（江蘇世陽生物科技有限公司，江蘇南通 226364）

本文采用瑯玡榆的腋芽為外植體進行愈傷組織誘導、不定芽分化、生根和移栽過程的研究，建立起了瑯玡榆無性植株再生的快繁體系。

瑯玡榆；組培；快繁

瑯玡榆，榆科榆屬，落葉喬木，陽性樹種，樹皮淡褐灰色，裂成薄片脫落。小枝幼時密被柔毛，后變無毛，灰色或暗灰色，無木栓翅。冬芽卵圓形，芽鱗被毛[1]。葉互生，寬倒卵形、長圓狀倒卵形或長圓狀橢圓形，長6～18厘米，寬3～10厘米，先端短尾尖或尾狀漸尖，基部偏斜，楔形至心形，邊緣具重鋸齒，上面密被短硬毛，粗糙，下面密被柔毛，側(cè)脈15～21對。葉柄長1～1．5厘米，密被長柔毛。春季先葉開花，在生枝葉腋排成簇狀聚傘花序。翅果窄倒卵形、長圓狀倒卵形或?qū)挼孤研?，長1．5～2．5厘米，寬1～1．7厘米，兩面及邊緣疏被或密被柔毛，果核位于翅果的中上部，上端接近缺口，果梗長12毫米，被短毛。稍耐蔭、耐旱亦耐濕，耐鹽堿，適合各類土壤生長[2]。本文對瑯玡榆的組織培養(yǎng)快繁技術進行研究，以期縮短瑯玡榆的育種周期，加快對該樹種的研究進程，從而更多地為生產(chǎn)提供技術支持[3,4]。

1 材料與方法

1.1 外植體的采集及處理

3月中旬從室外采集瑯玡榆的腋芽，在流水下沖洗30分鐘，然后在超凈工作臺上用75%酒精消毒30秒，用無菌水沖洗1次，放入1%次氯酸鈉溶液消毒10分鐘，無菌水沖洗5次，待用。

1.2 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)溫度在（25±2）℃的恒溫條件下，光照條件一般是2000 lx，光照每日12～16小時。

1.3 愈傷組織的誘導

在無菌條件下，將消毒的外植體分別接種不同生長調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基上（見表1），誘導愈傷組織發(fā)生。每處理10瓶，每瓶5個葉片，重復3次。26天后，調(diào)查出愈率和愈傷組織長勢。出愈率=（形成愈傷組織的葉片數(shù)/接種葉片數(shù)）×100%。

1.4 愈傷組織分化培養(yǎng)

將培養(yǎng)26天，生長良好的愈傷組織切成邊長約為0．5厘米的正方體小塊，接種于不同的分化培養(yǎng)基（見表2），誘導愈傷組織產(chǎn)生不定芽。每處理10瓶，每瓶3個愈傷塊，重復3次。45天后調(diào)查平均出芽數(shù)和再生頻率。愈傷組織上產(chǎn)生的不定芽生長到一定高度時，可直接接種于增殖培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)。

平均出芽數(shù)=分化出的不定芽總數(shù)/接種愈傷塊數(shù)

再生頻率=（產(chǎn)生不定芽的愈傷塊數(shù)/接種愈傷塊數(shù)）× 100%

1.5 誘導生根培養(yǎng)

生根培養(yǎng)基采用1/2 MS基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的6－BA、IBA及NAA誘導生根，具體處理見表3。每處理10瓶，每瓶5個嫩梢，重復3次。30天后調(diào)查統(tǒng)計生根率、平均生根條數(shù)、平均根長及平均莖高。

生根率=（不定根發(fā)生的莖段數(shù)/接種莖段數(shù)）×100%

平均生根條數(shù)=生根條數(shù)/接種莖段數(shù)

平均根長=根長總合/生根總條數(shù)

平均莖高=芽苗總高度/芽苗總數(shù)

1.6 煉苗與移栽

當根系得到基本發(fā)育后，將培養(yǎng)瓶移到室外進行閉瓶煉苗7～10天左右，遮蔭度為50%～70%。然后在自然光下進行開瓶煉苗2～3天。開瓶煉苗可以分階段進行，即首先松蓋1～2天，然后部分開蓋1～2天，最后完全揭蓋。

2 結果與分析

2.1 不同生長調(diào)節(jié)劑對瑯玡榆愈傷組織誘導的影響

從不同生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上誘導產(chǎn)生的愈傷組織結果（見表4）。9個處理中瑯玡榆的腋芽都能產(chǎn)生愈傷組織。處理A1～A3中產(chǎn)生的愈傷組織白色柔軟，培養(yǎng)15天后逐漸變?yōu)楹稚?，沒有再

表1 不同生長調(diào)節(jié)劑處理

表2 愈傷分化的不同生長調(diào)節(jié)劑處理

表3 生根的不同生長調(diào)節(jié)劑處理

表4 不同生長調(diào)節(jié)劑對瑯玡榆愈傷組織誘導的影響

生能力。當6-BA為3 mg/L時，愈傷組織多為綠色，長勢良好，宜產(chǎn)生不定芽，且NAA為0．3mg/L時出愈率最高為91．3%。當6－BA為4mg/L時，愈傷組織長勢下降且出愈率下降。

2.2 不同生長調(diào)節(jié)劑對瑯玡榆愈傷組織分化的影響

在MS培養(yǎng)基中添加不同濃度的TDZ、NAA對瑯玡榆的愈傷進行培養(yǎng)，培養(yǎng)45天后進行調(diào)查。由表5可知，在TDZ濃度為2 mg/L，死亡率在69%以上，再生頻率只有7%以下，基本上不產(chǎn)生不定芽。在TDZ濃度為0．5mg/L，瑯玡榆的愈傷分化死亡率有所上升在46%以下，再生頻率在17%以上，但不定芽的量不多。當TDZ濃度為1．5mg/L，NAA濃度為0．4mg/L，分化的不定芽最多，死亡率達3．8%，再生頻率為62．6%。

表5 不同生長調(diào)節(jié)劑對瑯玡榆愈傷組織分化的影響

表6 不同生長調(diào)節(jié)劑對瑯玡榆生根的影響

2.3 不同生長調(diào)節(jié)劑對瑯玡榆生根的影響

接種數(shù)天后逐漸從基部產(chǎn)生數(shù)條不定根，培養(yǎng)30天后調(diào)查其生根狀況。結果表明（見表6）：當IBA濃度在0．05mg/L，生根率最高在80%以上，其中與IAA 0．004mg/L和NAA 4mg/L組合，生根效果最好，生根率在100%，平均根長達0．8厘米，平均生根數(shù)為8．5，平均莖高為3．2厘米。隨著IBA濃度的加大，在0．1mg/L濃度時，生根率下降20%以下，生根效果也明顯下降。

2.4 移栽

移栽之前應先閉瓶煉苗，再開瓶煉苗，使其逐步適應外界環(huán)境。移栽基質(zhì)選用砂和蛭石質(zhì)量比1：2。溫度保持在25℃左右。約25天后瑯玡榆移栽苗的成活率在92%。

3 結論

瑯玡榆最優(yōu)化的組培成苗的生長調(diào)節(jié)劑配方是：愈傷組織其誘導配方是A6:MS+6-BA 3 mg/L+NAA 0．3mg/L；愈傷組織分化配方是B5:MS+TDZ 1．5mg/L+NAA 0．4mg/L；生根配方是C4: 1/2MS+6-BA 0．05 mg/L+IBA 0．004 mg/L+NAA 4．0mg/L。

[1]鄭萬鈞主編．中國樹木志:第3卷[M]．北京:中國林業(yè)出版社, 1997．54-55．

[2]傅立國．中國榆屬的研究[J]．東北林學院學報,1980(03): 1-40．

[3]朱大保．國外楊樹組培微繁技術的進展[J]．北京林業(yè)大學學報,1990,12(01):84-91．

[4]陳正華．木本植物組織培養(yǎng)及其應用[M]．北京:高等教育出版社,1986．

南通市重大科技創(chuàng)新專項計劃項目（HL2014003）

S788

A

10.14025/j.cnki.jlny.2017.15.016

馬贊留，本科學歷，工程師，研究方向：園藝研究。