李 淼，喬海芝，朱繼紅，龍 彥

(保定市第一中心醫(yī)院，河北 保定 071000)

卵巢上皮性腫瘤中CAIX、VEGF的表達(dá)及臨床意義

李 淼，喬海芝，朱繼紅，龍 彥

(保定市第一中心醫(yī)院，河北 保定 071000)

目的 探討在卵巢上皮性腫瘤中碳酸酐酶IX(CAIX)與血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達(dá)情況，探討二者在卵巢惡性上皮性腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用及相關(guān)性。方法 采用SP免疫組化法檢測45例卵巢良性上皮性腫瘤，50例卵巢交界性上皮性腫瘤及61例卵巢惡性上皮性腫瘤中CAIX和VEGF的表達(dá)情況。結(jié)果 CAIX及VEGF在卵巢惡性上皮性腫瘤中的陽性表達(dá)率分別為59.00%和70.50%，明顯高于卵巢良性上皮性腫瘤及卵巢交界性上皮性腫瘤組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為18.14、5.83、21.97、7.95，均P<0.05)。CAIX及VEGF在卵巢惡性上皮性腫瘤中的表達(dá)與腫瘤分化程度、腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(χ2值分別為13.16、12.19、8.50、20.61、26.39、11.24，均P<0.01)，而與腫瘤的類型及腫瘤患者患病年齡狀況無關(guān)(χ2值分別為0.20、0.79、0.01、0.01，均P>0.05)。結(jié)論 CAIX及VEGF在卵巢惡性上皮性腫瘤的表達(dá)情況，與腫瘤的分期及預(yù)后密切相關(guān)，檢測CAIX與VEGF可能為臨床判斷卵巢惡性上皮性腫瘤轉(zhuǎn)移及分期提供依據(jù)，成為判斷卵巢惡性上皮性腫瘤預(yù)后的一個(gè)重要指標(biāo)。

碳酸酐酶IX；血管內(nèi)皮生長因子；卵巢上皮性腫瘤；免疫組化

卵巢惡性腫瘤是女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，雖不及宮頸癌的發(fā)病率高，但由于早期癥狀不明顯，易被忽視，故多數(shù)患者就醫(yī)時(shí)已屬晚期，死亡率一直居高不下。卵巢惡性腫瘤早診斷、早治療可明顯改善患者預(yù)后。卵巢惡性腫瘤中上皮性卵巢腫瘤占85%～90%。碳酸酐酶(carbonic anhydrase，CA)是新發(fā)現(xiàn)的與腫瘤乏氧代謝密切相關(guān)的腫瘤抗原，在腫瘤形成中具有一定的作用，可調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖，與不同類型惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[1]。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)有促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生、分化、遷移和浸潤的作用。本實(shí)驗(yàn)用免疫組化法檢測CAIX及VEGF在卵巢良性上皮性腫瘤、卵巢交界性上皮性腫瘤、卵巢惡性上皮性腫瘤組織中的蛋白表達(dá)水平。分析二者與惡性腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移的關(guān)系，為卵巢惡性上皮性腫瘤早期診斷及治療提供幫助。

1材料與方法

1.1標(biāo)本

收集2009至2015年保定市第一中心醫(yī)院收治卵巢腫瘤患者病理標(biāo)本156例，其中卵巢良性上皮性腫瘤45例(漿液性25例、黏液性20例)，卵巢交界性上皮性腫瘤50例(漿液性25例、黏液性25例)，卵巢惡性上皮性腫瘤61例(漿液性25例、黏液性25例、子宮內(nèi)膜樣11例)，所選病例患者年齡18～69歲，平均年齡45.23±4.27歲。其中卵巢惡性上皮性腫瘤患者術(shù)前均未接受放療、化療、內(nèi)分泌治療。每例卵巢惡性上皮性腫瘤的臨床分期參照國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO)2000年標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期10例，Ⅱ期28例，Ⅲ期13例，Ⅳ期10例；根據(jù)癌組織分化程度，高分化癌27例，中分化癌19例，低分化癌15例；根據(jù)是否轉(zhuǎn)移，已轉(zhuǎn)移31例，無轉(zhuǎn)移30例。

1.2主要試劑

兔抗人碳酸酐酶IX多克隆抗體(carbonic anhydrase IX olyclonal Antibody)、鼠抗人VEGF單克隆抗體、快捷型酶標(biāo)羊抗鼠/兔IgG聚合物、二氨基聯(lián)苯胺染色試劑盒(Diaminobenzidine，DAB)試劑盒，以上試劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.3免疫組化方法

CAIX和VEGF檢測均采用免疫組化SP法染色，按試劑盒說明法操作：石蠟切片脫蠟，梯度酒精水化，枸櫞酸鹽緩沖液(pH=6.0)微波爐抗原修復(fù)，免疫性動物血清封閉繁育，加入抗體過夜，加入生物素標(biāo)記二抗孵育，加入鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶溶液孵育；DAB顯色，蘇木素復(fù)染，上行梯度酒精脫水、二甲苯透明，中性樹膠封片，鏡下觀察結(jié)果、記錄并照相。用已知的陽性切片作陽性對照，用磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)代替一抗作為空白對照。

1.4結(jié)果判定

CAIX以胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞(圖1)。VEGF以胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞(圖2)。每張切片選取5個(gè)高倍鏡視野(high power field，HPF)，每個(gè)高倍視野下隨機(jī)計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，陽性表達(dá)者呈黃色至棕黃色顆粒，計(jì)算出陽性表達(dá)的細(xì)胞所占的百分比。按半定量結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)細(xì)胞著色評分：棕褐色為3分；棕黃色為2分；淡黃色為1分；無著色或與背景一致淡棕色為0分。按照陽性細(xì)胞比例評分：一個(gè)視野內(nèi)著色細(xì)胞>75%為4分；51 %～75 %為3分；11 %～50 %為2分；≤10 %為1分；陰性0分。最后兩者積分相乘：0～3分為(-)；4～6分弱(+)；7～9分較強(qiáng)(++)；9～12分強(qiáng)(+++)。在結(jié)果統(tǒng)計(jì)中將(-)計(jì)為陰性，(+)、(++)和(+++)計(jì)為陽性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 13.0軟件，CAIX和VEGF在各組中表達(dá)的陽性率的比較采用校正χ2檢驗(yàn)；P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 CAIX陽性表達(dá)(S-P，×200)

圖2 VEGF陽性表達(dá)(S-P，×200)

2結(jié)果

2.1 CAIX及VEGF在卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)情況

卵巢惡性上皮性腫瘤組織中CAIX及VEGF陽性表達(dá)率分別為59.00%和70.50%，明顯高于卵巢良性上皮性腫瘤組及卵巢交界性上皮性腫瘤組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，而卵巢交界性上皮性腫瘤組與卵巢良性上皮性腫瘤組陽性表達(dá)率相比也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 卵巢上皮性腫瘤中CAIX及VEGF陽性表達(dá)

Table 1 Positive expressions of CAIX and VEGF in ovarian epithelial neoplasm

注：*為卵巢交界性上皮性腫瘤與卵巢惡性上皮性腫瘤比較；■為卵巢良性上皮性腫瘤與卵巢惡性上皮性腫瘤比較；▲為卵巢良性上皮性腫瘤與卵巢交界性上皮性腫瘤比較。

2.2 CAIX及VEGF與惡性卵巢上皮性腫瘤臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

CAIX及VEGF在惡性卵巢上皮性腫瘤的表達(dá)情況與腫瘤分化程度，有無轉(zhuǎn)移及臨床分期相關(guān)(均P<0.05)，與腫瘤的組織學(xué)類型及患者年齡無關(guān)(均P>0.05)，見表2。

表 2 CAIX及VEGF與惡性卵巢上皮性腫瘤臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

Table 2 Relationship between expressions of CAIX and VEGF and clinical pathology index of ovarian epithelial cancer

(轉(zhuǎn)下表)

(續(xù)上表)

3討論

3.1碳酸酐酶IX與卵巢腫瘤

CAIX是由Pastorek發(fā)現(xiàn)的一種主要分布于細(xì)胞膜的酸性氨基酸組成的跨膜糖蛋白[2]，與腫瘤的乏氧代謝有關(guān)，缺氧狀態(tài)下被HIF-1α激活，表達(dá)上調(diào)。CAIX的酶活性主要是催化H2O + CO2→H+ H2CO3反應(yīng)，通過離子轉(zhuǎn)運(yùn)，使細(xì)胞外pH下降，保持酸性微環(huán)境，增加了腫瘤細(xì)胞對缺氧的耐受力，有調(diào)節(jié)并促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用[3-4]。研究發(fā)現(xiàn)，CAIX在食管鱗癌[5]、腎癌[6]、宮頸癌[7]和乳腺癌[8]等多種腫瘤中高表達(dá)，且其過表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及對放化療的抗拒及不良預(yù)后有關(guān)[9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CAIX在卵巢良性上皮性腫瘤、卵巢交界性上皮性腫瘤及卵巢惡性上皮性腫瘤中的陽性表達(dá)率分別為17.78%、36.00%和59.02%，三組間比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05)。且同時(shí)證實(shí)CAIX的表達(dá)與卵巢惡性上皮性腫瘤的分化程度、是否轉(zhuǎn)移及臨床分期密切相關(guān)(均P<0.05)，表明CAIX與卵巢惡性上皮性腫瘤的進(jìn)展與轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，可能作為判斷卵巢惡性上皮性腫瘤預(yù)后的有效指標(biāo)。

3.2血管內(nèi)皮生長因子與卵巢腫瘤

惡性腫瘤無限制侵襲性生長和轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)是腫瘤血管的生成和生長，而血管生成需要VEGF、成纖維細(xì)胞生長因子(fibroblast growth factor，F(xiàn)GF)和轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β、)等多種生長因子共同作用[10]。VEGF是特異性最強(qiáng)的促血管生長因子，能增強(qiáng)血管的滲透性，特異性刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，促進(jìn)血管生成。Park等[11]研究表明，VEGF/VEGF-2通路是新生血管的主要信號通路，給予抗VEGF中和抗體后，血管生成過程可被抑制。多項(xiàng)研究表明，VEGF與多種腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)[12]。本研究顯示，從卵巢良性上皮性腫瘤→交界性→惡性，VEGF 表達(dá)水平進(jìn)行性增高，且三組間比較，差異均具有顯著性(均P<0.05)。林梅等[13]報(bào)道，VEGF在發(fā)生盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的惡性卵巢腫瘤組織中高表達(dá)。本研究也發(fā)現(xiàn)VEGF表達(dá)與惡性卵巢上皮性腫瘤臨床分期，組織分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，說明VEGF過度表達(dá)者惡性程度高，更易發(fā)生盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，提示腫瘤組織中VEGF水平在一定程度上反映腫瘤的局部浸潤活性和轉(zhuǎn)移潛能，與腫瘤的轉(zhuǎn)移、分期及預(yù)后密切相關(guān)。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CAIX與VEGF與卵巢惡性上皮性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)， 特別是與侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系更為密切， 我們認(rèn)為臨床聯(lián)合檢測CAIX與VEGF或許可以為臨床判斷卵巢惡性上皮性腫瘤轉(zhuǎn)移及分期提供依據(jù)，成為判斷卵巢惡性上皮性腫瘤預(yù)后的一個(gè)重要指標(biāo)。

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[專業(yè)責(zé)任編輯：安瑞芳]

Expressions and clinical significance of carbonic anhydrase IX and VEGF in ovarian epithelial tumor

LI Miao, QIAO Hai-zhi, ZHU Ji-hong, LONG Yan

(Baoding First Central Hospital, Hebei Baoding 071000, China)

Objective To study the expressions of carbonic anhydrase IX (CAIX) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in ovarian epithelial tumor and their relationship with tumorigenesis and progression of malignant ovarian epithelial tumor. Methods SP immunohistochemistry method was used to examine the expressions of CAIX and VEGF in 45 cases of benign ovarian epithelial tumor, 50 cases of borderline ovarian epithelial tumor and 61 cases of malignant ovarian epithelial tumor. Results The expressions of CAIX and VEGF in malignant ovarian epithelial tumor was 59.00% and 70.50%, respectively, which were significantly higher than those in benign ovarian epithelial tumor and borderline ovarian epithelial tumor with statistical significance (χ2value was 18.14, 5.83, 21.97 and 7.95, respectively, allP<0.05). The expressions of CAIX and VEGF in malignant ovarian epithelial tumor were closely related with degree of tumor differentiation, invasion and metastasis (χ2value was 13.16, 12.19, 8.50, 20.61, 26.39 and 11.24, respectively, allP<0.01), but they were not correlated with type of tumor and patient’s age (χ2value was 0.20, 0.79, 0.01 and 0.01, respectively, allP>0.05). Conclusion The expressions of CAIX and VEGF in malignant ovarian epithelial tumor are closely related with staging of tumor and prognosis. Detecting CAIX and VEGF may provide some evidence for judging the metastasis and staging of malignant ovarian epithelial tumor and thus becomes an important index for predicting prognosis of malignant ovarian epithelial tumor.

carbonic anhydrase IX (CAIX); vascular endothelial growth factor (VEGF); ovarian epithelial neoplasm; immunohistochemistry

2017-03-05

李 淼(1978-)，女，副主任醫(yī)師，碩士，主要從事婦科腫瘤研究。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.07.011

R711.7

A

1673-5293(2017)07-0785-03