施偉麗,王 燕,信琪琪,徐 磊,滕傳震,陳可冀△,叢偉紅

(1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院，北京 100091；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029；3.成都康弘制藥有限公司，成都 610036)

【實(shí)驗(yàn)研究】

松齡血脈康膠囊對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠高血壓相關(guān)基因表達(dá)的影響

施偉麗1,王 燕2△,信琪琪1,徐 磊3,滕傳震3,陳可冀1△,叢偉紅1

(1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院，北京 100091；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029；3.成都康弘制藥有限公司，成都 610036)

目的：:探討松齡血脈康對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓的干預(yù)作用及機(jī)制。方法：自發(fā)性高血壓大鼠隨機(jī)分組后，分別灌胃給予松齡血脈康和氯沙坦鉀，連續(xù)給藥9周，每周檢測(cè)收縮壓、舒張壓變化。以HE染色觀察藥物對(duì)大鼠主動(dòng)脈病理組織形態(tài)學(xué)影響，qPCR陣列技術(shù)檢測(cè)高血壓相關(guān)因子RNA水平的變化，繼而借助String及KEGG Pathway數(shù)據(jù)庫對(duì)差異基因進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)分析。結(jié)果：給藥9周后，與模型組比較高劑量松齡血脈康組及氯沙坦鉀組大鼠的收縮壓、舒張壓均顯著降低；高劑量松齡血脈康組大鼠血漿中血管緊張素Ⅱ水平較模型組明顯降低，且與氯沙坦組比較特別顯著性降低；對(duì)qPCR篩選得到的12個(gè)差異表達(dá)基因進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn)，Pde5a、Prkg1、Gucy1b3和Prkg2相互作用明顯，且均參與cGMP-PKG通路的活化。結(jié)論：松齡血脈康降低自發(fā)性高血壓大鼠血壓，其機(jī)制可能與降低大鼠血漿中AngⅡ水平、調(diào)控差異表達(dá)基因Pde5a、Prkg1、Gucy1b3和Prkg2共同參與的cGMP-PKG通路有關(guān)。

松齡血脈康；高血壓；qPCR陣列檢測(cè)

高血壓病是以血壓升高為主要臨床特征的綜合征，迄今依舊是心血管疾病死亡的重要原因之一。松齡血脈康膠囊由葛根、鮮松葉、珍珠層粉組成，具有平肝潛陽、鎮(zhèn)心安神的功效，臨床用于高血壓、高血脂的治療，并取得了一定療效[1-2]。已有研究發(fā)現(xiàn)，松齡血脈康可降低自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rat，SHR)血漿中血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)、醛固酮含量及肝臟血管緊張素轉(zhuǎn)換酶、血管緊張素Ⅱ一型受體mRNA的表達(dá)水平，提示松齡血脈康可能通過影響腎素-血管緊張素-醛固酮水平調(diào)控血壓[3]；也有研究顯示，松齡血脈康可能通過激活PI3K/Akt信號(hào)通路，維持自發(fā)性高血壓大鼠心臟正常的收縮和舒張功能[4]。但目前有關(guān)松齡血脈康降壓作用分子機(jī)制的研究尚不深入。本文以qPCR陣列技術(shù)對(duì)高血壓相關(guān)基因進(jìn)行篩選研究，以期為闡明松齡血脈康降壓作用的分子機(jī)制和臨床應(yīng)用提供更多的可靠依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)9周齡雄性自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)40只，9周齡雄性wistar kyoto大鼠(WKY)10只，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司(合格證書號(hào)SYXK(京)2012-0012)，飼養(yǎng)于中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院SPF級(jí)動(dòng)物房，自由取食及飲水，12 h明暗交替控制(光照時(shí)間8∶00-20∶00)。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑

氯沙坦鉀片由杭州默沙東制藥有限公司提供(批號(hào)L016172),松齡血康膠囊由成都康弘有限公司提供(批號(hào)160216)，藥物組成成分：鮮松葉、葛根、珍珠層粉；RNA提取試劑盒(Roche：11667165001)，All-in-OneTMFirst-Strand cDNA 合成試劑盒(GeneCopoeia：AORT-0050)，All-in-OneTM qPCR Mix(GeneCopoeia：AOPR-0200)，All-in-OneTM qPCR引物(GeneCopoeia)。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

智能無創(chuàng)鼠尾壓測(cè)量?jī)x(日本BP98AWU)，全自動(dòng)生化分析儀(日本日立公司7600)，脫水機(jī)(武漢俊杰電子有限公司JJ-12J)，包埋機(jī)(武漢俊杰電子有限公司JB-P5)，病理切片機(jī)(上海徠卡儀器有限公司RM2016)，凍臺(tái)(武漢俊杰電子有限公司JB-L5)，組織攤片機(jī)(浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司KD-P)，烤箱(上?；厶﹥x器制造有限公司DHG-9140A)，正置光學(xué)顯微鏡(日本尼康ECLIPSE CI)，成像系統(tǒng)(日本尼康DS-U3)，NanoDrop? Lite紫外分光光度計(jì)(美國(guó)賽默飛)，LightCycler480 PCR儀(美國(guó)羅氏)。

2 方法

2.1 分組及給藥方法

40只9周齡雄性SHR大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為模型組、氯沙坦鉀組、高劑量和常規(guī)劑量松齡血脈康組4組各10只，以WKY大鼠為正常對(duì)照組。氯沙坦鉀片研磨后按每天31.5 mg·kg-1灌胃給藥，高劑量松齡血脈康組以每天1 g·kg-1灌胃，常規(guī)劑量松齡血脈康組以每天0.5 g·kg-1灌胃，模型組及正常對(duì)照組給予等體積生理鹽水，給藥9周。

2.2 血壓測(cè)定與樣本采集

每周檢測(cè)大鼠尾動(dòng)脈血壓，每次檢測(cè)重復(fù)3次取其平均值；腹主動(dòng)脈采血，西苑醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)大鼠血漿中AngⅡ水平；取材胸主動(dòng)脈用于HE染色及qPCR陣列檢測(cè)。

2.3 病理組織學(xué)檢測(cè)

胸主動(dòng)脈用福爾馬林固定、石臘包埋、切片后用HE染色，觀察主動(dòng)脈病理形態(tài)變化。

2.4 qPCR陣列檢測(cè)

提取組織RNA后用All-in-OneTMfirst-strand cDNA synthesis kit 將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA；混合cDNA模板和All-in-OneTMqPCR mix，將混合液滴入孔中；在Real-time PCR儀中進(jìn)行反應(yīng)；運(yùn)用GeneCopoeia的網(wǎng)上數(shù)據(jù)分析工具分析數(shù)據(jù)。

2.5 所得差異基因的網(wǎng)絡(luò)分析

結(jié)合String(http://www.string-db.org)和KEGG Pathway(http://www.genome.jp/kegg/pathway.html)數(shù)據(jù)庫對(duì)所得基因進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)分析。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 松齡血脈康對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響

松齡血脈康對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠收縮壓的影響 表1顯示，給藥1周后氯沙坦鉀組收縮壓、舒張壓較模型組顯著性降低(P<0.01)；5周后高劑量松齡血脈康組收縮壓、舒張壓逐漸降低，且較模型組降低明顯(P<0.05)；給藥9周后氯沙坦鉀組、高劑量松齡血脈康組收縮壓、舒張壓較模型組均顯著下降，且高劑量松齡血脈康收縮壓與氯沙坦鉀組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

組 別鼠數(shù)0周1周2周3周4周5周6周7周8周9周對(duì)照組10SBP98.38±13.95110.74±18.32112.52±17.99114.29±9.79110.37±9.75119.78±10.08106.21±17.02107.58±12.78109.27±13.78109.94±14.48DBP65.96±8.569.58±18.370.29±20.9475.21±6.3374.53±11.2177.08±13.3170.46±12.9572.92±9.5171.69±12.176±12.42模型組10SBP136.1±15.01**147.55±9.26**150.84±8.69**157.56±7.26**156.26±10.11**161.06±5.91**158.4±5.4**161.27±7.56**163.24±3.95**164.61±6.55**DBP104.62±14.43**105.49±10.65**109.1±11.49**115.87±10.75**109.13±15.35**118.82±14.88**113.4±11.81**118.73±9.85**120.47±10.26**117.21±15.06**氯沙坦鉀組10SBP140.27±6.46127.25±12.16△△144.73±10.13141.76±13.64△△142.83±11.43△△136.17±16.27△△143.13±9.75△148.61±10.97△△145.01±13.22△△144.9±16.27△△DBP108.46±9.7983.06±14.9△△102.91±8.37102.59±16.72△△104.07±8.4898.05±15.85△△101.73±19.87106.18±12.78△△100.02±13.27△△103.26±14.93△△松齡血脈康高劑量組10SBP143.11±10.82141.69±12.88##149.46±12.77147.38±10.43△151.64±13.88#149.23±12.67△140.33±21.57△150.36±6.86△△148.48±10.5△△149.99±13.31△△DBP101.09±10.57100.33±18.01##104.02±13.11104.01±15.73△109.98±20.84105.85±15.27△99.33±20.64△108.27±9.55△106.67±14.22△△107.86±17.31△松齡血脈康常規(guī)劑量組10SBP130.31±18.52139.09±13.76#151.29±7.09148.52±13.61△155.61±10.71##145.84±14.54△△140.29±20.32△151.95±14.15△153.6±12.44△154.24±9.27△#DBP100.85±11.6994.24±13.01△#107.51±7.99103.11±12.51△△114.57±14.6598.46±17△△102.67±20.17106.33±15.41△△113.23±15.03##118.9±13.77##

注：SBP：收縮壓，DBP：舒張壓；與對(duì)照組比較，**P<0.01；與模型組比較:△P<0.05，△△P<0.01；與氯沙坦鉀組比較：#P<0.05，##P<0.01

3.2 松齡血脈康對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠主動(dòng)脈病理形態(tài)影響

圖1顯示，從A組圖中可看出，模型組大鼠主動(dòng)脈壁厚薄不一，而對(duì)照組和藥物組主動(dòng)脈壁厚度相對(duì)均勻；從B組圖中可以看出，模型組主動(dòng)脈壁厚度較對(duì)照組明顯增加，給藥組厚度較模型組有降低。

圖1 松齡血脈康對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠主動(dòng)脈病理形態(tài)影響注：“←”所示為模型組主動(dòng)脈壁厚薄不一，“—”表示主動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度

3.3 松齡血脈康對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血漿AngⅡ的影響

圖2顯示，高劑量松齡血脈康組AngⅡ水平較模型組明顯降低(P<0.01)，且與氯沙坦鉀組比較降低顯著(P<0.01)；氯沙坦鉀組AngⅡ水平較模型組未見明顯差異，但有升高趨勢(shì)，可能與氯沙坦鉀與血管緊張素?fù)屨冀M織中AngⅡ受體，使更多的AngⅡ游離至血液中有關(guān)。

圖2 松齡血脈康對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血漿AngⅡ的影響注：與對(duì)照組比較：**P<0.01；與模型組比較：△△P<0.01；與氯沙坦鉀組比較：#P<0.05，##P<0.01(n=10)

3.4 高血壓差異表達(dá)基因篩選

圖3 模型組與對(duì)照組qPCR陣列結(jié)果

圖3、4顯示， 以模型組與對(duì)照組、高劑量組松齡血脈康與模型組進(jìn)行對(duì)照比較，分析、篩選高血壓差異表達(dá)基因[5]。本實(shí)驗(yàn)中，以高劑量組松齡血脈康與模型組比較，共得到表達(dá)有變化基因53個(gè)，其中上調(diào)22個(gè)，下調(diào)因子31個(gè)，上調(diào)基因中差異倍數(shù)≥1.5的有12個(gè)，下調(diào)基因中差異倍數(shù)≥1.5的有16個(gè)；以模型組與對(duì)照組比較，共得到59個(gè)有變化的基因，其中上調(diào)基因28個(gè)，下調(diào)基因31個(gè)；上調(diào)基因中差異倍數(shù)≥1.5的有19個(gè)，下調(diào)基因中差異倍數(shù)≥1.5的有20個(gè)。

圖4 模型組與對(duì)照組qPCR陣列結(jié)果

表2顯示，繼而對(duì)高劑量松齡血脈康組與模型組比較，模型組與對(duì)照組比較結(jié)果中的基因按下述條件進(jìn)行二次篩選：(1)同時(shí)存在；(2)基因差異倍數(shù)≥1.5；(3)調(diào)控趨勢(shì)相反，最終得到12個(gè)差異基因。其中，Clic5、Gch1、Prkg2、Adrb1、Gucy1b3、Mylk2在松齡血脈康與模型組的比較結(jié)果中上調(diào)，而在模型組與對(duì)照組的比較結(jié)果中下調(diào)；相反，Mas1、Npy1r、Acta2、Mylk、Prkg1、Pde5a在松齡血脈康與模型組結(jié)果中下調(diào)，而模型組與對(duì)照組比較結(jié)果中上調(diào)。

3.5 松齡血脈康調(diào)控高血壓相關(guān)差異表達(dá)基因的網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果

從圖5顯示，磷酸二酯酶5a(phosphodiesterase 5A，Pde5a)、環(huán)磷酸鳥苷酸依賴的1型蛋白激酶(protein kinase，cGMP-dependent, type II，Prkg1)、Prkg2、鳥苷酸環(huán)化酶可溶性蛋白亞基1β3(guanylate cyclase 1 soluble subunit beta 3，Gucy1b3)關(guān)系密切，各基因間相互作用。String的KEGG pathway分析結(jié)果提示，cGMP-PKG通路(map號(hào)04022)在被篩選的相關(guān)信號(hào)通路中處于核心位置，且上述4個(gè)基因均參與該通路的活化。

表2 高劑量松齡血脈康組與模型組、模型組與對(duì)照組比較所得差異基因

圖5 松齡血脈康調(diào)控差異基因的網(wǎng)絡(luò)分析注：紅色字母表示高劑量松齡血脈康組上調(diào)的基因，黑色字表示下調(diào)的基因

4 討論

松齡血脈康是在“血脈同治”理論的指導(dǎo)下組成的復(fù)方，由葛根、鮮松葉、珍珠層粉組成，具有平肝潛陽、鎮(zhèn)心安神的功效。其中鮮松葉是松齡血脈康的君藥，其性溫，味苦，歸心、肝、脾經(jīng)，國(guó)內(nèi)外對(duì)松葉的化學(xué)成分研究主要集中在揮發(fā)油、木脂素、黃酮類、原花青素、莽草酸等化合物，藥理研究表明松葉有抗氧化、抗菌、調(diào)節(jié)血脂、抗衰老等作用[5-7]。葛根為方中臣藥，甘平，性涼，主入陽明經(jīng)，能升舉清陽，化濁調(diào)脂，《本草綱目》載其:“散郁火”。葛根素是從中藥葛根中提取的具有異黃酮結(jié)構(gòu)的單體化合物，廣泛用于心腦血管疾病的治療，能調(diào)節(jié)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)相關(guān)活性物質(zhì)生成，抗氧化應(yīng)激、抑制組織纖維化，增加胰島素敏感性，調(diào)節(jié)血脂和保護(hù)內(nèi)皮[8-9]。松齡血脈康膠囊另一主要成分珍珠層粉是珍珠母去掉中、外層，保留珍珠層研制而成的細(xì)粉，其性寒味甘咸，入心、肝經(jīng)，與鮮松葉配伍增強(qiáng)其平肝潛陽、鎮(zhèn)心安神的作用。依“血脈同治”的治療理念，高血壓病患者同時(shí)存在脈的病變和血的病變，而脈的病變主要體現(xiàn)在血管內(nèi)皮損傷、血管平滑肌功能異常等[10]。故本研究以自發(fā)性高血壓大鼠主動(dòng)脈為對(duì)象，探討松齡血脈康對(duì)血壓調(diào)控的可能分子機(jī)制。

環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)是一種普遍存在的細(xì)胞內(nèi)第二信使，介導(dǎo)大量的生理過程，在心血管系統(tǒng)中cGMP信號(hào)對(duì)疾病發(fā)生發(fā)展有重要調(diào)節(jié)作用，尤其對(duì)血管平滑肌和心肌功能至關(guān)重要。cGMP 水平的升高，是NO多種生物效應(yīng)的分子基礎(chǔ)，如松弛血管平滑肌和抑制血小板聚集[11-12]。而cGMP是Gucy1b3(又名sGC)催化一氧化氮(nitric oxide，NO)的產(chǎn)物，同時(shí)cGMP活性受磷酸二酯酶(PDEs)的影響，PDEs具有水解胞內(nèi)第二信使的功能。PDE5選擇性地作用于cGMP，cGMP被PDE5水解轉(zhuǎn)化為5-GMP而失活。研究結(jié)果表明，松齡血脈康組Gucy1b3顯著上調(diào)，而 PDE5a水平降低，提示松齡血脈康可能通過增加Gucy1b3活性、抑制PDE5a活性而增加cGMP的生物利用度，最終發(fā)揮保護(hù)主動(dòng)脈舒張功能的作用。

cGMP通路下游的另一因子PRKG(又名PKG)在血壓調(diào)節(jié)中也發(fā)揮重要作用。多項(xiàng)研究顯示，PKG1基因是高血壓的易感基因，可通過增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度調(diào)節(jié)血管張力，影響血壓[13-14]。研究[10]發(fā)現(xiàn)，血管平滑肌細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間接觸硝基血管擴(kuò)張劑、cGMP或cAMP類似物，將可能抑制PKG mRNA及其蛋白的表達(dá)[15]。同樣，在探討cGMP干預(yù)心肌細(xì)胞功能和內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxidative stress，eNOS)干預(yù)轉(zhuǎn)基因小鼠主動(dòng)脈功能的研究中，PKG的水平均降低[16-17]，推測(cè)cGMP的增加可能導(dǎo)致PKG水平降低，從而降低血壓。本研究中PKG1 RNA水平明顯降低，提示松齡血脈康可能通過降低PKG1 RNA水平調(diào)節(jié)主動(dòng)脈的收縮功能。研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)，與PKG1水平降低相反，PKG2 mRNA的水平顯著上調(diào)，但由于目前PKG2在高血壓中的研究較少，PKG2水平的變化是否對(duì)血壓產(chǎn)生影響以及產(chǎn)生何種影響，尚需進(jìn)一步的研究。此外本研究證實(shí)，松齡血脈康能顯著降低大鼠血漿中AngⅡ水平，與已報(bào)道的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致[3]，提示松齡血脈康的降壓作用可能與調(diào)節(jié)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)有關(guān)。

綜上，松齡血脈康膠囊能平穩(wěn)降低自發(fā)性高血壓大鼠的血壓，利用qPCR陣列技術(shù)和網(wǎng)絡(luò)藥理分析，對(duì)松齡血脈康膠囊調(diào)控的高血壓相關(guān)基因進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)松齡血脈康可能通過調(diào)節(jié)cGMP-PKG通路Gucy1b3、PKG1、PDE5a等基因表達(dá)而調(diào)控大鼠血壓，明確了松齡血脈康降壓的分子機(jī)制，為臨床松齡血脈康膠囊的應(yīng)用提供依據(jù)。同時(shí)，我們也注意到，Gucy1b3、PDE5、PKG與NO代謝密切相關(guān)，而NO是調(diào)控氧化應(yīng)激的重要分子，因此松齡血脈康是否對(duì)高血壓狀態(tài)下大鼠氧化應(yīng)激損傷有保護(hù)作用，將是我們后續(xù)研究的內(nèi)容。

[1] YANG XC, XIONG XJ, YANG GY,et al. Songling Xuemaikang Capsule for primary hypertension: A systematic review of randomized controlled trials[J]. Chin J Integr Med, 2015, 21(4): 312-320.

[2] 董珍宇, 高穎, 吳圣賢. 基于真實(shí)世界的松齡血脈康膠囊治療原發(fā)性高血壓研究[J]. 中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志, 2013, 11(3): 274-275.

[3] 柳威, 王娟, 趙英強(qiáng). 松齡血脈康膠囊對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠RAAS系統(tǒng)的調(diào)控機(jī)制研究[J]. 中華中醫(yī)藥雜志, 2015, 30(4): 1322-1324.

[4] 李杰, 柳威, 趙英強(qiáng). 松齡血脈康膠囊對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠PI3K/Akt信號(hào)通路的調(diào)節(jié)機(jī)制探討[J]. 湖南中醫(yī)雜志, 2013, 29(7): 112-115.

[5] FENG S, ZENG W, LUO F,et al. Antibacterial activity of organic acids in aqueous extracts from pine needles (Pinus massoniana Lamb.)[J]. Food Science and Biotechnology, 2010, 19(1): 35-41.

[6] 鄭曉珂, 王小蘭, 馮衛(wèi)生. 松針提取物對(duì)去卵巢大鼠肝臟脂質(zhì)的影響[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2010, 21(2): 368-370.

[7] 單紅梅, 朱玉寶, 李從陽,等. 馬尾松針抗衰老機(jī)制的研究[J]. 遼寧中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2006, 8(1): 91-92.

[8] ZHOU Y, ZHANG H, PENG C. Puerarin: A Review of Pharmacological Effects[J]. Phytother Res, 2014, 28(7): 961-975.

[9] ZHANG Z, LAM TN, ZUO Z. Radix Puerariae: an overview of its chemistry, pharmacology, pharmacokinetics, and clinical use[J]. J Clin Pharmacol, 2013, 53(8): 787-811.

[10] 高學(xué)敏, 張德芹, 陳可冀,等. 松齡血脈康膠囊“血脈同治”組方理論探析[J]. 中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志, 2015, 13(6): 708-710.

[11] PALMER RM, FERRIGE AG, MONCADA S. Nitric oxide release accounts for the biological activity of endothelium-derived relaxing factor[J]. Nature, 1987, 327(6122): 524-526.

[12] SABINO JP, BOMBARDA G, DA SC,et al. Role of the spinal cord NO/cGMP pathway in the control of arterial pressure and heart rate[J]. Pflugers Arch, 2011, 461(1): 23-28.

[13] FRIESE RS, ALTSHULER AE, ZHANG K,et al. MicroRNA-22 and promoter motif polymorphisms at the Chga locus in genetic hypertension: functional and therapeutic implications for gene expression and the pathogenesis of hypertension[J]. Hum Mol Genet, 2013, 22(18): 3624-3640.

[14] SABBAGH A, LUISI P, CASTELLI EC,et al. Worldwide genetic variation at the 3′ untranslated region of the HLA-G gene: balancing selection influencing genetic diversity[J]. Genes Immun, 2014, 15(2): 95-106.

[15] SOFF GA, CORNWELL TL, CUNDIFF DL,et al. Smooth muscle cell expression of type I cyclic GMP-dependent protein kinase is suppressed by continuous exposure to nitrovasodilators, theophylline, cyclic GMP, and cyclic AMP[J]. J Clin Invest, 1997, 100(10): 2580-2587.

[16] WOLLERT KC, FIEDLER B, GAMBARYAN S,et al. Gene transfer of cGMP-dependent protein kinase I enhances the antihypertrophic effects of nitric oxide in cardiomyocytes[J]. Hypertension, 2002, 39(1): 87-92.

[17] YAMASHITA T, KAWASHIMA S, OHASHI Y,et al. Mechanisms of reduced nitric oxide/cGMP-mediated vasorelaxation in transgenic mice overexpressing endothelial nitric oxide synthase[J]. Hypertension, 2000, 36(1): 97-102.

Effects of Songling Xuemai Kang Capsule on the Expression of Hypertension Related Genes in Spontaneously Hypertensive Rats

SHI Wei-li1，WANG Yan2△，XIN Qi-qi1，XU Lei3，TENG Chuan-zhen3，CHEN Ke-ji1△, CONG Wei-hong1

(1.XiyuanHospital,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing, 100091,China; 2.BeijinguniversityofChinesemedicine,Beijing100029,China; 3.ChengduKanghongPharmaceuticalCo.Ltd.,Chengdu610036,China)

Objective：To investigate the mechanism of Songling Xuemaikang Capsule (SXC) on blood pressure of spontaneously hypertensive rats (SHR). Methods: SHR were randomly divided into model group, high dose SXC group (H-SXC), normal dose SXC group(N-SXC) and losartan group. Blood pressures were measured every week. Pathological morphology of aorta was observed by HE staining. String and KEGG Pathway databases were used for network analysis of differentially expressed genes which related with hypertension and detected with qPCR arrays. Results: Compared with model group, bood pressure of H-SXC and losartan group decreased significantly after 9 weeks of irrigation. AngiotensinⅡlevel declined obviously compared with model group and even losartan group. 12 differentially expressed genes were screened by qPCR arrays and among which 4 genes including Pde5a, Prkg1, Gucy1b3 and Prkg2 participated in cGMP-PKG pathway. Conclusion: SXC could decrease increased blood pressure of SHR, the regulatory mechanism of which might be due to angiotensinⅡ, and the involvement of cGMP-PKG pathway.

Songling Xuemaikang Capsule; Hypertension; qPCR array

北京市“十病十藥”研發(fā)專項(xiàng)(Z141100002214011)-氣血并治顆粒的制劑開發(fā)研究

施偉麗(1987-)，女，河南人，在讀博士，從事中西醫(yī)結(jié)合心血管疾病的臨床與研究。

△通訊作者：陳可冀(1930-)，男，院士，從事中西醫(yī)結(jié)合心血管疾病及老年病的臨床與研究，Tel：010-62835037，E-mail：kjchenvip@163.com。

R285.5

B

1006-3250(2017)05-0634-04

2016-08-24