路 靜，王玉平，張 霆，郝友瑛

(1.烏魯木齊市婦幼保健院婦科，新疆 烏魯木齊 830001；2.新疆佳音醫(yī)院婦科，新疆 烏魯木齊 830000；3.新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830063)

β-catenin、Smad3及TGF-β1在宮腔粘連患者子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)及意義

路 靜1，王玉平2，張 霆3，郝友瑛1

(1.烏魯木齊市婦幼保健院婦科，新疆 烏魯木齊 830001；2.新疆佳音醫(yī)院婦科，新疆 烏魯木齊 830000；3.新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830063)

目的 研究β-catenin、Smad3及TGF-β1在宮腔粘連(IUA)患者粘連組織中的表達(dá)水平，探討其在IUA中的作用機(jī)制。方法 選擇 2014年5月至2016年5月在烏魯木齊市婦幼保健院行宮腔鏡下宮腔粘連松解術(shù)的IUA患者 60 例為實(shí)驗(yàn)組，常規(guī)行宮腔鏡檢查患者60例為對(duì)照組。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測實(shí)驗(yàn)組 IUA 患者的粘連組織、靠近粘連的子宮內(nèi)膜和對(duì)照組的正常子宮內(nèi)膜組織中β-catenin mRNA、Smad3mRNA及TGF-β1 mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果 對(duì)照組患者正常子宮內(nèi)膜組織中與實(shí)驗(yàn)組輕度、中度、重度IUA患者粘連組織中的β-catenin mRNA、Smad3 mRNA、TGF-β1 mRNA的表達(dá)比較，從低到高依次排序：對(duì)照組<實(shí)驗(yàn)組輕度粘連<實(shí)驗(yàn)組中度粘連<實(shí)驗(yàn)組重度粘連，對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值分別為20.35、19.62、22.32，均P<0.05)，β-catenin mRNA、Smad3 mRNA、TGF-β1 mRNA在實(shí)驗(yàn)組IUA 患者粘連組織、靠近粘連的子宮內(nèi)膜中的表達(dá)均高于對(duì)照組正常子宮內(nèi)膜，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.038、0.003、0.004)；β-catenin mRNA、Smad3 mRNA、TGF-β1 mRNA在粘連組織中的表達(dá)高于靠近粘連的子宮內(nèi)膜，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.016、0.001、0.008)。在IUA患者粘連組織中TGF-β1與Smad3的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.44，P=0.01)； TGF-β1與β-catenin 的表達(dá)亦呈正相關(guān)(rs=0.42，P=0.02)；Smad3與β-catenin的達(dá)無相關(guān)性(rs=0.037，P=0.85)。結(jié)論 在 IUA 中 β-catenin 、TGF-β1及Smad3的高表達(dá)可能與宮腔粘連的發(fā)生有密切相關(guān)；β-catenin和TGF-β1/Smad通路可能協(xié)同參與子宮內(nèi)膜纖維化及促進(jìn)宮腔粘連的形成。

宮腔粘連；β-連環(huán)蛋白；TGF-β1/Smad；纖維化

宮腔粘連(intrauterine adheious，IUA)是指各種因素造成宮腔損傷或感染導(dǎo)致子宮內(nèi)膜基底層受損，無法再生修復(fù)，子宮內(nèi)膜纖維化，宮腔肌壁和(或)宮頸管的相互粘連，最終宮腔形態(tài)失常，約90.00%由過度刮宮引起[1-2]。近年來，隨著宮腔操作的增加及宮腔鏡技術(shù)的普及，IUA患病率呈逐年上升趨勢，但治愈率和妊娠率仍較低，其發(fā)生嚴(yán)重影響現(xiàn)代婦女的生活質(zhì)量及生育要求。目前，該病發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，可能與體內(nèi)部分促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù)或抑制組織纖維化的細(xì)胞因子異常表達(dá)密切相關(guān)[3]。本研究從與纖維化疾病密切相關(guān)的因子β-catenin 、Smad3及TGF-β1入手，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction，PCR)技術(shù)測定上述因子在IUA患者子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)，探討其與IUA的關(guān)系，為了解IUA的發(fā)病機(jī)制、預(yù)防IUA的形成及術(shù)后復(fù)發(fā)提供重要的理論依據(jù)。

1資料與方法

1.1 一般資料

選擇2014年5月至2016年5月在烏魯木齊市婦幼保健院行宮腔粘連分離術(shù)的IUA患者60例為實(shí)驗(yàn)組(輕度17例，中度22例，重度21例)，年齡25～36歲，平均年齡(28.36±3.21)歲，宮內(nèi)妊娠(2.11±1.89)次，曾行宮腔操作(1.27±1.10)次，其中主訴月經(jīng)減少38例、月經(jīng)紊亂4例、繼發(fā)不孕8例、經(jīng)量減少伴繼發(fā)不孕6例、體檢發(fā)現(xiàn)4例；選擇同時(shí)間段行常規(guī)宮腔鏡檢查患者60例為對(duì)照組，年齡 26～36 歲，平均年齡(27.73±3.47)歲，宮內(nèi)妊娠(2.23±1.78)次，曾行宮腔操作(1.30±1.21)次，其中主訴原發(fā)不孕27例，男方因素繼發(fā)不孕12例；所有研究對(duì)象均排除其他子宮內(nèi)膜病變、內(nèi)分泌疾病、其他器官可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的器質(zhì)性疾?。唤?個(gè)月未應(yīng)用過激素類藥物及帶宮內(nèi)節(jié)育器者。兩組研究對(duì)象的年齡、宮內(nèi)妊娠次數(shù)及宮腔手術(shù)操作次數(shù)對(duì)比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，具有可比性。為了避免不同月經(jīng)周期體內(nèi)雌孕激素水平變化對(duì)檢測結(jié)果的影響，研究對(duì)象均選擇在卵泡期手術(shù)。研究獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，標(biāo)本采集均取得患者知情同意。

1.2 宮腔粘連的診斷標(biāo)準(zhǔn)及分度

符合《中華婦產(chǎn)科》中有關(guān)宮腔粘連診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，將宮腔粘連情況分為 Ⅰ～Ⅴ度：Ⅰ度：宮腔內(nèi)有多處纖維膜樣粘連帶，兩側(cè)宮角及輸卵管開口正常；Ⅱ度：子宮前后壁間有致密的纖維束粘連，兩側(cè)宮角及輸卵管開口可見；Ⅲ度： 纖維束狀粘連致部分宮腔及一側(cè)宮角閉鎖；Ⅳ度：纖維索狀粘連致部分宮腔及兩側(cè)宮角閉鎖；Va度：粘連帶瘢痕化致宮腔極度變形及狹窄；Vb度：粘連帶瘢痕化致宮腔完全消失；其中Ⅰ度、Ⅱ度為輕度，Ⅲ度為中度，Ⅳ度、Ⅴ度為重度。所有IUA患者的病變程度均由兩名資深的婦科臨床醫(yī)師共同評(píng)定。

1.3 標(biāo)本收集

全部患者在月經(jīng)干凈后3～7天手術(shù)。在全身靜脈麻醉下所有 IUA 患者均先以宮腔鏡檢查判定IUA的嚴(yán)重度，再進(jìn)行粘連分離術(shù)。具體步驟為：宮腔鏡觀察宮腔情況，判定粘連程度，分別鉗取粘連組織、靠近粘連組織處子宮內(nèi)膜(距粘連組織0.50cm處)，再行宮腔粘連松解術(shù)，使之形態(tài)、大小接近或恢復(fù)正常,盡可能使雙側(cè)輸卵管開口可見。對(duì)照組在直視下利用微型鉗獲取子宮內(nèi)膜組織。以上獲取的標(biāo)本經(jīng)冷生理鹽水漂洗去殘留血液、粘液后，置于事先經(jīng)高溫高壓滅菌的 2.00mL凍存管中，立即投入液氮冷卻后，轉(zhuǎn)-70℃低溫冰箱，留備提取核糖核酸(RNA ribonucleic acid, RNA)。

1.4 實(shí)驗(yàn)主要儀器和試劑儀器

儀器：德國 SIGMA 公司高速冰凍離心機(jī)，美國 BIO-ARD 凝膠成像系統(tǒng)，美國 Bio-Rad 公司普通 PCR 儀，美國Quawell Q5000超微量核酸蛋白測定儀，美國Applied Biosystems 7500熒光定量 PCR 檢測儀。

試劑：Revert Aid First Strand cDNA Synthesis Kit 試劑盒購自 Thermo 公司，Trizol總 RNA 提取液購自美國 Reagent Invitrogen 公司，SYBR Premix Ex TaqTM Ⅱ(Tli RNaseH Plus)試劑盒購自 TaKaRa 公司， TGF-β1、Smad3、β-catenin及β-actin 引物由上海鉑尚生物工程有限公司設(shè)計(jì)合成。

TGF-β1上游引物：5′-CAAGTTCAAGCAGAGTAC￣ACACAG-3′

TGF-β1下游引物：5′-TGAGGTATCGCCA￣GGAATTGTTG-3′

Smad3上游引物：5′-GGTGCTCCATCTCCTACTACG-3′

Smad3下游引物：5′-GCCTCTTCCGATGTGTCTCC-3′

β-catenin 上游引物：5′-GCAGCAACAGTCTTACCT-3′

β-catenin 下游引物：5′-ACAGGACTTGGGAGGTAT-3′

β-actin 上游引物：5′-TGGCACCCAGCACAATGAA-3′

β-actin 下游引物：5′-CTAAGTCATAGTCCGCCTAG￣AAGCA-3′

(其中 TGF-β1、Smad3、β-catenin 引物擴(kuò)增產(chǎn)物長度分別為182bp、133bp、116bp)

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1提取 RNA

①準(zhǔn)備相關(guān)用品：勻漿器、大中小離心管(eppendorf，EP) 管和槍頭均行去除 RNA 酶處理，高壓后備用。配制1‰焦碳酸二乙酯(Diethy pyrocarbonate，DEPC) 水，高壓后備用。勻漿器使用前在冰上預(yù)冷；②RNA 的勻漿：取20～30mg 的子宮內(nèi)膜組織(或粘連組織)放入已預(yù)冷的勻漿器，再加入800μL的總RNA抽提試劑(Trizol)，充分碾磨后，轉(zhuǎn)入 1.50mL EP 管中，室溫狀態(tài)下冰上放置 5min 后，4℃，12 000rpm，離心 10min；③RNA 的分離：取上清液至 EP 管，加入150μL氯仿，劇烈震蕩30s混勻，后室溫狀態(tài)下冰上放置4min。4℃，12 000rpm，離心15 min。(離心后可見液體分為三層，上層清液即為 RNA 層，中間層為蛋白層，下層粉色液體層為脫氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid，DNA)，輕輕打開 EP 管，小心吸取上層清液400～500μL轉(zhuǎn)移至新的EP管中。切忌貪多，勿吸到中間層；④RNA 沉淀：加入等體積的異丙醇，上下顛倒幾次，使其充分混勻后，室溫靜置10min。4℃，12000rpm，離心20min，棄上清；⑤RNA 的洗滌：棄上清，加入已預(yù)冷的75%乙醇700μL，溫和震蕩后，4℃，12 000rpm，離心5min。再棄上清，重復(fù)步驟，以盡量提高提取的 RNA 濃度；⑥RNA 的干燥：將裝有 RNA 沉淀的 EP 管放置于室溫中晾干，至 RNA 呈半透明狀；⑦RNA 的溶解：加入20～30μL(根據(jù)沉淀量適當(dāng)調(diào)整)已高壓過的1‰DEPC水溶解 RNA 沉淀，反復(fù)吹打至沉淀完全溶解；⑧RNA 純度測定：取 2μL的總 RNA 原液，于超微量核酸-蛋白定量儀進(jìn)行總RNA 純度及含量測定；另取少量總 RNA 原液進(jìn)行凝膠電泳(100V，15min)；一部分立即進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，其余部分置于-80℃保存。

1.5.2 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

以上述總 RNA 為模板，于無RNA酶(Rnase-free)0.60mL薄壁管內(nèi)按表 1 所示體系依次加入各試劑進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄， 反應(yīng)總體積 30μL， 所得互補(bǔ)脫氧核糖核酸(complementary DNA, cDNA)置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)

采用美國 Bio-Rad 公司普通 PCR 儀進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，在0.60mL薄壁管內(nèi)，取逆轉(zhuǎn)錄后的 cDNA 為模板， 以 TGF-β1、 Smad3、 β-catenin、 β-actin 引物進(jìn)行 PCR反應(yīng)，反應(yīng)總體積為20μL。通過反復(fù)實(shí)驗(yàn)，確定最佳 PCR 擴(kuò)增條件：95℃ 5s，53℃ 34s，重復(fù) 40 個(gè)循環(huán)。反應(yīng)條件：預(yù)變性： 94℃ 2min；擴(kuò)增：94 ℃ 30s，Tm 30s，72 ℃ 45s(35～40 個(gè)循環(huán)，Tm：融解溫度)。

表1 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系(反應(yīng)液配制在冰上進(jìn)行)

Table 1 Reverse transcription system (reaction liquid is prepared on ice)

1.5.4 瓊脂糖凝膠電泳

PCR 產(chǎn)物在 1.00%瓊脂糖凝膠上電泳(100V，20min)，凝膠成像系統(tǒng)下成像并拍照，見圖1和圖2。

1.5.5 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real time-PCR)

采用 ABI7500 熒光定量 PCR 儀進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，在0.60mL薄壁管內(nèi)，取逆轉(zhuǎn)錄后的 cDNA 為模板，以人 TGF-β1、Smad3、β-catenin、β-actin 引物進(jìn)行real time-PCR反應(yīng)，反應(yīng)總體積 20 μL(見表2)。每個(gè)樣品設(shè)兩個(gè)孔，最后求取平均值，若結(jié)果中主副孔 Ct 值相差 0.50 以上，則認(rèn)為結(jié)果不可靠，舍去。

表2 實(shí)時(shí)熒光定量反應(yīng)體系(反應(yīng)液配制在冰上進(jìn)行)

Table 2 Real time fluorescent quantitative reaction system (reaction liquid is prepared on ice)

1.5.6 PCR產(chǎn)物相對(duì)含量的計(jì)算

在 PCR 檢測系統(tǒng)的數(shù)據(jù)分析(Date Analysis)模塊對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和修正。計(jì)算各反應(yīng)管的 Ct 值，以β-actin為內(nèi)參基因，釆用比較循環(huán)閾值法。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2結(jié)果

2.1總RNA提取及PCR產(chǎn)物

提取總 RNA 經(jīng) 1%瓊脂糖凝膠電泳，可見 28s、18s 及 5s 三條清晰帶，紫外燈下亮度 28s>18s，為 1～2倍，表明 RNA 完整性好，無明顯降解(見圖1)。測定 A260/A280 均在1.80～2.00之間，說明本實(shí)驗(yàn)所提取 RNA 已經(jīng)達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。總 RNA 經(jīng) PCR 擴(kuò)增后，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示明顯單一條帶，分別為基因β-catenin、Smad3、TGF-β1 的擴(kuò)增產(chǎn)物(見圖 2)。

圖 1 總 RNA 瓊脂糖凝膠電泳圖

Fig. 1 Agarose gel electrophoresis figure of total RNA

注：左 1 為標(biāo)記( Marker )，從下到上末端條帶依次為 100bp、200bp、300bp 等。

圖 2 TGF-β1、Smad3、β-catenin PCR 產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳

Fig. 2 Agarose gel electrophoresis of TGF-β1, Smad3 and β-catenin PCR products

2.2 β-catenin mRNA 、Smad3mRNA 及 TGF-β1 mRNA在不同分度IUA患者中的表達(dá)

對(duì)照組患者正常子宮內(nèi)膜組織中與實(shí)驗(yàn)組輕度、中度、重度IUA患者粘連組織中的β-catenin mRNA、Smad3 mRNA、TGF-β1 mRNA的表達(dá)比較，從低到高依次排序：對(duì)照組<實(shí)驗(yàn)組輕度粘連<實(shí)驗(yàn)組中度粘連<實(shí)驗(yàn)組重度粘連，對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，見表3。

組別例數(shù)(n)β-cateninmRNASmad3mRNATGF-β1mRNA對(duì)照組601.001.001.00實(shí)驗(yàn)組輕度粘連171.45±0.42a1.54±0.47a1.36±0.92a實(shí)驗(yàn)組中度粘連222.46±0.36ab2.78±0.90ab1.82±0.97ab實(shí)驗(yàn)組重度粘連213.42±0.43abc10.62±0.77abc2.18±0.93abcF20.3519.6222.32P<0.05<0.05<0.05

注：與對(duì)照組比較，aP、bP、cP<0.05；與實(shí)驗(yàn)組重度粘連比較，aP、bP<0.05；與實(shí)驗(yàn)組中度粘連比較，aP<0.05。

2.3β-cateninmRNA、Smad3mRNA、TGF-β1mRNA相對(duì)表達(dá)量

LSD-t檢驗(yàn)兩兩比較分析發(fā)現(xiàn)β-cateninmRNA、Smad3mRNA、TGF-β1mRNA在實(shí)驗(yàn)組IUA患者粘連組織、靠近粘連的子宮內(nèi)膜中的表達(dá)均高于對(duì)照組正常子宮內(nèi)膜，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.038、0.003、0.004)；β-cateninmRNA、Smad3mRNA、TGF-β1mRNA在粘連組織中的表達(dá)高于靠近粘連的子宮內(nèi)膜，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.016、0.001、0.008)，三組One-WayANOVA分析結(jié)果見表4。

組別例數(shù)(n)β-cateninmRNASmad3mRNATGF-β1mRNA實(shí)驗(yàn)組粘連組織603.36±0.42a10.54±0.78a2.11±0.94a實(shí)驗(yàn)組靠近粘連的子宮內(nèi)膜601.40±0.39ab1.91±0.73ab1.49±0.53ab對(duì)照組子宮內(nèi)膜601.001.001.00F7.20421.97920.337P<0.05<0.05<0.05

注：與對(duì)照組子宮內(nèi)膜組比較，aP<0.01；b與粘連組織組比較，P<0.05。

2.4 β-catenin 、 Smad3 、TGF-β1表達(dá)的相關(guān)性

Spearman相關(guān)性結(jié)果顯示：在IUA患者粘連組織中TGF-β1與Smad3的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.440，P=0.01)； TGF-β1與β-catenin 的表達(dá)亦呈正相關(guān)(rs=0.420，P=0.02)；Smad3與β-catenin的達(dá)無相關(guān)性(rs=0.037，P=0.85)，見圖3。

注：A:TGF-β1 mRNA 與β-catenin mRNA 表達(dá)量的相關(guān)性; B: TGF-β1 mRNA 與smd3 mRNA 表達(dá)量的相關(guān)性。

圖3 TGF-β1與 Smad3、β-catenin的表達(dá)相關(guān)性

Fig.3 Expression relevance of TGF-β1 Smad3 and β-catenin

3 討論

宮腔粘連是指由于各種原因?qū)е碌淖訉m內(nèi)膜基底層破壞引起宮腔部分或全部閉塞，可出現(xiàn)經(jīng)量減少、不孕、反復(fù)流產(chǎn)等并發(fā)癥，且宮腔粘連可以造成妊娠不良結(jié)局，如胎兒生長受限、胎盤植入、胎盤粘連等。目前治療宮腔粘連最有效的方法是宮腔鏡下宮腔粘連松解術(shù)，還原子宮腔正常生理解剖結(jié)構(gòu)，以恢復(fù)其正常的生理功能，但有調(diào)查表明，宮腔粘連術(shù)后的復(fù)發(fā)率居高不下，治療的效果均欠佳，尤其是一些重度粘連的病例，已經(jīng)嚴(yán)重影響到了女性的生育及身心健康等問題。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)的報(bào)道[5]，手術(shù)后復(fù)發(fā)的宮腔粘連中，其中重度宮腔粘連占20.00%～62.50%，目前對(duì)宮腔粘連的治療引起了國內(nèi)外學(xué)者廣泛的關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜損傷后釋放大量的細(xì)胞因子，各細(xì)胞因子相互作用，使子宮內(nèi)膜組織和相應(yīng)小血管再生及纖維組織過度增生，最終導(dǎo)致纖維瘢痕形成。在宮腔粘連中，當(dāng)纖維組織增生修復(fù)、取代子宮內(nèi)膜之后，相應(yīng)的纖維化組織即為粘連組織。2000年Brenner等學(xué)者在臨床及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)β-catenin 、Smad3及TGF-β1與組織纖維化的發(fā)生、發(fā)展及纖維瘢痕的形成具有相關(guān)性，但其與人類子宮內(nèi)膜纖維化的相關(guān)性研究很少，故本研究從β-catenin 、Smad3及TGF-β1入手，探討其與IUA的關(guān)系，為了解IUA的發(fā)病機(jī)制、預(yù)防IUA的形成提供理論依據(jù)。

3.1 β-catenin與宮腔粘連的關(guān)系

β-catenin是 Wnt/β-catenin 信號(hào)通路的關(guān)鍵因子，介導(dǎo) Wnt 通路參與細(xì)胞分化、增殖和凋亡等生理過程，調(diào)控細(xì)胞癌變、腫瘤侵襲等病理過程；同時(shí)β-catenin 又可與鈣黏蛋白 (E-cadherin) 結(jié)合形成穩(wěn)定的 E-cadherin/β-catenin復(fù)合物，以維持細(xì)胞正常形態(tài)及細(xì)胞間的黏附和遷移作用[6]。研究發(fā)現(xiàn)持續(xù)激活的β-catenin 介導(dǎo) Wnt/β-catenin 信號(hào)通路參與器官纖維化的發(fā)生，已證實(shí)其在肺[7]、肝[8]、腎[9]、心臟[10]和皮膚[11]等器官纖維化發(fā)病過程中均起作用。β-catenin 及其介導(dǎo)的 Wnt 信號(hào)通路已被證實(shí)與纖維化疾病發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)，結(jié)合宮腔粘連的病理改變是子宮內(nèi)膜纖維化，但目前關(guān)于 Wnt/β-catenin 信號(hào)通路與人類子宮內(nèi)膜纖維化的研究很少。本研究發(fā)現(xiàn)β-catenin mRNA 在實(shí)驗(yàn)組 IUA 患者粘連組織和靠近粘連的子宮內(nèi)膜中的表達(dá)均高于對(duì)照組正常子宮內(nèi)膜，提示高表達(dá)的β-catenin參與宮腔粘連的發(fā)生。其可能的機(jī)制如下：子宮內(nèi)膜損傷后 Wnt 蛋白表達(dá)分泌，啟動(dòng) Wnt/β-catenin信號(hào)通路，β-catenin 在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)大量累積并轉(zhuǎn)錄到細(xì)胞核內(nèi)， 增強(qiáng) Wnt 靶基因中與纖維化相關(guān)因子的轉(zhuǎn)錄活性，促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖并分泌大量細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix， ECM)，引起子宮內(nèi)膜纖維化的形成。

3.2 TGF-β1及Smad3與宮腔粘連的相關(guān)性

TGF-β是一類多功能的細(xì)胞因子，參與調(diào)節(jié)多種生理、病理過程，如細(xì)胞生長、分化、凋亡、遷移、腫瘤的發(fā)生及進(jìn)展等。研究已證實(shí)TGF-β1 參與皮膚纖維化、肝纖維化、腎纖維化、肺纖維化等多種纖維化疾病的發(fā)生發(fā)展[12]。高紅艷等學(xué)者在2014年的研究發(fā)現(xiàn) TGF-β1 在IUA 患者子宮內(nèi)膜中的表達(dá)明顯高于非 IUA 患者，且隨宮腔粘連程度的加重其表達(dá)升高越明顯。本研究發(fā)現(xiàn)TGF-β1 mRNA 在實(shí)驗(yàn)組 IUA 患者粘連組織和靠近粘連的子宮內(nèi)膜中的表達(dá)均高于對(duì)照組正常子宮內(nèi)膜，本研究結(jié)果與高紅艷的研究結(jié)果相似，提示高表達(dá)的TGF-β1參與宮腔粘連的發(fā)生。

Smad 是一種參與TGF-β信號(hào)細(xì)胞內(nèi)傳導(dǎo)的相關(guān)信號(hào)蛋白家族，其中 Smad3的磷酸化是 TGF-β/Smad 信號(hào)通路激活的標(biāo)志[13]，當(dāng)TGF-β/Smad 信號(hào)通路被激活后，組織出現(xiàn)纖維過度增生，最終導(dǎo)致纖維瘢痕形成。本研究發(fā)現(xiàn)Smad3在實(shí)驗(yàn)組粘連組織和靠近粘連的子宮內(nèi)膜的表達(dá)高于對(duì)照組，這表明在子宮壁局部組織中Smad3的異常表達(dá)可能與子宮粘連的發(fā)生有關(guān)，結(jié)合TGF-β1在宮腔粘連中的高表達(dá)，提示TGF-β1/Smad 信號(hào)通路可能與宮腔粘連的發(fā)生有關(guān)。Li 等[14]發(fā)現(xiàn)多種組織器官的纖維化均與 TGF-β1/Smad 信號(hào)通路的高表達(dá)有關(guān)。本研究結(jié)果與Li的研究結(jié)果相似。

同時(shí)本研究還發(fā)現(xiàn)TGF-β1 與Smad3 的表達(dá)呈正相關(guān)，TGF-β1與β-catenin的表達(dá)亦呈正相關(guān)，Smad3與β-catenin的表達(dá)無相關(guān)性，提示β-catenin和TGF-β1/Smad通路可能協(xié)同參與子宮內(nèi)膜纖維組織增生，最終導(dǎo)致纖維瘢痕，形成宮腔粘連。

綜上所述，在 IUA 中β-catenin 、TGF-β1及Smad3 的高表達(dá)可能與宮腔粘連的發(fā)生密切相關(guān)，β-catenin和TGF-β1/Smad3通路可能協(xié)同參與子宮內(nèi)膜纖維化及促進(jìn)宮腔粘連的形成。但其具體作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究，為今后治療及預(yù)防宮腔粘連提供新思路。

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[專業(yè)責(zé)任編輯：楊筱鳳]

Expressions and significance of β-catenin, Smad3 and TGF-β1 in endometrium of patients with intrauterine adhesion

LU Jing1, WANG Yu-ping2, ZHANG Ting3, HAO You-ying1

(1.Department of Gynecology, Urumqi Maternal and Child Health Care Hospital, Xinjiang Urumqi 830001, China;2.Department of Gynecology, Xinjiang Jiayin Hospital, Xinjiang Urumqi 830000, China;3.Second Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Xinjiang Urumqi 830063, China)

Objective To study the expression levels of β-catenin, Smad3 and TGF-β1 in adhesion tissue in patients with intrauterine adhesion (IUA) and to explore its mechanism in IUA. Methods A total of 60 cases of IUA treated with hysteroscopic lysis of intrauterine adhesions from May 2014 to May 2016 in Urumqi Maternal and Child Health Care Hospital were selected in experimental group, and 60 cases undergoing routine hysteroscopy were selected in control group. Real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to detect the expression levels of β-catenin mRNA, Smad3mRNA and TGF-β1 mRNA in adhesion tissue and endometrium near adhesion of IUA patients in experimental group and in normal endometrium in control group. Results Sequence of expression levels of β-catenin mRNA, Smad3 mRNA and TGF-β1 mRNA in normal endometrium in controls and in adhesion tissues in patients with mild, moderate and severe IUA was controls, mild IUA, moderate IUA and severe IUA patients from low to high, and difference had statistical significance (Fvalue was 20.35, 19.62, and 22.32, respectively, allP<0.05). Expressions of β-catenin mRNA, Smad3 mRNA and TGF-β1 mRNA in adhesion tissues and endometrium near adhesions of IUA patients in experimental group were higher than those in normal endometrium in control group, and difference was statistically significant (Pvalue was 0.038, 0.003 and 0.004, respectively). Expressions of β-catenin mRNA, Smad3 mRNA and TGF-β1 mRNA in adhesion tissue were higher than those in endometrium near adhesion, and difference was statistically significant (Pvalue was 0.016, 0.001 and 0.008, respectively). Expression of TGF-β1 in adhesion tissue of IUA patients was positively correlated with that of Smad3 (rs=0.44,P=0.01). Expression of TGF-β1 was also positively correlated with that of β-catenin (rs=0.42,P=0.02), but expression of Smad3 had no correlation with that of β-catenin (rs=0.037,P=0.85).Conclusion High expressions of β-catenin, TGF-β1 and Smad3 in IUA patients may be closely related to the occurrence of IUA. Pathway of β-catenin and TGF-β1/Smad may be involved in endometrial fibrosis and promote the formation of IUA.

intrauterine adhesion (IUA), β-catenin, TGF-β1/Smad, fibrosis

2017-03-05

新疆維吾爾自治區(qū)自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2015211C102)

路 靜(1971-)，女，副主任醫(yī)師，主要從事婦產(chǎn)科臨床工作。

郝友瑛，主任醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.07.014

R711.7

A

1673-5293(2017)07-0793-04