尚靜雪 楊海明 孫宏冉

摘要[目的]研究中藥治療奶牛乳房炎的最佳制備工藝。[方法]通過設(shè)計，篩選較適宜的粉碎時間和混合比例；采用薄層色譜法（TLC）建立新中藥組方有效成分的檢測方法。[結(jié)果]確認了該組方最佳制備工藝為粉碎時間45 min，混合比例為1.0∶1.0∶0.4；確定有效成分中蒲公英、漏蘆、當歸、川芎薄層鑒別結(jié)果，供試品色譜中，均在與對照品色譜相應(yīng)的位置上出現(xiàn)相同顏色的熒光斑點。[結(jié)論]優(yōu)選粉碎時間和混合比例是組方制備的安全有效方法。建立的檢測項可以用于有效成分的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞 本草乳炎清散；奶牛乳房炎；工藝制備；正交試驗；薄層色譜法

中圖分類號 R28 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2017）03-0154-03

Abstract[Objective] To study the technology of traditional Chinese medicine in the treatment of mastitis in dairy cows. [Method] Orthogonal test was conducted to screen out suitable grinding time and mixing ratio；TLC method was adopted to establish detection method for effective components in new medicines. [Result] The optimal preparation conditions were crushing time 45 min， mixing ratio 1.0∶1.0∶0.4；TLC identification results of Taraxacum mongolicum， Rhapontisum unflorum， Angelica sinensis， Ligusticum wallichii were determined. Fluorescent spots of the same color appeared in the corresponding position of the control product chromatography. [Conclusion] Optimal grinding time and mixing ratio is a safety and effective method for prescription preparation. Established test items can be used for quality control of effective constituents.

Key words Herbal breast inflammation powder；Cow mastitis；Prescription preparation；Orthogonal test；TLC

奶牛乳房炎是由于細菌感染或機械性損傷造成的，引起奶牛一系列病癥，并造成牛奶品質(zhì)下降的奶牛常見病癥。目前，全世界約有2.2億頭奶牛，其中約有1/3左右的奶?；加懈鞣N類型的乳房炎[1]。而在奶牛養(yǎng)殖過程中，治療奶牛乳房炎通常選擇西藥治療，即抗生素療法，雖然其治療見效快，但因牛奶中容易出現(xiàn)藥物殘留，導(dǎo)致牛奶品質(zhì)下降，造成經(jīng)濟損失[2]。

本草乳炎清散是針對奶牛乳房炎開發(fā)的新型的中草藥制劑，該制劑尚未在國內(nèi)外市場上市銷售。由純中藥組成，成本低廉，使用方便，不易產(chǎn)生耐藥性，毒副作用小，不含任何添加劑，綠色無殘留[3]，符合自治區(qū)創(chuàng)新型計劃，推動農(nóng)牧業(yè)的發(fā)展和迎接“十三五”規(guī)劃明確的無抗奶、無藥奶的要求，可縮短奶牛乳房炎治療病程，提高治療效果，減少奶牛業(yè)經(jīng)濟損失。該研究依據(jù)中獸藥辯證論治，參照中獸醫(yī)經(jīng)典方劑，擬定以蒲公英為君藥，川芎、當歸、漏蘆為臣藥，連翹、路路通、黃芩、白術(shù)、王不留行為佐藥，乳香、沒藥、皂刺為使藥的中藥復(fù)方散劑。中藥復(fù)方散劑有相同的有效成分、性味歸經(jīng)、功能主治，有效成分比傳統(tǒng)中藥制劑高若干倍，藥性強，藥效作用迅速[4]。筆者以化瘀止痛、消腫通乳為宗旨，通過正交試驗篩選較適宜的粉碎時間和混合比例，采用薄層色譜法（TLC）建立本草乳炎清散有效成分的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試材。

蒲公英、皂刺、漏蘆、當歸、路路通、連翹、川芎、乳香、沒藥、黃芩、白術(shù)、王不留行，以上12味藥均為規(guī)范加工炮制的標準藥材飲片，且均符合《中華人民共和國獸藥典》2010年版第二部標準規(guī)定[5]。由內(nèi)蒙古蒙吉藥業(yè)科技有限責(zé)任公司提供。

1.1.2 試劑。

甲酸、甲醇、乙酸乙酯，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司生產(chǎn)；醋酸丁酯、環(huán)已烷、丁酮、乙醚、乙醇、正已烷，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。

1.1.3 對照品。

咖啡酸對照品（批號110885-200102，中國食品藥品檢定研究院）；漏蘆對照藥材（批號1209120-201511，中國食品藥品檢定研究院）；當歸對照藥材（批號z0101005，中國食品藥品檢定研究院）；川芎對照藥材（批號120918-201411，中國食品藥品檢定研究院）。

1.1.4 儀器。

電子分析天平（型號BT25S，天津泰斯特儀器有限公司）；pH計（型號PHS-3C，上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司）；數(shù)字恒溫水浴鍋（型號HH-4，江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司）；三用紫外分析儀（型號ZF-1，上海寶山顧村電光儀器廠）；流水式粉碎機（型號DX-25，廣州市大祥電子機械設(shè)備有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 中草藥選擇。

該組方以蒲公英為君藥，川芎、當歸、漏蘆為臣藥，另含有連翹、路路通、乳香、沒藥、皂刺、黃芩、白術(shù)、王不留行，各中草藥功效見表1。

1.2.2 工藝制備。

1.2.2.1 中草藥組方。

蒲公英 30 g、連翹 20 g、黃芩 20 g、王不留行 30 g、路路通 20 g、漏蘆 10 g、當歸 20 g、川芎 10 g、白術(shù) 10 g、乳香 10 g、沒藥 10 g、皂刺 10 g，按處方稱取12味中藥，粉碎，混勻，分裝，密封，即得。

1.2.2.2 單獨粉碎。

分別稱取蒲公英 30 g、連翹 20 g、黃芩 20 g、王不留行 30 g、路路通 20 g、漏蘆 10 g、當歸 20 g、川芎 10 g、白術(shù) 10 g、乳香 10 g、沒藥 10 g、皂刺 10 g，單獨粉碎，取出，檢視。

1.2.2.3 全混粉碎。

分別稱取蒲公英 30 g、連翹 20 g、黃芩 20 g、王不留行 30 g、路路通 20 g、漏蘆 10 g、當歸 20 g、川芎 10 g、白術(shù) 10 g、乳香 10 g、沒藥 10 g、皂刺 10 g，混合粉碎，取出，檢視。

1.2.2.4 正交試驗。

根據(jù)“1.2.2.2”及“1.2.2.3”的試驗結(jié)果，將12味中藥按粉碎情況分4組，分別為蒲公英、連翹、乳香；黃芩、路路通、王不留行；漏蘆、當歸、川芎；白術(shù)、皂刺、沒藥。選取粉碎時間（A）、混合比例（B）2個因素，每個因素選擇3個水平，其中因素A為粉碎時間35、45、50 min，因素B為混合比例1.0∶1.0∶0.2、1.0∶1.0∶0.4、1.0∶1.0∶0.6，設(shè)計正交試驗，以外觀均勻度、粉末細度和出粉率為考察指標，確定本草乳炎清散最優(yōu)的制備工藝。

1.2.3 有效成分薄層色譜檢測方法。

1.2.3.1 蒲公英的薄層鑒別。

取本品粉末5 g，加5%甲酸的甲醇溶液20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10 mL使溶解，濾過，濾液用乙酸乙酯振搖提出2次，每次10 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取咖啡酸對照品，加甲醇制成0.5 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述2種溶液各6 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸丁酯-甲酸-水（7.0∶2.5∶2.5）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視[6]。

1.2.3.2 漏蘆的薄層鑒別。

取本品粉末6 g，加甲醇20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取漏蘆對照藥材1 g，加甲醇20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作為對照藥材溶液。

吸取上述2種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)已烷-丁酮（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視[6]。

1.2.3.3 當歸的薄層鑒別。

取本品粉末5 g，加乙醚20 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取當歸對照藥材0.5 g，加乙醚20 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為對照藥材溶液。吸取上述2種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正已烷-乙酸乙酯（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下（365 nm）下檢視[6]。

1.2.3.4 川芎的薄層鑒別。

取本品粉末5 g，加乙醚20 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取川芎對照藥材1 g，加乙醚20 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯2 mL使溶解，作為對照藥材溶液。吸取上述2種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以正已烷-乙酸乙酯（3∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視[6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 工藝研究

2.1.1 單獨粉碎。

其中蒲公英、皂刺、漏蘆、當歸、路路通、連翹、川芎、黃芩、王不留行、白術(shù)10味中藥均可單獨粉碎，但乳香和沒藥粉碎不完全，損耗較大。

2.1.2 全混粉碎。

12味中藥全部粉碎，損耗較大，出粉率較低。

2.1.3 正交試驗。

由表2可知，各因素對粉碎效率的影響主次順序為A、B，即粉碎時間影響較大，其次是混合比例；該組方最佳制備工藝為A2B2，即粉碎時間為45 min，以1.0∶1.0∶0.4為混合比例；方差分析結(jié)果表明，粉碎時間和混合比例對工藝制備效果具有顯著的影響。

2.2 有效成分薄層色譜檢測 由圖1可知，供試品色譜中，蒲公英、漏蘆、當歸、川芎均在與對照品色譜相應(yīng)的位置上出現(xiàn)相同顏色的熒光斑點。

3 討論與結(jié)論

單獨粉碎與混合粉碎是現(xiàn)代散劑制備的主流方法[7]。在該試驗制備工藝中，單獨和全混粉碎發(fā)現(xiàn)乳香、沒藥不能完全粉碎，損耗較大，導(dǎo)致藥效有所降低。馮崇華[8]將乳香、沒藥放冷制成小塊后再粉碎成適宜調(diào)劑的制品。該試驗將組方中乳香、沒藥放冰箱冷凍適宜時間，按一定比例混合粉碎，由正交試驗分析可知，混合時間對粉碎工藝效果影響較大，其次是粉碎比例；有效解決了乳香、沒藥黏沖導(dǎo)致的不能完全粉碎的問題，確定了最佳的粉碎混合工藝。

含揮發(fā)油較高的、加熱后容易失效的、難溶的藥物適合做成散劑，其有效成分的變化最終影響藥物的臨床療效。本草乳炎清散主要用于治療奶牛乳房炎，具有化瘀止痛、消腫通乳的功能，咖啡酸為方中君藥蒲公英的主要成分，具有抗菌、抗氧化、抗炎以及抗癌等作用[9]；漏蘆具有清熱解毒、活血通乳的功效；當歸具有抑菌、抗動脈硬化作用；川芎具有活血化瘀、抗炎、抗血小板聚集等藥理作用[10]。因此，該研究中考察的蒲公英、漏蘆、當歸和川芎均為本草乳炎清散中治療奶牛乳房炎的主要有效成分，且含量較高。

該研究通過正交試驗確定12味中藥的最佳制備工藝為A2B2，即取處方量的蒲公英、連翹、乳香；黃芩、路路通、王不留行；漏蘆、當歸、川芎；白術(shù)、皂刺、沒藥，且以最佳粉碎時間45 min，分別將4組以每組1.0∶1.0∶0.4的混合比例放置粉碎機內(nèi)粉碎，混合。本草乳炎清散工藝的研究為其規(guī)模生產(chǎn)及臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻

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