鄧燕飛，夏愛軍，潘建林，李躍華，柏如發(fā)，朱清順

（1.江蘇省淡水水產(chǎn)研究所，江蘇 南京 210017；2.江蘇省農(nóng)業(yè)種質(zhì)資源保護與利用平臺，江蘇 南京 210014）

中華絨螯蟹家系規(guī)?；瘶?gòu)建初探

鄧燕飛1，2，夏愛軍1，潘建林1，李躍華1，柏如發(fā)1，朱清順1

（1.江蘇省淡水水產(chǎn)研究所，江蘇 南京 210017；2.江蘇省農(nóng)業(yè)種質(zhì)資源保護與利用平臺，江蘇 南京 210014）

從中華絨螯蟹蘇南養(yǎng)殖群體、長江干流野生群體和蘇北里下河養(yǎng)殖群體中選擇100組大規(guī)格親蟹（雌蟹175 g以上，雄蟹250 g以上），進行家系規(guī)?；瘶?gòu)建，成功定向構(gòu)建家系169個，其中全同胞家系25個，半同胞家系144個，家系構(gòu)建成功率84.5%，選擇40個發(fā)育良好的家系進行育苗，最終獲得23個家系蟹苗。

中華絨螯蟹；大規(guī)格；家系規(guī)?；瘶?gòu)建

中華絨螯蟹俗稱河蟹，目前河蟹產(chǎn)業(yè)年產(chǎn)值已超500億，已成為我國重要的水產(chǎn)支柱產(chǎn)業(yè)[1]。河蟹種質(zhì)混雜和退化嚴重已是不爭的事實[2-3]，積極開展河蟹遺傳育種工作，選育出優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)抗逆性強的新品種，實現(xiàn)保護優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源和滿足生產(chǎn)上的良種需要，以確保我國河蟹產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展[4-7]。家系選育是一種有效的遺傳育種手段，目前已成功運用于中國對蝦、羅氏沼蝦等甲殼動物新品種選育[8-9]，長江水系、遼河水系河蟹已開展家系選育[10-14]，筆者基于2008年成功突破長江水系大規(guī)格河蟹家系土池定向構(gòu)建，2012年分別選擇來源不同的長江水系河蟹，探索大規(guī)格河蟹的家系規(guī)?；瘶?gòu)建，至2013年2月26日，總計成功定向構(gòu)建家系169個，其中全同胞家系25個，半同胞家系144個，家系構(gòu)建成功率84.5%，選擇其中40個胚胎發(fā)育良好的家系進行育苗，最終獲得23家系蟹苗?，F(xiàn)將大規(guī)格親蟹規(guī)?；蚁禈?gòu)建進行總結(jié)，為今后開展河蟹遺傳育種提供新的遺傳材料和技術(shù)積累。

1 材料與方法

1.1 親蟹的選擇和標記

2012年11 月，外部形態(tài)特征參照GB/T 19783-2005中華絨螯蟹，從長江水系河蟹蘇南養(yǎng)殖群體、長江干流野生群體和蘇北里下河養(yǎng)殖群體中，選擇體質(zhì)健壯、無病無傷、性腺發(fā)育良好的大規(guī)格河蟹作為家系構(gòu)建的親蟹，雌蟹175 g以上，雄蟹250 g以上，雌雄比例2∶1（見表1）。用扎帶穿過印有字母和數(shù)字的白皮管固定在河蟹螯足基部，對不同來源的親蟹進行物理標記。

1.2 家系構(gòu)建設(shè)施

定制特殊的連體長網(wǎng)箱作為家系構(gòu)建設(shè)施，網(wǎng)箱設(shè)計為兩行，每行各50個，計100個網(wǎng)箱隔間（規(guī)格0.6 m×0.6 m×1.5 m），每個網(wǎng)箱隔間設(shè)有獨立的箱蓋。長網(wǎng)箱用竹竿和鐵絲固定架設(shè)于面積為2×667 m2的土池中部，網(wǎng)箱底部用磚塊固定與池底相接。

表1 2012年構(gòu)建長江水系河蟹家系親蟹來源情況

1.3 家系規(guī)模化構(gòu)建

親蟹入池前7 d，往土池注入0.5 m深、用80目篩絹過濾的鹽度為22左右的海水，用50 g/m2含有效氯30%左右的漂白粉進行消毒。親蟹經(jīng)20 g/m3甲醛消毒30 min后，各群體內(nèi)親蟹按♀∶♂=2∶1進行配組，做好配組記錄，將每組親蟹放入網(wǎng)箱隔間中，進行強化培育和交配。

1.4 抱卵蟹的越冬

2012年12月22日抽干池水，將抱卵雌蟹和完成配對的雄蟹移出網(wǎng)箱，未抱卵雌蟹繼續(xù)留箱配對。至2013年2月26日抽干池水，移除雄蟹，雌蟹原池越冬，注入經(jīng)消毒鹽度為22左右的海水，根據(jù)氣溫變化逐漸加高水位并配備水車式增氧機，加強越冬期的水質(zhì)和營養(yǎng)管理，確保抱卵蟹的越冬成活率。

1.5 家系的定向繁育準備

采用80目的篩絹網(wǎng)縫制成一個特殊網(wǎng)隔，可將面積約0.5×667 m2的土池分割為2列共40個相連的育苗隔段，每個隔斷規(guī)格約為3 m×3 m。網(wǎng)隔底部埋入池底和池壁，網(wǎng)隔上部用鐵絲穿引固定。每個育苗隔段配備3～5個充氣頭，氣頭貼近池底?！胺庞住鼻?0 d，注入用80目篩絹過濾的鹽度為22左右的海水，有效水深1.5 m，用50 g/m3含有效氯30%的漂白粉進行消毒，待余氯消失后，按說明書施用生物有機肥并接種富含小球藻不帶原生動物的“肥水”，使池水略帶茶色。

1.6 家系的定向繁育

2013年4月19日，選擇活力強的、胚胎發(fā)育同步的抱卵蟹40只，按照1個育苗隔段放1只抱卵蟹的原則，將抱卵蟹裝籠進行定向“放幼”?！胺庞住苯Y(jié)束后移出雌蟹。Z1—Z2不喂料，Z2—大眼幼體淡化前全程投喂輪蟲，每天根據(jù)吃食情況加減輪蟲投喂量，同時控制好水質(zhì)和增氧。

1.7 家系的淡化

燈光誘捕大眼幼體后，放入40目的篩絹網(wǎng)箱（規(guī)格1.5 m×1.5 m×1.5 m），按照1個網(wǎng)箱放1個家系大眼幼體的原則進行淡化，淡化期間投喂輪蟲和淡水枝角類。

2 結(jié)果

2.1 家系規(guī)模化構(gòu)建

2012年12月22日，將抱卵雌蟹移出網(wǎng)箱原池越冬，未抱卵雌蟹繼續(xù)留箱配對，至2013年2月26日將抱卵雌蟹移出網(wǎng)箱，經(jīng)統(tǒng)計共成功定向構(gòu)建家系169個，其中全同胞家系25個，半同胞家系144個，家系構(gòu)建成功率84.5%。

2.2 抱卵蟹的越冬

前后共選擇164只帶有標記、附肢齊全、活力強的抱卵蟹在交配池原池越冬，至2013年4月19日共獲活力強的、卵塊發(fā)育良好的抱卵蟹124只，越冬成活率達75.6%，其中蘇南養(yǎng)殖群體的越冬成活率最高達83.2%，不同來源親蟹越冬成活具體情況見表2。

表2 不同來源親蟹越冬成活率比較

2.3 家系的定向繁育

40個育苗隔斷中的大眼幼體經(jīng)燈光誘后，根據(jù)產(chǎn)苗量最終選用23個家系淡化出苗（選擇各家系產(chǎn)苗量2.2萬尾以上，其中全同胞家系16個，半同胞家系7個），家系產(chǎn)苗量最多的達22.4萬尾，產(chǎn)苗量最少的為2.2萬尾，不同家系產(chǎn)苗情況見表3。

3 討論

3.1 家系的規(guī)?；瘶?gòu)建

3.1.1 親蟹的標記 自2008年開始構(gòu)建河蟹家系以來，筆者先后采用不同顏色繩帶、不同顏色扎帶、扎帶與印有數(shù)字和字母的白皮管相結(jié)合進行親蟹標記，從歷年的使用情況來看，此次標記方法最為準確有效，但操作上仍存在不當之處，一是每只蟹只標記了一只螯足，導致個別親蟹標記的螯足脫落后無法辨認。二是扎帶扣好后，有的扎帶末端留的太長，影響螯足活動，特別是親蟹取食。

表3 家系產(chǎn)苗情況（單位萬尾）

3.1.2 配對設(shè)施 采用連體網(wǎng)箱作為家系規(guī)模化構(gòu)建的配對場所，且箱底與池底相接，使得每個隔間盡可能模擬土池環(huán)境，與小土坑[10]相比，占地面積小，而與單個網(wǎng)籠[10]相比活動空間更大。連體網(wǎng)箱把所有親蟹集中在一起，方便隨時檢查親蟹攝食、配對和抱卵情況，若用育苗隔段作為交配設(shè)施雖活動空間大，但不方便進行觀察親蟹活動情況。每個網(wǎng)箱隔間盡管有獨立的箱蓋防止親蟹逃逸，但投喂極為不便。因此，今后用土池進行家系規(guī)?；瘶?gòu)建則可采取每個隔間無蓋，安裝鈣塑板倒檐即可，如有條件可使用孵化桶則更方便。

3.1.3 配對期間的管理 筆者歷年采用大規(guī)格親蟹繁育的實踐證明，大規(guī)格親蟹配對難、配對時間長。2012年12月22日、2013年2月26日分別抽干池水移出雄蟹和抱卵蟹，親蟹從入箱到出箱時間跨度大，較常規(guī)親蟹交配時間長。在規(guī)?；瘶?gòu)建家系過程中，采用鐵絲將植物性和動物性餌料串起來投飼，根據(jù)吃食情況靈活掌握投飼量和投喂頻率，以防殘餌敗壞水質(zhì)和確保親蟹營養(yǎng)充足。

3.2 家系的越冬

本次規(guī)模化家系構(gòu)建過程中，為確保抱卵蟹的越冬成活率，在越冬期間，采取不斷加深水位以防水溫劇烈變化、開啟耕水機防止池面凍住、適時換水和適量投餌的措施，確保越冬期間池水水質(zhì)良好，親蟹營養(yǎng)均衡，使親蟹的越冬成活率達75.6%。不同來源的親蟹越冬成活率不同，其中以蘇南養(yǎng)殖群體成活率最高、蘇北里下河養(yǎng)殖群體次之，長江干流野生群體最低，而構(gòu)建家系期間投飼及其他管理完全一致，這可能與不同來源親蟹未選擇為親蟹前的營養(yǎng)積累有關(guān)[15]。

3.3 家系的定向繁育

3.3.1 “肥水”布苗 結(jié)合2009年、2011年家系育苗經(jīng)驗，在布苗前“肥水”，布苗時池水呈茶綠色，經(jīng)鏡檢海鏈藻和小球藻為優(yōu)勢種。Z1—Z2期間不喂料，大量的原池餌料生物確保了Z1變Z2的營養(yǎng)需要，順利度過Z1變Z2這一難關(guān)[16-20]。因此前期“肥水”較“清水”布苗為有優(yōu)，且營養(yǎng)更均衡?！扒逅辈济巛喯x投喂量難以掌握，若輪蟲投喂不足則影響溞狀幼體發(fā)育，若輪蟲投喂過多反而致使輪蟲與溞狀幼體競爭生存空間。

3.3.2 家系苗產(chǎn)量 此次家系育苗過程中，從Z1到Z2較為順利，幼體數(shù)量多。但之后因為輪蟲投喂量不足，導致幼體之間相互殘殺，池水透明度越來越高，出現(xiàn)池水起泡等水質(zhì)惡化現(xiàn)象，終致各家系產(chǎn)苗不高，較2009年、2011年產(chǎn)量低[10]。此次規(guī)?；蚁涤缫驔]有配備用水源，只能相鄰育苗池取水注入，且育苗隔段間的篩絹網(wǎng)在后期已完全被池水雜物堵塞，各段間水體無法流通，給換水帶來極大困難。今后如仍采用土池隔段進行家系育苗，極有必要在池底布置排水管道，在池壁布置進水管道，并配備一個備用水源。進行規(guī)模化家系構(gòu)建時，若采用孵化桶作為交配、育苗設(shè)施，則作業(yè)將更便捷。

本研究首次采用大規(guī)格親蟹進行規(guī)?；蚁禈?gòu)建，突破了大規(guī)格親蟹的配對難、越冬成活率低、定向繁育難等關(guān)鍵技術(shù)，成功實現(xiàn)大規(guī)格親蟹規(guī)?；蚁禈?gòu)建。盡管因管理不到位造成各家系蟹苗產(chǎn)量不高，但仍不失為探索河蟹家系遺傳育種技術(shù)的又一次突破。

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The study of lagre-scale family construction for big size Chinese mitten crab（Eriocheir sinensis）

Deng Yanfei，Xia Aijun，Pan Jianlin，Li Yuehua，Bo Rufa，Zhu Qingshun
（Freshwater Fisheries Research Institute of Jiangsu Province，Nanjing 210017，China）

A total of 100 groups of Chinese mitten crab（Eriocheir sinensis）（more than 175 g of female and more than 250 g of male）were selected to construct lagre-scale family from the wild populations of the Chinese mitten crabs，the Yangtze River population and the Lixi River breeders in northern Jiangsu cultured stock.169 families including 25 full-sib and 144 half-sib families were established，the successful ratio of family construction was 84.5%.40 of berried crabs（families）were selected for directional breeding，23 of families（16 of fullsib familes，7 of half-sib families）were desalinated successfully finally.

Eriocheir sinensis；big size；lagre-scale family construction.

Q173

A

1004-2091（2017）07-0049-04

2016-12-15）

10.3969/j.issn.1004-2091.2017.07.010

國家“十二五”科技計劃項目（2012BAD26B04-03）；江蘇省科技支撐計劃項目（BE2012355）；江蘇省水產(chǎn)三新工程項目（DY2012-2、PJ2011-46、JS2009-12）

鄧燕飛（1982-），男，助理研究員，從事水生動物遺傳育種研究.E-mail：yf-deng@163.com

李躍華，研究員.E-mail：liyuehua1816@sina.com