董淑榮，宋艷麗，王英萍，畢云生，張淑瑜，于燕莉，徐建江

基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)

自擬消氮顆粒對(duì)腎衰竭大鼠腎組織影響的病理學(xué)分析

董淑榮，宋艷麗，王英萍，畢云生，張淑瑜，于燕莉，徐建江＊

目的通過(guò)病理形態(tài)學(xué)分析，探討自擬消氮顆粒對(duì)腎衰竭大鼠腎組織的影響。方法用腺嘌呤（200mg/ kg）30 d灌胃法，誘導(dǎo)制備大鼠慢性腎衰竭模型。將模型大鼠隨機(jī)分為模型組，消氮顆粒高、低劑量（3．956 g/kg、0．989 g/kg）組和陽(yáng)性對(duì)照組（給予尿毒清顆粒2．088 g/kg）每組10只；正常空白組（10只）和模型組給予相同劑量的純化水，灌胃消氮顆粒治療28 d，觀察其對(duì)各組大鼠24 h尿液常規(guī)分析、大鼠腎體比及腎衰竭大鼠模型腎病理形態(tài)的影響。結(jié)果與模型組比較陽(yáng)性對(duì)照組，消氮顆粒高和低劑量組均能改善腎衰竭大鼠尿常規(guī)指標(biāo)，消氮顆粒高、低劑量組與模型組比較，大鼠腎體比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義且非常顯著（P＜0．01），腎組織的病理形態(tài)有顯著改善。結(jié)論

消氮顆粒對(duì)慢性腎衰竭可有明顯的治療作用。

消氮顆粒；慢性腎衰竭；尿常規(guī)檢驗(yàn)；腎體比；病理形態(tài)學(xué)活檢

慢性腎功能衰竭（chronic renal failure，CRF）是由多種因素導(dǎo)致的慢性進(jìn)行性腎實(shí)質(zhì)性損害，是一種進(jìn)行性惡化且難于治療的臨床綜合征，其病死率較高。雖然目前的醫(yī)療水平很高，但因經(jīng)濟(jì)狀況、腎源不足等多種原因，大部分患者仍然無(wú)法接受腎移植及維持性透析的治療［1］。目前非透析療法依舊是一種最普遍的治療方式。消氮顆粒是原濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科與腎內(nèi)科專家根據(jù)多年臨床治療腎衰竭的經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行研究，以中醫(yī)基礎(chǔ)理論為依據(jù)，以現(xiàn)代藥理學(xué)為指導(dǎo)，由大黃、丹參、附子等藥物經(jīng)一定的工藝提取制成的復(fù)方制劑。該研究以腺嘌呤制作的CRF大鼠模型［2，3］為對(duì)象，觀察消氮顆粒對(duì)CRF的影響，為臨床應(yīng)用提供理論指導(dǎo)和依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠60只，SPF級(jí)，雄性，體質(zhì)量（200±20）g［購(gòu)自山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物使用許可證號(hào)：SCXK（魯）20090001］。飼養(yǎng)條件：原濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心清潔級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi)，全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料（購(gòu)自山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）飼養(yǎng)，自由飲水。

1.2 藥品腺嘌呤（規(guī)格：每瓶100 g，批號(hào)：AA13，上海笛柏化學(xué)品技術(shù)有限公司，使用前加純化水配成2．5%的混懸液）。無(wú)糖型尿毒清顆粒（規(guī)格：每袋5 g，批號(hào)：20111018，內(nèi)蒙古康臣藥業(yè)有限責(zé)任公司）。消氮顆粒（規(guī)格：每袋6 g，批號(hào)：20110612，原濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院制劑室自制）。

1.3 儀器B600A型醫(yī)用低速離心機(jī)（河北省安新縣白洋離心機(jī)廠產(chǎn)品）；URISYS－2400型全自動(dòng)尿液分析儀（德國(guó)西門子產(chǎn)品）；C－3020 ZOOM型光學(xué)顯微鏡（日本奧林巴斯產(chǎn)品）。

1.4 方法

1.4.1 造模及分組方法［4］購(gòu)入Wistar大鼠60只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1w，隨機(jī)選取10只大鼠作為正常空白對(duì)照組，按體質(zhì)量200mg/kg·d純化水灌胃，其他大鼠按體質(zhì)量200mg/kg·d腺嘌呤灌胃。將造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組、陽(yáng)性對(duì)照組（無(wú)糖型尿毒清顆粒），消氮顆粒高、低劑量組，每組10只大鼠。剩余10只大鼠留作補(bǔ)備。

1.4.2 給藥方法于末次造模24 h后開始，正常對(duì)照組與模型組按體質(zhì)量灌胃純化水10m l/kg·d，陽(yáng)性對(duì)照組與消氮顆粒高、低劑量組則根據(jù)人鼠用藥劑量換算公式［5］計(jì)算給藥劑量為3．956 g/kg·d、0．989 g／kg·d，其中陽(yáng)性對(duì)照組給予無(wú)糖型尿毒清顆粒2．088 g/kg·d。使用前加純化水配制成適宜濃度的溶液進(jìn)行灌胃，給藥1次/d，共28 d。

1.4.3 觀察指標(biāo)第29天禁食不禁水，大鼠置于代謝籠內(nèi)，在糞尿分離器的側(cè)面連接集尿容器，收集24 h尿液。將收集的尿液進(jìn)行分離，取上清液進(jìn)行常規(guī)指標(biāo)檢測(cè)。第30天處死，取下腎，剔除筋膜和脂肪，擠盡血液，用吸水紙吸干腎表面的液體，稱重并計(jì)算大鼠腎體比系數(shù)：［臟器系數(shù)（%）=臟器重量（g）/體重（g）×100%］。取出的腎部分組織放入生理鹽水中清洗，固定于10%的中性甲醛溶液中，常規(guī)脫水包埋，切片，常規(guī)脫蠟至水，HE染色，進(jìn)行組織病理形態(tài)學(xué)觀察。

2 結(jié)果

2.1 尿常規(guī)檢測(cè)各組大鼠尿液清晰度均為清晰，尿膽原（URO）均為3．2μmol/L，葡萄糖（GLU）、膽紅素（BIL）、酮體（KET）及亞硝酸鹽（NIT）均為陰性，各組大鼠之間無(wú)差別。其中正常對(duì)照組大鼠尿液蛋白質(zhì)（PRO）、潛血（BLD）及中性粒細(xì)胞（LEU）均為陰性；與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠尿液PRO為陽(yáng)性（平均2+），BLD為陽(yáng)性（平均2+），LEU為陽(yáng)性（平均2+），且模型組大鼠尿液比重（SG）降低，提示可能出現(xiàn)腎損傷。給藥后的陽(yáng)性對(duì)照組和消氮顆粒高、低劑量組大鼠尿液PRO均為陰性，但仍有個(gè)別大鼠有微量BLD，LEU為陽(yáng)性（平均1+）。結(jié)果見表1。

表1 24小時(shí)尿液常規(guī)檢測(cè)

2.2 各組大鼠腎體比計(jì)算各組大鼠腎體比。腺嘌呤可造成大鼠腎功能損傷，致使腎體比增大。模型組與正常對(duì)照組比較，大鼠腎體比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義且非常顯著（P＜0．01），說(shuō)明造?？僧a(chǎn)生明顯的腎損傷；陽(yáng)性對(duì)照組和消氮顆粒高、低劑量組與模型組比較，大鼠腎體比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義且非常顯著（P＜0．01），說(shuō)明陽(yáng)性對(duì)照組和消氮顆粒各組在用藥后腎的損傷程度有所緩解；消氮顆粒高、低劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組比較，大鼠腎體比差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。結(jié)果見表2。

2.3 腎病理形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果對(duì)腎組織進(jìn)行病理學(xué)形態(tài)觀察，結(jié)果見表3。

正常對(duì)照組腎大小正常、顏色暗紅，組織學(xué)未見顯著改變，HE染色觀察發(fā)現(xiàn)系膜區(qū)正常，系膜基質(zhì)正常，小管間質(zhì)無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn)、無(wú)纖維化，腎小管正常，無(wú)萎縮，腎血管無(wú)異常，腎小球無(wú)變化。見圖1、2。

表2 各組大鼠腎體比水平對(duì)比（x±s，n=10）

模型組腎體積明顯縮小，顏色蒼白。HE染色與正常對(duì)照組比較，系膜增寬，系膜基質(zhì)明顯增多，腎小管萎縮，小管間質(zhì)可見大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，血管壁增厚，即已造成慢性腎衰。見圖3、4。

陽(yáng)性對(duì)照組與正常對(duì)照組比較，系膜區(qū)增寬，系膜細(xì)胞增多，腎組織有所改善。與模型組比較，小管間質(zhì)明顯改善，炎細(xì)胞減少，腎小管輕度萎縮，腎小球無(wú)太大變化，血管壁未見明顯改善。見圖5、6。

表3 消氮顆粒對(duì)CRF的大鼠腎臟組織的影響

高劑量組與正常對(duì)照組比較，系膜區(qū)輕度增寬，系膜基質(zhì)增多不明顯，系膜細(xì)胞微有增多；與模型組比較，小管間質(zhì)明顯改善，炎細(xì)胞減少，腎小管輕度萎縮，腎小球無(wú)太大變化，血管壁明顯改善。見圖7、8。

圖1 正常對(duì)照組（HE，100×）

圖2 正常對(duì)照組（HE，100×）

圖3 模型組（HE，100×）

圖4 模型組（HE，100×）

圖5 陽(yáng)性對(duì)照組（HE，100×）

圖6 陽(yáng)性對(duì)照組（HE，100×）

圖7 高劑量組（HE，100×）

圖8 高劑量組（HE，100×）

低劑量組與正常對(duì)照組比較，系膜區(qū)中度增寬，系膜基質(zhì)中度增多，系膜細(xì)胞中度增多；與模型組比較，小管間質(zhì)有所改善，有炎細(xì)胞浸潤(rùn)，血管壁變薄，但不如高劑量組顯著。見圖9、10。

圖9 低劑量組（HE，100×）

圖10 低劑量組（HE，100×）

3 討論

消氮顆粒為筆者所在醫(yī)院制劑，含有大黃、丹參、制附子和活性炭等7味藥，具有驅(qū)邪扶正、攻補(bǔ)兼施之效。其中主要藥物大黃味苦，性寒，有通腑泄?jié)?，攻下瀉毒導(dǎo)滯，推陳致新的功效。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，丹參提取物具有修復(fù)血管的損傷，減少細(xì)胞的凋亡和改善循環(huán)的作用。對(duì)損傷的腎組織功能，能夠有效地改善［6］。附子味辛、甘，性熱，具有氣雄行散，可升可降，走而不守；常用于腎陽(yáng)不足，或陽(yáng)虛水泛，尿少水腫。藥用活性炭比表面積大，內(nèi)孔隙結(jié)構(gòu)發(fā)達(dá)，能有效地吸附消化道內(nèi)有害物質(zhì)、氣體和細(xì)菌，促進(jìn)毒素排除。通過(guò)腎組織病理學(xué)分析，消氮顆粒對(duì)于CRF模型大鼠，能夠減少炎細(xì)胞浸潤(rùn)，抑制系膜細(xì)胞增殖，對(duì)系膜區(qū)、系膜基質(zhì)及小管間質(zhì)造成的損傷有顯著的修復(fù)和保護(hù)作用，可有效地延緩慢性腎功能衰竭。

［1］仲思，張東成，蘇彥，等.腎康注射液治療慢性腎衰竭的臨床分析［J］.中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2016，10（1）：174-175.

［2］Yokozawa T，Zheng PD，Oura H，et al.Animal model of adenineinduced chronic renal failure in rats［J］.Nephron，1986，44（3）：230-234.

［3］杜卉蓮，傅曉晴.慢性腎衰動(dòng)物的模型制備及臨床應(yīng)用［J］.中醫(yī)研究，2005，18（12）：53-57.

［4］梁靚靚，史業(yè)東，陳蘇寧.扶正排毒湯對(duì)腺嘌呤所致大鼠慢性腎功能衰竭模型的影響［J］.天津中醫(yī)藥，2010，27（5）：409-410.

［5］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：31.

［6］雷偉，周江橋，王玲瓏，等.丹參與CSA對(duì)移植腎缺血再灌注損傷防治作用的對(duì)比研究［J］.臨床外科雜志，2005，13（6）：366-368.

［2017－03－18收稿，2017－04－16修回］

［本文編輯：韓仲琪］

Effect of self-developed Xiaodan granules on kidney tissue of kidney failure rats：pathological analysis

DONG Shu－rong①，SONG Yan－li，WANG Ying－ping，et al．
①Dept．of Pharmacy，the General Hospital of Jinan Military Region，Jinan，Shandong 250031，China

Objective To investigate the effects of self－developed Xiaodan granules on renal tissue in rat model of kidney failure by pathological morphology analysis．M ethods The chronic renal failure rat model was induced by adenine（200mg/kg）for 30d irrigation．The model rats were randomly divided into model group，as well group of Xiandan granules high and low dose（3．96g/kg，0．99g/kg），and the positive control group（given urine poison granules 2．09g/kg），n=10 foreach．The normal group（n=10）and model groups were given the same dosage of purified water，Xiaodan granules used in irrigation treatment for 28d，the effects of Xiandan granules on the pathology of kidney，including urine routine exam．，kidney body ratio and kidney failure status in the rat model were observed．Results Compared with the model group，the positive control group，the high and low dose group of Xiandan granules could improve the urine routine exam．index of rat kidney failure，the high and low dose of Xiandan granules which had statistically significant ratio compared with the model group，and the renal body ratio in rats got very significantly improved（P＜0．01）．Wha's more among above groups pathological morphology had significant change．Conclusion Xiandan granules could have obvious therapeutic effect on chronic renal failure．

Xiaodan granules；Chronic renal failure；Urine routines examination；Renal volume ratio；Pathology biopsy

10．14172/j．issn1671－4008．2017．08．024

250031山東濟(jì)南，原濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科（董淑榮，畢云生，張淑瑜，于燕莉，徐建江）；250355山東濟(jì)南，山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院（宋艷麗，王英萍）

徐建江，Email：xjj8605＠163．com

R692．5：R－33

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