李兆坤， 王鳳寰， 陳 彬， 蔣思萍， 徐愛(ài)國(guó)

(1.北京工商大學(xué) 食品學(xué)院, 北京 100048; 2.西藏自治區(qū)高原生物研究所, 西藏 拉薩 850001)

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青藏高原珍稀大型真菌亞?wèn)|木耳菌絲發(fā)酵條件研究

李兆坤1,2， 王鳳寰1，*， 陳 彬2，*， 蔣思萍2， 徐愛(ài)國(guó)2

(1.北京工商大學(xué) 食品學(xué)院, 北京 100048; 2.西藏自治區(qū)高原生物研究所, 西藏 拉薩 850001)

為了更好地開(kāi)發(fā)利用西藏珍稀大型真菌亞?wèn)|木耳，對(duì)亞?wèn)|木耳菌絲生長(zhǎng)和次級(jí)代謝條件進(jìn)行研究?？疾炝瞬煌囵B(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件對(duì)亞?wèn)|木耳菌絲生長(zhǎng)速度、生物量和次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量的影響。結(jié)果表明，可溶性淀粉、酵母浸粉和CaCl2分別為亞?wèn)|木耳生長(zhǎng)代謝的較佳碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽，維生素B1、B2對(duì)菌絲生長(zhǎng)無(wú)明顯促進(jìn)作用。較佳培養(yǎng)溫度為26 ℃，較佳培養(yǎng)時(shí)間為63 d，菌絲生長(zhǎng)較佳初始pH值為7.0，較佳次級(jí)代謝初始pH值為6.0。HPLC圖譜分析結(jié)果表明，次級(jí)代謝產(chǎn)物種類多達(dá)200余種，其中初始pH值和溫度條件對(duì)次級(jí)代謝多樣性的影響較為明顯。

大型真菌； 亞?wèn)|木耳； 培養(yǎng)條件； 次級(jí)代謝； HPLC分析

大型真菌是菌物界真菌門肉眼可見(jiàn)的一類真菌，菌物種類繁多，全世界約有150多萬(wàn)種，按功能一般分為藥用真菌和食用真菌[1]。有一些大型真菌(如猴頭菇，香菇等)既可食用又具有醫(yī)療保健作用，即為食藥兼用真菌[2]。從工業(yè)生產(chǎn)角度來(lái)說(shuō)，研究食藥用大型真菌的發(fā)酵和次級(jí)代謝，對(duì)于開(kāi)發(fā)菌絲體粉末保健品、食品添加劑以及含有次級(jí)代謝產(chǎn)物的藥品具有重要意義。

亞?wèn)|木耳是一種珍稀的食藥兼用野生經(jīng)濟(jì)真菌，因產(chǎn)于西藏亞?wèn)|縣而得名，近幾年備受關(guān)注。亞?wèn)|木耳生長(zhǎng)在峨眉薔薇(Rosa omeiensis)科枯樹(shù)枝上，經(jīng)鑒定屬于黑耳屬(Exidiasp.)真菌[3]，且味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富，被譽(yù)為“植物肉、素中之葷”。2012年，亞?wèn)|木耳的市售價(jià)格已達(dá)到4 000元/kg，成為當(dāng)?shù)鼐用裨鍪盏囊粋€(gè)重要渠道，但同時(shí)也出現(xiàn)了過(guò)渡采挖現(xiàn)象，導(dǎo)致其產(chǎn)量逐漸下降。為了更好地利用該野生菌資源，對(duì)亞?wèn)|木耳菌絲進(jìn)行人工培養(yǎng)并進(jìn)一步研究其活性次級(jí)代謝，具有重要意義。

目前尚未見(jiàn)亞?wèn)|木耳菌絲培養(yǎng)研究的相關(guān)報(bào)道。本研究擬考察碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子、培養(yǎng)基初始pH值、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間等條件對(duì)亞?wèn)|木耳菌絲生長(zhǎng)和次級(jí)代謝的影響，以期獲得了亞?wèn)|木耳快速生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件以及適宜的菌絲次級(jí)代謝培養(yǎng)條件；利用高效液相色譜分析技術(shù)對(duì)亞?wèn)|木耳菌絲次級(jí)代謝產(chǎn)物多樣性進(jìn)行定性分析。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

菌種，亞?wèn)|木耳(Exidiasp.)，從西藏亞?wèn)|縣采集長(zhǎng)有亞?wèn)|木耳子實(shí)體的樹(shù)枝，通過(guò)無(wú)菌操作將子實(shí)體表面消毒、切成碎片后，轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基上，25 ℃下培養(yǎng)出無(wú)污染、生長(zhǎng)健壯的菌絲體，經(jīng)多次純化獲得原始菌種材料[4]。經(jīng)分子生物學(xué)鑒定亞?wèn)|木耳屬于黑耳屬(Exidiasp.)真菌。

葡萄糖、麥芽糖、可溶性淀粉、乳糖、蔗糖、酵母浸粉、牛肉膏、蛋白胨、水解乳蛋白均為生化試劑，北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；(NH4)2SO4、KNO3、KCl、CaCl2、ZnCl2、MgSO4、FeSO4、Fe2(SO4)3均為分析純，北京化工廠；維生素B1、B2均為實(shí)驗(yàn)試劑；乙腈(色譜純)，賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司；乙酸乙酯(分析純)、甲醇(分析純)，北京化工廠；馬鈴薯、超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

BSA- CW型電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；YXQ- LS- 100SII型立式壓力蒸汽滅菌器，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司；DL- CJ- 2N型潔凈工作臺(tái)，蘇凈集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；LRH- 250F型生化培養(yǎng)箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；DHG- 9246A型真空干燥箱，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；RE- 5205型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；KQ5200E型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；LaboStar 7 TWF UV型超純水器，Evoqua Water Technologies Company；1100型高效液相色譜儀(四元梯度泵，檢測(cè)器，Agilent1100工作站)，Agilent公司；Symmetry C18型色譜柱，Waters公司。

1.3 培養(yǎng)基

平板培養(yǎng)基：PDA(馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基)[5]。

種子培養(yǎng)基：改良的PD(馬鈴薯葡萄糖)培養(yǎng)基，在馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入酵母粉0.2%，MgSO40.1%，維生素B110 mg/L[6]。

基本培養(yǎng)基：葡萄糖20 g/L，酵母粉2 g/L，KH2PO41 g/L，MgSO41 g/L，維生素B10.01 g/L，固體培養(yǎng)基含有瓊脂1.5%[7]。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 培養(yǎng)基因素對(duì)菌絲生長(zhǎng)和次級(jí)代謝影響實(shí)驗(yàn)

分別以可溶性淀粉、蔗糖、麥芽糖、乳糖作為碳源，替換基本培養(yǎng)基(固體)中的葡萄糖[8]，于平板中間接種約0.5 cm見(jiàn)方的菌塊，26 ℃下靜置培養(yǎng)。一周后每3 d測(cè)量菌絲半徑一次，并觀察菌絲形態(tài)，考察不同碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)速率的影響。在500 mL三角瓶中，配制200 mL基本培養(yǎng)基，分別以可溶性淀粉、蔗糖、麥芽糖、乳糖作為碳源，替換基本培養(yǎng)基(液體)中的葡萄糖，自然pH值，于26 ℃恒溫箱內(nèi)靜置培養(yǎng)55 d，考察不同碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)量及次級(jí)代謝的影響。

分別以牛肉膏、蛋白胨、水解乳蛋白、(NH4)2SO4，KNO3作為氮源，替換基本培養(yǎng)基(固體)中的酵母粉[9]，培養(yǎng)及測(cè)量方法同碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響實(shí)驗(yàn)，考察不同氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)速率的影響。分別以牛肉膏、蛋白胨、硫酸銨、硝酸鉀作為氮源替換基本培養(yǎng)基(液體)中的酵母粉，其他條件同上，考察不同氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)量及次級(jí)代謝的影響。

分別以KCl、CaCl2、ZnCl2、FeSO4、Fe2(SO4)3，替換基本培養(yǎng)基(液體)中MgSO4，其他條件同上，考察不同無(wú)機(jī)鹽對(duì)菌絲生長(zhǎng)量及次級(jí)代謝的影響。

配制PDA培養(yǎng)基，加入不同生長(zhǎng)因子(維生素B1、B2)，無(wú)生長(zhǎng)因子培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。于平板中央接種約0.5 cm見(jiàn)方的菌塊，26 ℃下靜置培養(yǎng)。1周后每3 d測(cè)量菌絲半徑1次，并觀察菌絲形態(tài)。實(shí)驗(yàn)均作3組平行。

1.4.2 環(huán)境因素對(duì)菌絲生長(zhǎng)及次級(jí)代謝影響實(shí)驗(yàn)

在500 mL三角瓶中，加入200 mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基，用1 mol/L的HCl溶液或1 mol/L NaOH溶液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基初始pH值分別為4.0，5.0，6.0，7.0，8.0五個(gè)梯度，每個(gè)梯度設(shè)置兩組平行，接種菌齡30 d菌種。置于26 ℃恒溫箱中靜置培養(yǎng)55 d，考察培養(yǎng)基初始pH值對(duì)菌絲生長(zhǎng)及其次級(jí)代謝的影響。

分別設(shè)置20，22，24，26，28，30 ℃五個(gè)溫度梯度，自然pH值，其他條件同初始pH值，考察溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)及次級(jí)代謝的影響。

利用米飯作為固體培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵。設(shè)置時(shí)間為35，42，49，56，63 d五個(gè)時(shí)間梯度，室溫下靜置培養(yǎng)，考察不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)次級(jí)代謝的影響。以上實(shí)驗(yàn)均作3組平行。

1.4.3 菌絲收集及代謝產(chǎn)物處理

菌絲收集：采用6層紗布過(guò)濾并剝落黏質(zhì)菌絲的方法。菌絲自然風(fēng)干至質(zhì)量不變時(shí)，稱重。

菌絲發(fā)酵液的處理：用與發(fā)酵液同等體積的乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯相進(jìn)行減壓濃縮，得到濃縮液。待溶劑揮干，用50～60 ℃沸程石油醚處理，去除低極性次級(jí)代謝物(油脂類)，38 ℃真空干燥36 h后稱重。將干菌絲用5 mL甲醇浸泡后超聲(200 W，10 min)提取3次，得到的提取液濃縮后與發(fā)酵濃縮液合并。

固體發(fā)酵基質(zhì)處理：用甲醇- 氯仿- 乙酸乙酯混合溶液 (三者體積比為1∶1∶1)浸泡基質(zhì)，超聲浸提15 min，重復(fù)3次。浸提液經(jīng)減壓濃縮得到濃縮液，并用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，乙酸乙酯相經(jīng)減壓濃縮得到代謝產(chǎn)物粗提取物。

1.4.4 菌絲發(fā)酵次級(jí)代謝產(chǎn)物高效液相分析

根據(jù)次級(jí)代謝產(chǎn)物質(zhì)量加入相應(yīng)體積的甲醇進(jìn)行溶解，使代謝產(chǎn)物樣品質(zhì)量濃度均為0.02 g/mL。每個(gè)樣品中加入50 μL質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的亞?wèn)|木耳次級(jí)代謝產(chǎn)物YE- 1(純度>95%)作為參照物。樣品溶液經(jīng)0.45 μm有機(jī)膜過(guò)濾后進(jìn)行液相色譜分析[10]。

C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)，流動(dòng)相乙腈/水體系(乙腈比例變化為：0～40 min 5%～30%，40～70 min 30%～54%，70～86 min 54%～74%，86～92 min 74%～78%，92～105 min 90%～100% ，105～125 min 100%)，流速0.8 mL/min、檢測(cè)波長(zhǎng)235 nm、柱溫30 ℃、進(jìn)樣量10 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同因素對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

2.1.1 不同培養(yǎng)基成分對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

在菌絲生長(zhǎng)過(guò)程中，前5～7 d為環(huán)境適應(yīng)期，生長(zhǎng)較緩慢，7 d后大多數(shù)菌絲已萌發(fā)進(jìn)入生長(zhǎng)狀態(tài)。葡萄糖和麥芽糖作為簡(jiǎn)單碳源，對(duì)菌絲快速生長(zhǎng)最為有利，但最終菌絲強(qiáng)度稍弱，生物量較低，而可溶性淀粉作為大分子底物，可為菌絲生長(zhǎng)提供長(zhǎng)效碳源，更利于生物量的積累。在液體培養(yǎng)基中，以可溶性淀粉作為碳源獲得最大生物量，為0.427 g(見(jiàn)表1)。

表1 不同碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

++++菌絲強(qiáng)度強(qiáng)，+++菌絲強(qiáng)度較強(qiáng)，++菌絲強(qiáng)度較弱，下表同。菌絲強(qiáng)弱包括菌絲粗細(xì)和菌絲致密程度。

菌絲在不同氮源中生長(zhǎng)速度差異較大，菌絲生長(zhǎng)速度由快到慢依次為酵母粉、硝酸鉀、牛肉膏、蛋白胨、水解乳蛋白，菌絲強(qiáng)弱依次為酵母浸粉=蛋白胨>硫酸銨>牛肉膏≥水解乳蛋白>硝酸鉀，其中在硝酸鉀為氮源的平板瓊脂培養(yǎng)基上，菌絲幾乎呈透明態(tài)，極其稀疏細(xì)弱。液體發(fā)酵實(shí)驗(yàn)同樣表明酵母粉是亞?wèn)|木耳菌絲培養(yǎng)的最適氮源。培養(yǎng)到48 d時(shí)，酵母和牛肉膏培養(yǎng)基中菌絲最先出面，到55 d停止培養(yǎng)時(shí)，酵母浸粉培養(yǎng)基中菌絲已覆蓋整個(gè)液面，培養(yǎng)基顏色呈深褐色，在此氮源條件下菌絲達(dá)到最大干重為0.294 g(見(jiàn)表2)。

表2 不同氮源時(shí)菌絲生長(zhǎng)情況

*表示截止到最終記錄日期菌絲未長(zhǎng)滿。

在CaCl2培養(yǎng)基中達(dá)到最大生物量為0.292 g，相對(duì)于其他實(shí)驗(yàn)金屬離子來(lái)說(shuō)， Ca2+最適合亞?wèn)|木耳菌絲生長(zhǎng)。而當(dāng)培養(yǎng)基中加入Fe、Zn微量元素時(shí)，菌絲不生長(zhǎng)(見(jiàn)表3)，一種可能原因是微量元素含量過(guò)高抑制菌絲生長(zhǎng)，另一種可能是兩種微量元素本身對(duì)菌絲有抑制作用，可通過(guò)加入不同濃度微量元素進(jìn)一步驗(yàn)證。

表3 不同無(wú)機(jī)鹽下的菌絲質(zhì)量

有文獻(xiàn)報(bào)道，B族維生素對(duì)擔(dān)子菌菌絲生長(zhǎng)多有促進(jìn)作用[11-13]，本實(shí)驗(yàn)測(cè)定維生素B1、B2對(duì)亞?wèn)|木耳生長(zhǎng)的影響。在亞?wèn)|木耳菌絲培養(yǎng)過(guò)程中，兩種B族維生素作為生長(zhǎng)因子，菌絲長(zhǎng)勢(shì)相差不大(見(jiàn)圖1)，因此認(rèn)為維生素B1、B2對(duì)亞?wèn)|木耳菌絲生長(zhǎng)速度和菌絲強(qiáng)弱沒(méi)有影響。

圖1 維生素B1、B2培養(yǎng)基中菌絲生長(zhǎng)趨勢(shì)Fig.1 Growth trend of hyphae in culture mediums including vitamin B1 and B2

2.1.2 環(huán)境因素對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

在pH值小于7.0時(shí)，菌絲生長(zhǎng)量呈遞增趨勢(shì)，pH值為7.0時(shí)，菌絲生長(zhǎng)量最大，pH值為8.0時(shí)菌絲量略有下降，因此pH值7.0為菌絲生長(zhǎng)的最適宜初始pH值(見(jiàn)表4)。

根據(jù)觀察，菌絲生長(zhǎng)到20 d，不同溫度條件下的生長(zhǎng)狀態(tài)已有明顯區(qū)別。24，26，28 ℃時(shí)液面下菌絲已開(kāi)始結(jié)成大塊絮狀，22 ℃時(shí)菌絲略有結(jié)絮現(xiàn)象，較小成片，而30 ℃時(shí)菌絲只是在原菌種基礎(chǔ)上生長(zhǎng)少量。由此可知，亞?wèn)|木耳在26 ℃條件下最適宜生長(zhǎng)(見(jiàn)表4)。

表4 不同初始pH值和溫度下菌絲質(zhì)量

2.2 不同因素對(duì)菌絲次級(jí)代謝的影響

2.2.1 不同培養(yǎng)基成分對(duì)菌絲次級(jí)代謝的影響

可溶性淀粉、酵母浸粉、CaCl2分別為獲得最多次級(jí)代謝產(chǎn)物的碳、氮源和無(wú)機(jī)鹽(見(jiàn)表5)。與菌絲生物量結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)，該結(jié)果與菌絲生物量結(jié)果一致，說(shuō)明菌絲生長(zhǎng)狀況好時(shí)，其次級(jí)代謝也越充分。

2.2.2 環(huán)境因素對(duì)菌絲次級(jí)代謝的影響

初始pH值為6.0條件下次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量最大，與菌絲生物量結(jié)果不一致(見(jiàn)表4、表6)，不同初始pH值時(shí)的菌絲生物量和次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量結(jié)果表明，中性偏堿性條件更適合亞?wèn)|木耳菌絲生長(zhǎng)，中性偏酸性條件更適合菌絲代謝。菌絲在26 ℃時(shí)最大次級(jí)代謝產(chǎn)物量為0.063 g(見(jiàn)表6)，與菌絲生物量結(jié)果一致，因此，26 ℃為亞?wèn)|木耳最適生長(zhǎng)和次級(jí)代謝溫度。

表5 不同營(yíng)養(yǎng)條件下次級(jí)代謝產(chǎn)物質(zhì)量

表6 不同環(huán)境條件下次級(jí)代謝產(chǎn)物質(zhì)量

時(shí)間因素中，利用熟米飯基質(zhì)對(duì)大型真菌進(jìn)行固體發(fā)酵培養(yǎng)，避免液體培養(yǎng)中由于時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而導(dǎo)致的水分大量蒸發(fā)，此方法所得產(chǎn)物稱為菌質(zhì)。真菌在該基質(zhì)上可快速布滿并進(jìn)行代謝，產(chǎn)生各種生理活性物質(zhì)，同時(shí)其胞外酶系又可以對(duì)基質(zhì)中的化學(xué)成分進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，從而使菌質(zhì)中有豐富的化學(xué)成分[14]。在考察時(shí)間范圍內(nèi)，菌絲代謝物產(chǎn)量隨時(shí)間增加而增加，雖然63 d內(nèi)次級(jí)代謝產(chǎn)物量呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，但培養(yǎng)到63 d時(shí)，基質(zhì)水分已嚴(yán)重下降，不利于菌絲繼續(xù)生長(zhǎng)代謝。利用大米發(fā)酵亞?wèn)|木耳，63 d為較合適的培養(yǎng)時(shí)間。

2.3 菌絲次級(jí)代謝HPLC圖譜分析

對(duì)不同環(huán)境因素下次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行HPLC圖譜分析，在相同色譜條件下比較其代謝產(chǎn)物差異性。取各單因素實(shí)驗(yàn)中次級(jí)代謝產(chǎn)物質(zhì)量最多的樣品作為研究對(duì)象，即時(shí)間單因素實(shí)驗(yàn)，取49，56，63 d條件下得到的3組樣品作為分析對(duì)象；初始pH值單因素實(shí)驗(yàn)，取pH值為5.0，6.0，7.0條件下得到的3組樣品作為分析對(duì)象；溫度單因素實(shí)驗(yàn)，取24，26，28 ℃條件下得到的3組樣品作為分析對(duì)象。

在235 nm波長(zhǎng)處有紫外光吸收的亞?wèn)|木耳次級(jí)代謝產(chǎn)物十分豐富(見(jiàn)表7)，200 mL發(fā)酵液提取出的次級(jí)代謝產(chǎn)物中，高效液相色譜可檢測(cè)到多達(dá)200余種化合物。溫度因素中26 ℃條件下峰數(shù)量最多；初始pH值為7.0條件下峰數(shù)量最多；時(shí)間因素中35 d和42 d時(shí)峰數(shù)量分別為167個(gè)和186個(gè)，與表7中列出的49 d的202個(gè)峰數(shù)量相差較大，而56 d和63 d的樣品峰數(shù)量與49 d的相差不大，因此，可推知菌絲在49 d時(shí)代謝已較為充分。

以亞?wèn)|木耳發(fā)酵產(chǎn)物中分離純化得到的化合物YE- 1作為標(biāo)準(zhǔn)品，其峰作為參照峰，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間α(公式α=tdi/tds,其中tdi為不定峰i的保留時(shí)間，tds為參照物的保留時(shí)間)，由此可得到同一因素不同水平下圖譜中相同峰信息[15]。

以相似峰數(shù)量與各條件中最多峰數(shù)的比值作為相似峰百分比(見(jiàn)表8)，用于說(shuō)明同一因素不同水平間代謝差異性。從表8中可知，溫度單因素中相同峰百分比為29.6%，初始pH值單因素中相同峰百分比為21.5%，其代謝差異性相對(duì)較大，說(shuō)明初始pH值和溫度因素對(duì)亞?wèn)|木耳次級(jí)代謝多樣性影響較為顯著。

HPLC圖譜能夠在一定程度上反映不同因素、水平下代謝產(chǎn)物的多樣性，從而對(duì)大型真菌培養(yǎng)及代謝產(chǎn)物的獲得具有一定指導(dǎo)意義。由于本實(shí)驗(yàn)中樣品為發(fā)酵原產(chǎn)物，化合物種類數(shù)量龐大，進(jìn)行圖譜分析有一定困難，因此，采用HPLC法只能實(shí)現(xiàn)定性分析，且不可避免地存在主觀誤差[16]。

表7 不同環(huán)境因素下所有峰數(shù)量

表8 不同影響因素下相同峰數(shù)量及與總峰數(shù)比值

3 結(jié) 論

探索了食藥兩用大型真菌亞?wèn)|木耳菌絲生長(zhǎng)代謝的優(yōu)化條件。研究表明，菌絲生長(zhǎng)和代謝的優(yōu)化條件為：碳源為可溶性淀粉，氮源為酵母浸粉，無(wú)機(jī)鹽為CaCl2，溫度為26 ℃，菌絲代謝初始pH值為6.0，菌絲生長(zhǎng)初始pH值為7.0，時(shí)間為63 d。溫度和初始pH值對(duì)亞?wèn)|木耳菌絲次級(jí)代謝差異性影響較為顯著，因此，通過(guò)適當(dāng)控制亞?wèn)|木耳的培養(yǎng)溫度和初始pH值有利于獲得豐富的次級(jí)代謝產(chǎn)物。文獻(xiàn)報(bào)道，亞?wèn)|木耳具有一定的寄主專一性[3]。實(shí)驗(yàn)表明，亞?wèn)|木耳生長(zhǎng)周期漫長(zhǎng)，因此要獲得其適宜的培養(yǎng)條件，還需要進(jìn)一步探究。

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(責(zé)任編輯：葉紅波)

Study on Fermentation Conditions of Rare Yadong Edible Fungus in Tibetan Plateau

LI Zhaokun1,2, WANG Fenghuan1,*, CHEN Bin2,*, JIANG Siping2, XU Aiguo2

(1.BeijingTechnologyandBusinessUniversity,Beijing100048,China; 2.TibetPlateauInstituteofBiology,Lasa850001,China)

In order to utilize and develop the rare Yadong edible fungus(Exidiasp.) better, the growth and metabolism culture conditions of the mycelium were explored. Effects of the culture mediums and the different conditions on mycelium growth rate, biomass, and secondary metabolites production were investigated. The results showed that glucose was the most suitable carbon source for mycelial growth, and soluble starch was the most suitable carbon source to obtain maximum biomass and metabolic product yield. Yeast extract was the most suitable nitrogen source for growth and metabolism. CaCl2was the optimal inorganic salt while vitamin B1and B2had no significant effects on promoting mycelial growth. HPLC fingerprint results showed that compounds of secondary metabolites were as many as 200 kinds and initial pH and temperature factors had more obvious influences on the secondary metabolic diversity.

edible fungus; Yadong edible fungus; culture conditions; secondary metabolism; HPLC analysis

10.3969/j.issn.2095-6002.2017.02.008

2095-6002(2017)02-0051-07

李兆坤，王鳳寰，陳彬，等. 青藏高原珍稀大型真菌亞?wèn)|木耳菌絲發(fā)酵條件研究[J]. 食品科學(xué)技術(shù)學(xué)報(bào)，2017,35(2):51-57. LI Zhaokun, WANG Fenghuan, CHEN Bin, et al. Study on fermentation conditions of rare Yadong edible fungus in Tibetan plateau[J]. Journal of Food Science and Technology, 2017,35(2):51-57.

2016-07-05

2014年西藏自治區(qū)科技計(jì)劃應(yīng)用基礎(chǔ)研究項(xiàng)目“高原地區(qū)雙孢菇栽培技術(shù)研究與菌絲發(fā)酵及次生代謝活性分析”。

李兆坤，女，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称飞锛夹g(shù)；

*王鳳寰，男，副教授，博士，主要從事食品生物技術(shù)方面的研究，通信作者；

*陳 彬，男，副研究員，博士，主要從事天然產(chǎn)物開(kāi)發(fā)方面的研究，通信作者。

TS255; TS201.3

A