劉永濤，李樂，楊紅，艾曉輝*

(1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所, 武漢 430223；2.淡水水產(chǎn)健康養(yǎng)殖湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心，武漢 430223；3.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品質(zhì)量安全控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100141)

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替米考星對(duì)水產(chǎn)致病菌體內(nèi)外抗菌和對(duì)異育銀鯽毒性作用

劉永濤1,2,3，李樂3，楊紅1,2，艾曉輝1,2,3*

(1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所, 武漢 430223；2.淡水水產(chǎn)健康養(yǎng)殖湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心，武漢 430223；3.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品質(zhì)量安全控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100141)

研究替米考星對(duì)3種水產(chǎn)致病菌體外抗菌作用，替米考星對(duì)嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophilia) 感染異育銀鯽的防治效果和替米考星對(duì)異育銀鯽的急性毒性作用。應(yīng)用二倍稀釋法研究質(zhì)量濃度為0.125、0.25、0.5、1、2、4、8、16、32、64、128 mg/L的替米考星對(duì)嗜水氣單胞菌(Aeromonashyolrophila)、溫和氣單胞菌(Aeromonassobria)和鰻弧菌(Vibrioanguillarum)的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)，并計(jì)算MBC/MIC比值。腹腔注射0.3 mL濃度為9×108CFU/mL的嗜水氣單胞菌菌液感染體質(zhì)量為(217.65±25.26)g的異育銀鯽，分別在感染后1、24和48 h以0、50、100、150 mg/kg魚體重的劑量分別口灌替米考星，計(jì)算替米考星對(duì)嗜水氣單胞菌感染異育銀鯽的保護(hù)率。應(yīng)用劑量為0、260、300、340、387、440 mg/kg的替米考星口灌異育銀鯽，記錄異育銀鯽的死亡率，計(jì)算替米考星對(duì)異育銀鯽的半數(shù)致死量LD50。結(jié)果表明，替米考星對(duì)嗜水氣單胞菌、溫和氣單胞菌和鰻弧菌的MIC分別為4.00、0.50和1.00 mg/L，MBC分別為64、32和32 mg/L，MBC/MIC比值分別為16、64和32；100和150 mg/kg魚體重劑量的替米考星對(duì)嗜水氣單胞菌人工感染異育銀鯽的保護(hù)率可達(dá)100%；替米考星對(duì)異育銀鯽口灌的24、48、72和96 h的半數(shù)致死劑量LD50分別為344.0、306.3、298.5和298.5 mg/kg。替米考星對(duì)3種水產(chǎn)致病菌具有一定的體外抗菌效果；替米考星對(duì)嗜水氣單胞菌感染的異育銀鯽具有一定的保護(hù)作用；但同時(shí)替米考星對(duì)異育銀鯽也具有中等毒性。本研究可為替米考星在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的合理使用提供參考。[中國(guó)漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)，2017,7(4):51-58]

替米考星；異育銀鯽；水產(chǎn)致病菌；防治效果；毒性

替米考星(tilmicosin)是泰樂菌素的衍生物，屬于大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，被廣泛用于治療牛、豬和雞等畜禽的呼吸道疾病。替米考星對(duì)多殺性巴氏桿菌(Pasteurellamultocida)和溶血性巴氏桿菌(Pasteurellahemolytica)的抗菌作用比同屬大環(huán)內(nèi)酯類的泰樂菌素強(qiáng)[1-2]；但替米考星被用作抗胸膜肺炎放線桿菌時(shí)，比泰妙菌素、氨芐青霉素和四環(huán)素的耐藥性低[3]。替米考星及其衍生物也被用于治療水產(chǎn)動(dòng)物的疾病[4]。國(guó)外學(xué)者Plumb等[5]報(bào)道了斑點(diǎn)叉尾鮰6種革蘭氏陰性菌病原菌，愛德華氏菌(Edwardsiellaictaluri)、遲鈍愛德華菌(Edwardsiellatarda)、產(chǎn)氣單胞菌(Aeromonasspp.)、嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)、溫和氣單胞菌(Aeromonassobria)和假單胞菌(Pseudomonasspp.)中有40.4%對(duì)替米考星敏感。以添加200、600和1 000 mg/kg替米考星的飼料飼喂大西洋鮭與不添加空白組在采食和生長(zhǎng)方面無顯著性差異[4]。王秀珍等[6]提出與替米考星同屬大環(huán)內(nèi)酯類的北里霉素是防治草魚“三病”的有效藥物。周邦靖[7]報(bào)道大環(huán)內(nèi)酯類藥物被廣泛用于治療和預(yù)防畜禽、水產(chǎn)品的微生物感染，同時(shí)亞臨床治療劑量則用于促生長(zhǎng)[8]。為進(jìn)一步探討大環(huán)內(nèi)酯類藥物在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用，本實(shí)驗(yàn)開展了替米考星對(duì)水產(chǎn)致病菌體外抗菌作用，替米考星對(duì)嗜水氣單胞菌人工感染異育銀鯽防治效果和替米考星對(duì)異育銀鯽的急性毒性研究，以期為大環(huán)內(nèi)酯類藥物替米考星在水產(chǎn)上的應(yīng)用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌種與試驗(yàn)魚

嗜水氣單胞菌和溫和氣單胞菌由中科院武漢水生生物研究所惠贈(zèng)，從患病異育銀鯽體內(nèi)分離；鰻弧菌(Vibrioanguillarum)由中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所惠贈(zèng)，從患病大菱鲆體內(nèi)分離。

異育銀鯽，體質(zhì)量(217.65±25.26)g，由長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所窯灣試驗(yàn)場(chǎng)提供，運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室后，用2%食鹽水消毒10 min，然后放置于已清洗并用高錳酸鉀消毒水族箱(100 cm×80 cm×60 cm)中暫養(yǎng)1周，實(shí)驗(yàn)用水為經(jīng)曝氣的自來水。采用連續(xù)充氧，保持水中溶氧大于8.0 mg/L，水溫(28.1±0.9)℃，暫養(yǎng)期間按魚體質(zhì)量的3%投喂鯽魚飼料。每日9:00～10:00和16:00～17:00各投喂一次，日投喂總量為魚體總體質(zhì)量的6%，每天換水一次，暫養(yǎng)結(jié)束后，選擇規(guī)格整齊、活躍、無明顯病傷的個(gè)體魚進(jìn)行試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)前停飼24 h。

1.2 藥品與試劑儀器

替米考星原料藥(含量≥98%，寧夏多維泰瑞制藥有限公司)；鹽酸環(huán)丙沙星(含量≥98%，山東華馳化工有限公司)；強(qiáng)力霉素(含量≥98.5%，揚(yáng)州聯(lián)搏藥業(yè)有限公司)；乙醇(分析純，天津市德恩化學(xué)試劑有限公司)；牛肉膏、蛋白胨、酸水解酪蛋白、葡萄糖、瓊脂、磷酸氫二鉀、氯化鈉等均為國(guó)產(chǎn)分析純。氨氮快速測(cè)試盒、亞硝酸鹽快速測(cè)試盒、硫化氫快速測(cè)試盒、溶解氧快速測(cè)試盒(廈門北大泰普科技有限公司)。主要儀器有Percival I-36VL培養(yǎng)箱(美國(guó)Percival公司)，Labconco Class Ⅱ Type A2生物安全柜(美國(guó)Labconco公司)，MS-H-S型磁力攪拌器(美國(guó)Scilogex公司)，Sartorius PB-10型酸度計(jì)(德國(guó)賽多利斯公司)，麥?zhǔn)媳葷峁?溫州市康泰生物科技有限公司)。

水產(chǎn)致病菌培養(yǎng)基包括淡水魚類液體培養(yǎng)基(FWA)和淡水魚類瓊脂培養(yǎng)基2種。 FWA的配制：MgSO4·7 H2O 0.05 g，牛肉膏 2.5 g，NaCl 5.0 g，K2HPO40.2 g，葡萄糖1.0 g，蛋白胨5.0 g，酵母膏2.5 g，H2O 1 000 mL，pH 7.2～7.4。淡水魚類瓊脂培養(yǎng)基的配制：MgSO4·7 H2O 0.05 g，牛肉膏 2.5 g，NaCl 5.0 g，K2HPO40.2 g，葡萄糖 1.0 g，蛋白胨5.0 g，酵母膏 2.5 g，瓊脂粉 1.0 g，H2O 1 000 mL，pH 7.2～7.4。

水產(chǎn)致病菌抑菌和殺菌試驗(yàn)所用藥物溶液的配制：替米考星藥液的配制，取替米考星原料藥0.256 g，用適量乙醇溶解后用滅菌蒸餾水定容至100 mL，配制成質(zhì)量濃度為2 560 mg/L的替米考星藥液，室溫放置，現(xiàn)用現(xiàn)配。對(duì)照藥物鹽酸環(huán)丙沙星和強(qiáng)力霉素藥液的配制，分別稱取鹽酸環(huán)丙沙星和強(qiáng)力霉素各0.256 g，分別用滅菌蒸餾水溶解并定容至100 mL，分別配制成質(zhì)量濃度為2 560 mg/L的鹽酸環(huán)丙沙星和強(qiáng)力霉素藥液，室溫放置，現(xiàn)用現(xiàn)配。

替米考星對(duì)嗜水氣單胞菌感染的防治試驗(yàn)和對(duì)異育銀鯽毒性試驗(yàn)用劑替米考星懸濁液的配制：用10 mL的無水乙醇將替米考星溶解后，用滅菌蒸餾水稀釋并定容至100 mL，置磁力攪拌器上混勻配制成質(zhì)量濃度為0.1 g/mL的懸濁液，使用時(shí)放置在磁力攪拌器上，邊攪拌邊使用。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 替米考星對(duì)水產(chǎn)致病菌的體外抗菌作用

將3種水產(chǎn)致病菌分別接種于FWA斜面培養(yǎng)基，置28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。取出后用0.85%生理鹽水洗下菌苔，以麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁以確定菌液濃度，并用0.85%滅菌生理鹽水稀釋菌液，獲終濃度為3×105CFU/mL的應(yīng)用菌液。參考戴自英[9]試管兩倍稀釋法并略做改進(jìn)，3種菌各取試管16支，向裝有4.5 mL的液體培養(yǎng)基中加入0.5 mL原藥液，使其終濃度為256 mg/L，然后再以兩倍稀釋法依次稀釋藥液至0.125 mg/L。替米考星的對(duì)照管：每組設(shè)不含藥物加入等量乙醇溶液及等量菌液的陽(yáng)性對(duì)照管，以及不含藥物也不含菌的陰性對(duì)照管各一支，各管均設(shè)有一個(gè)平行。鹽酸環(huán)丙沙星和強(qiáng)力霉素的對(duì)照管：每組設(shè)不含藥物而含等量菌液的陽(yáng)性對(duì)照管，以及不含藥物也不含菌的陰性對(duì)照管各一支，各管均設(shè)有一個(gè)平行。將制備好的試管放入恒溫培養(yǎng)箱中，28 ℃培養(yǎng)24 h。

最小抑菌濃度的測(cè)定(MIC)：培養(yǎng)24 h后，取出后根據(jù)試管內(nèi)培養(yǎng)基的混濁度，判斷菌體生長(zhǎng)情況，試管內(nèi)以無菌生長(zhǎng)的最小藥液濃度為藥物對(duì)該菌的MIC，每個(gè)MIC試驗(yàn)重復(fù)3次。

最小殺菌濃度的測(cè)定(MBC)：分別自培養(yǎng)48 h觀察藥物最低抑菌濃度以上未見細(xì)菌生長(zhǎng)的各試管中吸取0.1 mL培養(yǎng)物，接種到不含藥物的平皿瓊脂培養(yǎng)基上，置28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，以少于5個(gè)菌落的相應(yīng)藥液濃度為藥物對(duì)該菌種的最小殺菌濃度，每個(gè)MBC試驗(yàn)重復(fù)3次。

MBC/MIC比率計(jì)算：分別用替米考星及對(duì)照藥物鹽酸環(huán)丙沙星和強(qiáng)力霉素對(duì)3種致病菌的MBC值與MIC值作比值，將其作為評(píng)價(jià)替米考星及其對(duì)照藥物鹽酸環(huán)丙沙星和強(qiáng)力霉素抗菌效率的參數(shù)。

1.3.2 替米考星對(duì)嗜水氣單胞菌人工感染異育銀鯽的防治效果

嗜水氣單胞菌復(fù)壯：將嗜水氣單胞菌反復(fù)接種異育銀鯽，復(fù)壯，再分離，鑒定后接種于FWA液體培養(yǎng)基中，置于28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h備用。

嗜水氣單胞菌菌株毒力測(cè)定：參照周邦靖[7]的方法，先確定使試驗(yàn)異育銀鯽發(fā)生100%死亡和不死亡的兩個(gè)劑量，然后根據(jù)這兩個(gè)劑量間隔確定試驗(yàn)組劑量。腹腔攻毒，觀察7 d，每天記錄癥狀及死亡情況。將新培養(yǎng)的菌株斜面用滅菌0.85%的生理鹽水洗下后，用麥?zhǔn)媳葷峁軠y(cè)定菌液濃度使其終濃度為9×108CFU/mL，然后依次稀釋101、102、103、104倍，配成5個(gè)濃度梯度的菌液。

人工感染及治療試驗(yàn)：將暫養(yǎng)后體健無傷的異育銀鯽隨機(jī)分成5個(gè)組并設(shè)1個(gè)對(duì)照組，每組10尾魚，腹腔注射0.3 mL菌液，對(duì)照組注射等量的0.85%生理鹽水。注射后放入(100 cm×80 cm×60 cm)水族箱中。連續(xù)充氧保持水中溶氧大于8.0 mg/L。每隔24 h觀察一次，連續(xù)觀察7 d，試驗(yàn)期間不投喂、不換水，隨時(shí)觀察魚發(fā)病情況，記錄試驗(yàn)魚死亡數(shù)量及其癥狀，并對(duì)注射菌液濃度為9×107CFU/mL和9×104CFU/mL高低劑量組的兩個(gè)水族箱(分別定為2#和5#)中水質(zhì)變化情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)采用水質(zhì)快速檢測(cè)試劑盒進(jìn)行，水溫和pH采用Sartorius PB-10型酸度計(jì)進(jìn)行測(cè)定。以Reed-Muench法計(jì)算半數(shù)致死量(LD50)[7]。于攻毒后1、24和48 h 分3次給異育銀鯽口灌替米考星懸濁液(試驗(yàn)組分別按50、100和150 mg/kg的劑量口灌，陽(yáng)性和陰性對(duì)照組均不口灌替米考星)，每日觀察記錄癥狀和死亡情況，連續(xù)觀察7 d，并對(duì)死亡魚作病菌分離和腹水涂片鏡檢，計(jì)算替米考星對(duì)人工感染嗜水氣單菌異育銀鯽的保護(hù)率。保護(hù)率=存活數(shù)/總數(shù)×100%。

1.3.3 替米考星對(duì)異育銀鯽的急性毒性作用

試驗(yàn)分組：將健康無傷的異育銀鯽隨機(jī)分為6組，包括5個(gè)濃度組和1個(gè)對(duì)照組，各濃度組設(shè)3個(gè)平行，每組10尾異育銀鯽，分別放入16只(100 cm×80 cm×60 cm)的水族箱中。試驗(yàn)用水為經(jīng)曝氣的自來水，連續(xù)充氧保持水中溶氧大于8.0 mg/L，水溫(28.1±0.9) ℃，每日光照12 h。

試驗(yàn)方法：先按急性毒性試驗(yàn)的方法進(jìn)行24 h預(yù)試驗(yàn)，以較大的劑量間隔染毒，找出0%～100%的致死劑量范圍[10]。正式試驗(yàn)按照改良寇氏法進(jìn)行，以預(yù)試驗(yàn)所得0%～100%的致死劑量為基礎(chǔ)，按照等對(duì)數(shù)間距法選擇一定的濃度梯度作正式急性毒性實(shí)驗(yàn)。分別設(shè)置5個(gè)質(zhì)量濃度梯度，同時(shí)設(shè)1個(gè)對(duì)照組及3個(gè)平行組，數(shù)據(jù)取平均值。試驗(yàn)開始后連續(xù)觀察中毒癥狀、死亡時(shí)間、數(shù)量，并及時(shí)撈出死魚，記錄24、48和96 h各濃度異育銀鯽的存活和死亡情況。試驗(yàn)期間不投喂，每24 h換水1次，換水量為50%。試驗(yàn)過程中死魚的判斷標(biāo)準(zhǔn)為：以呼吸停止及對(duì)外界刺激無反應(yīng)作為死亡的判斷依據(jù)，即當(dāng)試驗(yàn)魚中毒后鰓蓋完全停止活動(dòng)，用玻璃棒輕輕刺激魚體5 min無反應(yīng)，即確定為死亡[11-12]。用氨氮快速測(cè)試盒、亞硝酸鹽快速測(cè)試盒、硫化氫快速測(cè)試盒、溶解氧快速測(cè)試盒和Sartorius PB-10型酸度計(jì)分別測(cè)定試驗(yàn)期間水中溶解氧、氨氮、亞硝酸鹽、硫化氫和試驗(yàn)期間的水溫和pH。

根據(jù)急性毒性試驗(yàn)結(jié)果，采用改良寇氏法分別計(jì)算得出替米考星對(duì)異育銀鯽在24、48和96 h接觸時(shí)間內(nèi)的半數(shù)致死量(LD50)。

logLD50=Xk-i(Σp-0.5)

式(1)

式(1)中，Xk為最高劑量組對(duì)數(shù)值；Σp為各組死亡率總和；i為相鄰兩組劑量對(duì)數(shù)值之差。

2 結(jié)果與分析

2.1 替米考星對(duì)水產(chǎn)致病菌的體外抗菌作用

如表1～表3所示，替米考星對(duì)嗜水氣單胞菌、溫和氣單胞和鰻弧菌的MIC分別為4.00、0.50和1.00 mg/L， MBC分別為64、32和32 mg/L，MBC/MIC的比值分別為16、64和32。對(duì)照藥物鹽酸環(huán)丙沙星對(duì)3種水產(chǎn)致病菌的MIC分別為0.50、0.25和0.50 mg/L，MBC為8、4和4 mg/L，MBC/MIC比值分別為16、16和8；強(qiáng)力霉素對(duì)3種水產(chǎn)致病菌的MIC分別為0.50、0.25和0.50 mg/L，MBC為8、4和4 mg/L，MBC/MIC比值分別為16、16和8。結(jié)果顯示，替米考星對(duì)上述3種水產(chǎn)致病菌的抑制和殺滅作用不如對(duì)照藥物鹽酸環(huán)丙沙星和強(qiáng)力霉素。

表1 替米考星和對(duì)照藥物對(duì)水產(chǎn)致病菌的MICTab.1 The MIC of tilmicosin and reference drugs against aquatic pathogenic bacteria mg·L-1,n=3

表2 替米考星和對(duì)照藥物對(duì)水產(chǎn)致病菌的MBCTab.2 The MBC of tilmicosin and reference drugs against aquatic pathogenic bacteria mg·L-1,n=3

表3 替米考星和對(duì)照藥物對(duì)水產(chǎn)致病菌MBC/MIC比率Tab.3 The MBC/MIC of tilmicosin and reference drugs against aquatic pathogenic bacteria mg·L-1,n=3

2.2 替米考星對(duì)嗜水氣單胞菌人工感染異育銀鯽防治效果

2.2.1 試驗(yàn)期間水質(zhì)變化情況

記錄嗜水氣單胞菌人工感染異育銀鯽后1～7 d，2#(注射菌液濃度為9×107CFU/mL)和5#(注射菌液濃度為9×104CFU/mL)水箱中水質(zhì)的變化情況，試驗(yàn)期間2#和5#水箱中水溫分別為(28.2±1.1)℃和(28.0±1.2)℃，pH分別為7.15～7.64和7.33～7.63，溶解氧質(zhì)量濃度均>8.0 mg/L，H2S質(zhì)量濃度均<0.05 mg/L，氨氮質(zhì)量濃度分別為0.6～0.9 mg/L和0.6～1.2 mg/L，亞硝酸鹽質(zhì)量濃度分別為0.05～0.30 mg/L和0.05～0.25 mg/L，測(cè)定的上述水質(zhì)指標(biāo)均符合中國(guó)漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)相關(guān)指標(biāo)的要求[13]。

2.2.2 嗜水氣單胞菌對(duì)異育銀鯽的半數(shù)致死劑量LD50的測(cè)定及癥狀觀察

嗜水氣單胞菌人工感染異育銀鯽6 h后，注射菌液濃度為9×108CFU/mL的部分試驗(yàn)魚在水中呈呆滯的抽搐狀游動(dòng)。將死魚撈出觀察，鰭基部和鰭條充血發(fā)紅，腹部腫脹，眼球突出，解剖后觀察體腔充滿帶血的腹水，腎臟變軟、腫大，肝臟灰白帶有小出血點(diǎn)，后腸及肛門常有出血癥狀，腸內(nèi)有明顯溢血和淡紅色的黏液。

供試菌LD50的計(jì)算按Reed-Muench二氏計(jì)算法進(jìn)行。

LD50的地位比值=

50%致死量的稀釋度：lgLD50(dil)=lg(比LD50較大劑量的稀釋倍數(shù))+ lgd×地位比值=1+1×0.5=1.5。d代表稀釋系數(shù)。

LD50(dil)=31.62，即將原菌液稀釋31.62倍，每尾接種0.3 mL即為50%致死量。

50%致死量的細(xì)菌數(shù)：

lgLD50=lg(比LD50較大劑量的細(xì)菌數(shù))-lgd×地位比值=6.68-0.5=6.18。

LD50=1.5×106，即每個(gè)LD50含嗜水氣單胞菌1.5×106個(gè)。

由表4可知，第1組在攻毒3 h后魚出現(xiàn)不安，8 h 后魚鰭基部及腹部出現(xiàn)充血、發(fā)紅、肛門紅腫，在24 h內(nèi)死亡率為90%，48 h內(nèi)死亡率為100%。第2組攻毒后7 d內(nèi)死亡70%，第3組和第4組7 d內(nèi)死亡率分別為30%和10%，第5組和對(duì)照組試驗(yàn)結(jié)束時(shí)均未死魚。

表4 人工感染嗜水氣單胞菌異育銀鯽的死亡率Tab.4 Mortality of Carassius auratus gibelio infected by Aeromonas hydrophilia n=10

注：菌液注射量為0.3 mL，對(duì)照組為注射0.3 mL 0.85%注射鹽水。

2.2.3 替米考星對(duì)嗜水氣單胞菌人工感染異育銀鯽的保護(hù)作用

從表5看出，陽(yáng)性對(duì)照組攻毒后沒有給藥治療，結(jié)果異育銀鯽第5 天時(shí)死亡率為100%，而陰性對(duì)照組異育銀鯽均沒有死亡。50 mg/kg給藥治療組死亡率為40%，相對(duì)保護(hù)率為60%；100和150 mg/kg給藥治療組保護(hù)率均為100%。

表5 替米考星對(duì)嗜水氣單胞菌人工感染異育銀鯽保護(hù)作用Tab.5 Protective effect of tilmicosin against the infection by Aeromonas hydrophilia on Carassius auratus gibelio n=10

2.3 替米考星對(duì)異育銀鯽的急性毒性作用

由表6可知，260 mg/kg體重劑量組口灌替米考星后，24 h異育銀鯽的死亡率為0，48 h死亡率為10%，96 h死亡率也未增加；300 mg/kg體重劑量組口灌替米考星后，24 h異育銀鯽死亡率為40%，48 h死亡率為60%，72 h和96 h死亡率均未增加；340 mg/kg體重劑量組口灌替米考星后，24 h異育銀鯽死亡率為60%，48 h死亡率為80%，72 h和96 h死亡率均未增加。387 mg/kg體重劑量組口灌替米考星后，24 h死亡率為60%，48 h死亡率為80%，72 h時(shí)死亡率為100%；最高濃度組440 mg/kg體重劑量組在給藥后2 h有的異育銀鯽游動(dòng)遲緩，4 h就有異育銀鯽出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，24 h時(shí)死亡率達(dá)到80%，48 h的死亡率為100%。試驗(yàn)進(jìn)行4 d 后，再連續(xù)觀察3 d，各試驗(yàn)組均無繼續(xù)死亡的異育銀鯽。

表6 替米考星對(duì)異育銀鯽的急性毒性作用Tab.6 Acute toxicity effect of tilmicosin on Carassius auratus gibelio n=10

按照聯(lián)合國(guó)世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的外來化合物急性毒性分級(jí)，替米考星對(duì)異育銀鯽的口灌急性毒性屬中等毒性[14]。試驗(yàn)期間，水溫為27.2～29.0 ℃，pH為7.15～7.64，氨氮質(zhì)量濃度0.4～0.9 mg/L，亞硝酸鹽質(zhì)量濃度0.005～0.25 mg/L，H2S質(zhì)量濃度<0.05 mg/L，水質(zhì)指標(biāo)也符合中國(guó)漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)相關(guān)指標(biāo)的要求[13]。

3 討論

目前國(guó)內(nèi)外報(bào)道的替米考星對(duì)致病菌的抑制研究主要集中于畜禽，如Watkins等[15]報(bào)道替米考星對(duì)化膿棒狀桿菌(Corynebacteriumpyogenes)和金色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的MIC分別為0.04和0.78 mg/L。替米考星對(duì)多殺性巴氏桿菌(Pasteurellamultocida)和溶血性曼氏桿菌(Mannheimiahaemolytica)的MIC分別為3.125和6.25 mg/L[16]。但替米考星對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物致病菌的抑制研究報(bào)道較少。Plumb等[5]報(bào)道從斑點(diǎn)叉尾鮰體內(nèi)分離的6株致病菌中有40.4%的菌株對(duì)替米考星敏感。替米考星對(duì)從鮭腎中分離的12株桿菌也表現(xiàn)出了良好的抑菌效果(MIC為0.25～2 mg/L)[4]，但對(duì)羅非魚鏈球菌的抑菌效果則欠佳[17-18]。本研究中替米考星對(duì)3種水產(chǎn)致病菌，嗜水氣單胞菌、溫和氣單胞菌和鰻弧菌的MIC分別為4.00、0.50和1.00 mg/L，與替米考星對(duì)鮭腎桿菌的MIC相似[4]，但高于本研究中的對(duì)照藥物鹽酸環(huán)丙沙星和強(qiáng)力霉素的MIC，即替米考星的抑菌作用弱于本試驗(yàn)中的2種對(duì)照藥物。因此，相較于2種對(duì)照藥物，替米考星更適合作為預(yù)防藥物使用。鑒于藥物的Cmax與MIC的比值大于4∶1時(shí)被認(rèn)定為該藥物有效[19]，本研究中替米考星對(duì)3種水產(chǎn)致病菌，嗜水氣單胞菌、溫和氣單胞菌和鰻弧菌的Cmax與MIC的比值分別為4.84、38.72和19.36，均大于4∶1(已知替米考星在鯽體內(nèi)最大血藥濃度Cmax為19.36 mg/L[20])，這說明替米考星對(duì)鯽由嗜水氣單胞和溫和氣單胞菌引起的疾病具有較好的治療效果。從替米考星對(duì)嗜水氣單胞菌感染的保護(hù)試驗(yàn)中也可以看出，50 mg/kg體重劑量的替米考星口灌異育銀鯽對(duì)嗜水氣單胞菌攻毒的相對(duì)保護(hù)率為60%，而100 mg/kg和150 mg/kg兩個(gè)劑量的替米考星對(duì)嗜水氣單胞菌攻毒的異育銀鯽的保護(hù)率均可達(dá)100%，這說明適當(dāng)劑量的替米考星在預(yù)防和治療嗜水氣單胞菌感染具有一定的效果。本試驗(yàn)采用了助溶劑溶解替米考星，這可能與實(shí)踐生產(chǎn)存有一定差異，在生產(chǎn)上是否保護(hù)率還會(huì)如此高還要進(jìn)一步驗(yàn)證。

替米考星對(duì)異育銀鯽具有一定的毒性，且致死率和濃度及接觸時(shí)間有相關(guān)性，隨著濃度的增加及處理時(shí)間的延長(zhǎng)，異育銀鯽的死亡率均呈上升趨勢(shì)，72 h后各試驗(yàn)組異育銀鯽的死亡率不再增加。按照WHO推薦的外來化合物急性毒性分級(jí)，替米考星對(duì)異育銀鯽的半數(shù)致死劑量LD50為298.5～344.0 mg/kg，說明其對(duì)異育銀鯽有中等毒性。按照新化學(xué)物質(zhì)對(duì)魚類急性毒性危害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[21]，閆兆陽(yáng)等[22]報(bào)道了替米考星對(duì)斑馬魚的半數(shù)致死濃度(LC50)為16.26 mg/L，其半數(shù)效應(yīng)濃度(EC50)為6.424 mg/L，說明其對(duì)斑馬魚的急性毒性屬中等毒性。替米考星在不同動(dòng)物中表現(xiàn)出不同的毒性程度。替米考星對(duì)空腹大鼠的半數(shù)致死量LD50>800 mg/kg，非空腹LD50>2 000 mg/kg[23]，這大于該藥物對(duì)異育銀鯽的毒性。李宏勝等[24]研究了磷酸替米考星對(duì)小鼠的急性毒性試驗(yàn)，結(jié)果表明口服磷酸替米考星毒性很低(LD50=2 071 mg/kg)。按照WHO推薦的外來化合物急性毒性分級(jí)，替米考星對(duì)大鼠和磷酸替米考星對(duì)小鼠口灌急性毒性屬低毒。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中使用替米考星應(yīng)注意其使用劑量，在保證有效的同時(shí)還應(yīng)考慮其對(duì)魚體的毒性；另一方面應(yīng)從分子水平進(jìn)一步研究替米考星對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的毒性機(jī)理，為替米考星的有效開發(fā)和合理使用提供科學(xué)依據(jù)。

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水產(chǎn)品技術(shù)性貿(mào)易措施通報(bào)

日本有關(guān)擬定噻呋酰胺最大殘留限量的通報(bào)(G/SPS/N/JPN/489)

日本健康、勞動(dòng)和福利部于2016年12月19日發(fā)布了G/SPS/N/JPN/489號(hào)通報(bào)，標(biāo)題為：擬定殺蟲劑噻呋酰胺最大殘留限量。

該通報(bào)稱，日本擬修訂殺蟲劑噻呋酰胺(Thifluzamide)的最大殘留限量(MRLs)。其中與水產(chǎn)相關(guān)的內(nèi)容是將噻呋酰胺在水產(chǎn)品中的MRLs由2 mg/kg修訂為1 mg/kg。

擬批準(zhǔn)日期和公布日期：評(píng)議期截止日后盡快。

通報(bào)全文獲取地址：http://members.wto.org/crnattachments/2016/SPS/JPN/16_5214_00_e.pdf。

巴西有關(guān)冷凍魚質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的通報(bào)和巴西有關(guān)冷凍魚特性及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)法規(guī)的通報(bào)(G/TBT/N/BRA/701和G/SPS/N/BRA/1213)

巴西農(nóng)畜食品供應(yīng)部(MAPA)于2016年12月21日發(fā)布了G/TBT/N/BRA/701號(hào)通報(bào)，標(biāo)題為冷凍魚質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；于2017年1月30日又發(fā)布了G/SPS/N/BRA/1213號(hào)通報(bào)，標(biāo)題為：冷凍魚特性及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)法規(guī)。

該通報(bào)稱，巴西于2016年12月15日發(fā)布136號(hào)法規(guī)草案，規(guī)定了冷凍魚適用特性及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。將凍魚肌肉中鈉、鉀含量分別規(guī)定為每100 g最多為134 mg和502 mg；水分和蛋白質(zhì)成分的比值規(guī)定為最多為6.0。

擬批準(zhǔn)日期和公布日期： 評(píng)議期截止日后盡快。

通報(bào)全文獲取地址：http://members.wto.org/crnattachments/2016/SPS/JPN/16_1875_00_e.pdf。

新法規(guī)擬批準(zhǔn)日期和公布日期：評(píng)議期結(jié)束后再定。

澳大利亞有關(guān)暫停進(jìn)口生蝦的緊急通報(bào)(G/SPS/N/AUS/412)

澳大利亞農(nóng)業(yè)和水資源局于2017年1月10日發(fā)布了G/SPS/N/AUS/412號(hào)通報(bào)，標(biāo)題為：關(guān)于暫停進(jìn)口生蝦的通知。

該通報(bào)稱，澳大利亞農(nóng)業(yè)和水資源局決定自2017年1月9日起對(duì)從除新喀里多尼亞外所有國(guó)家的生蝦及其產(chǎn)品(包括生蝦或蝦肉、可供人食用的濕料或干料腌制蝦或烤肉棒串成的蝦串)采取為期6個(gè)月的暫停進(jìn)口措施，暫停進(jìn)口不包含蝦肉加工成的餃子、春卷、三明治和其他類似產(chǎn)品及已經(jīng)裹粉裹漿的面包蝦產(chǎn)品。

擬公布日期： 2017年12月中旬。

通報(bào)全文獲取地址：http://www.legislation.gov.au/Details/F2017L00034。

韓國(guó)有關(guān)修改食品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的通報(bào)(G/SPS/N/KOR/556)

韓國(guó)食品和藥物安全部于2017年1月16日發(fā)布了G/SPS/N/KOR/556號(hào)通報(bào)，標(biāo)題為：食品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范擬定修改案。

該通報(bào)稱，韓國(guó)發(fā)布食品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范擬定修改案。其中，與水產(chǎn)品相關(guān)的內(nèi)容是擬定異丁香酚(Isoeugenol)作為鎮(zhèn)靜劑使用在魚中的最大殘留限量(MRLs)為0.01 mg/kg。

擬批準(zhǔn)日期和公布日期： 待定。

通報(bào)全文獲取地址：http://members.wto.org/crnattachments/2017/SPS/KOR/17_0322_00_x.pdf。

印度有關(guān)2017年食品安全標(biāo)準(zhǔn)修改法規(guī)的通報(bào)(G/SPS/N/IND/173)

印度食品安全標(biāo)準(zhǔn)局(FSSAI)于2017年2月21日發(fā)布了G/SPS/N/IND/173號(hào)通報(bào)，標(biāo)題為：2017年食品安全標(biāo)準(zhǔn)修改法規(guī)。

該通報(bào)稱，印度發(fā)布2017年食品安全標(biāo)準(zhǔn)(污染物、毒素及殘留)修改法規(guī)，詳細(xì)描述了1968年殺蟲劑法案禁止的殺蟲劑，包括與我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)一致的涕滅威、艾氏劑、狄氏劑、氯丹、七氯、林丹(林丹γ-六氯環(huán)己烷和γ異構(gòu)體)、硫丹、克百威(50%克百威可溶粉)、滅多威(12.5%滅多威乳油及24%滅多威制劑)、磷胺(85%磷胺水溶液)、敵菌丹(80%敵菌丹粉)、福美鐵、安硫磷、甲基對(duì)硫磷(50%甲基對(duì)硫磷乳油和2%甲基對(duì)硫磷粉劑)、久效磷、滴滴涕等16種農(nóng)藥；以及我國(guó)未規(guī)定禁用的殺螟硫磷、西瑪津、倍硫磷、二嗪磷等4種農(nóng)藥。

擬批準(zhǔn)和公布日期： 待定。

通報(bào)全文獲取地址：http://www.fssai.gov.in/home/fss-legislation/wto-notifications/wto-sps-notifications.html。

哥斯達(dá)黎加有關(guān)出口魚及水產(chǎn)品相關(guān)問卷的通報(bào)(G/SPS/N/CRI/187)

哥斯達(dá)黎加農(nóng)畜部國(guó)家動(dòng)物衛(wèi)生局(SENASA)于2017年3月27日發(fā)布了G/SPS/N/CRI/187號(hào)通報(bào)，標(biāo)題為： 出口魚及水產(chǎn)品相關(guān)問卷。

該通報(bào)稱，哥斯達(dá)黎加發(fā)布國(guó)家動(dòng)物健康決議(SENASA-DG-R066-2016)，要求所有向哥斯達(dá)黎加出口水產(chǎn)品的中國(guó)企業(yè)，填寫相關(guān)問卷表格并提交給哥斯達(dá)黎加進(jìn)行評(píng)估以判定出口資格。

擬批準(zhǔn)日期： 本決議通報(bào)中國(guó)主管機(jī)構(gòu)后60天； 擬公布日期： 待定。

通報(bào)全文獲取地址：http://members.wto.org/crnattachments/2017/SPS/CRI/17_1506_00_s.pdf。

韓國(guó)有關(guān)修訂進(jìn)口水產(chǎn)品檢驗(yàn)法規(guī)的通報(bào)(G/SPS/N/KOR/562)

韓國(guó)食品和藥物安全部于2017年4月18日發(fā)布了G/SPS/N/KOR/562號(hào)通報(bào)，標(biāo)題為：進(jìn)口水產(chǎn)品檢驗(yàn)法規(guī)。

該通報(bào)稱，韓國(guó)發(fā)布了有關(guān)《進(jìn)口水產(chǎn)品檢驗(yàn)法規(guī)》的修訂草案。重點(diǎn)修訂的條款包括，一是在確認(rèn)冷凍水產(chǎn)品標(biāo)識(shí)的凈含量時(shí)，要求另附第7號(hào)格式的凈含量檢驗(yàn)結(jié)果表；二是針對(duì)動(dòng)物用藥檢驗(yàn)項(xiàng)目的修訂中新增了海洋雙殼貝類和被囊類中麻痹性貝類毒素(PSP)的檢驗(yàn)。

擬批準(zhǔn)日期和公布日期：待定。

通報(bào)全文獲取地址： 原文文本由WTO/TBT-SPS國(guó)家咨詢中心農(nóng)業(yè)部聯(lián)系點(diǎn)向韓方索取后提供。

美國(guó)有關(guān)鯰形目魚及其派生產(chǎn)品強(qiáng)制檢驗(yàn)的補(bǔ)遺通報(bào)(G/SPS/N/USA/2171/Add.2)

美國(guó)農(nóng)業(yè)部食品安全檢驗(yàn)局(FSIS)于2017年5月2日發(fā)布了G/SPS/N/USA/2171/Add.2號(hào)通報(bào)，標(biāo)題為： 鯰形目魚及其派生產(chǎn)品強(qiáng)制檢驗(yàn)的補(bǔ)遺信息。

該通報(bào)稱，美國(guó)發(fā)布了新制定的《鯰形目魚類及其制品屠宰和加工企業(yè)的合規(guī)指南》，主要包含8個(gè)部分內(nèi)容，分別是檢驗(yàn)許可(GOI)、提交標(biāo)簽進(jìn)行審批(標(biāo)簽要求)、衛(wèi)生執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)(SPS)和衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(衛(wèi)生SOP)要求、危害分析和關(guān)鍵控制點(diǎn)(HACCP)要求、收獲前標(biāo)準(zhǔn)及送往加工企業(yè)的運(yùn)輸、FSIS產(chǎn)品抽樣、產(chǎn)品進(jìn)出口要求、召回計(jì)劃與食品防護(hù)計(jì)劃等。該指南是FSIS以《鯰形目魚類及其制品強(qiáng)制檢驗(yàn)的最終法規(guī)》(2015年12月3日在通報(bào)G/SPS/N/USA/2171/Add.1中發(fā)布)的條款為基礎(chǔ)，提出的幫助其國(guó)內(nèi)鯰形目魚類屠宰和加工企業(yè)更好地達(dá)到監(jiān)管要求和政策的最佳規(guī)范建議。

通報(bào)全文獲取地址：http://members.wto.org/crnattachments/2017/SPS/USA/17_2139_00_e.pdf。

日本有關(guān)擬定草甘膦最大殘留限量的通報(bào)(G/SPS/N/JPN/514)

日本健康、勞動(dòng)和福利部于2017年5月16日發(fā)布了G/SPS/N/JPN/514號(hào)通報(bào)，標(biāo)題為：擬定殺蟲劑草甘膦最大殘留限量。

該通報(bào)稱，日本擬修訂殺蟲劑草甘膦(Glyphosate)的最大殘留限量(MRLs)。其中與水產(chǎn)相關(guān)的內(nèi)容是將將鮭形目(如鮭和虹鱒)、鰻形目(如鰻鱺)、鱸形目(如鰹、竹莢魚、鯖、黑鱸、海鯛和金槍魚)和其他魚類中草甘膦的MRLs由0.3 mg/kg降為0.01 mg/kg；將有殼軟體動(dòng)物、甲殼綱動(dòng)物和其他水生動(dòng)物中草甘膦的MRLs由3 mg/kg降低到0.01 mg/kg。

擬批準(zhǔn)日期和公布日期： 評(píng)議期截止日后盡快。

通報(bào)全文獲取地址：http://members.wto.org/crnattachments/2017/SPS/JPN/17_2249_00_e.pdf。

(全國(guó)水產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)秘書處 供稿)

17印度有關(guān)2017年食品安全標(biāo)準(zhǔn)修改法規(guī)的通報(bào)G/SPS/N/IND/1732017-02-21食品安全18日本有關(guān)擬定硅氟唑最大殘留限量的通報(bào)G/SPS/N/JPN/4862016-12-19食品安全19日本有關(guān)擬定噻呋酰胺最大殘留限量的通報(bào)G/SPS/N/JPN/4892016-12-19食品安全20日本有關(guān)擬定咯菌腈最大殘留限量的通報(bào)G/SPS/N/JPN/5042017-04-13食品安全21日本有關(guān)擬定獸藥螺旋霉素最大殘留限量的通報(bào)G/SPS/N/JPN/5072017-04-13食品安全22日本有關(guān)擬定惡唑酮菌最大殘留限量的通報(bào)G/SPS/N/JPN/5082017-04-13食品安全23日本有關(guān)擬定多效唑最大殘留限量的通報(bào)G/SPS/N/JPN/5112017-05-16食品安全24日本有關(guān)擬定惡唑磷最大殘留限量的通報(bào)G/SPS/N/JPN/5132017-05-16食品安全25日本有關(guān)擬定草甘膦最大殘留限量的通報(bào)G/SPS/N/JPN/5142017-05-16食品安全26日本有關(guān)擬定氟酰胺最大殘留限量的通報(bào)G/SPS/N/JPN/5162017-05-16食品安全27韓國(guó)有關(guān)消費(fèi)化學(xué)品和生物殺菌劑安全管理法草案的通報(bào)G/TBT/N/KOR/7022017-01-12確保所有公民以安全的方式使用生物殺菌劑28俄羅斯有關(guān)修改魚等動(dòng)物飼料粉中砷含量的通報(bào)G/SPS/N/RUS/1362017-02-08食品安全29泰國(guó)有關(guān)修訂食品內(nèi)殺蟲劑最大殘留限量的通報(bào)G/SPS/N/THA/183/Rev.12017-01-27食品安全30土耳其有關(guān)動(dòng)物源食品藥理活性物質(zhì)分類及最大殘留限量的通報(bào)G/SPS/N/TUR/65/Add.12017-01-23補(bǔ)遺31美國(guó)有關(guān)擬否決撤銷毒死蜱許可限量的通報(bào)G/SPS/N/USA/2912/Add.12017-04-24補(bǔ)遺衛(wèi)生防疫類32澳大利亞有關(guān)暫停進(jìn)口生蝦的通報(bào)G/SPS/N/AUS/4122017-01-10食品安全、動(dòng)物健康33澳大利亞有關(guān)暫停進(jìn)口生蝦豁免決定的通報(bào)G/SPS/N/AUS/412/Add.12017-02-13補(bǔ)遺34澳大利亞有關(guān)暫停進(jìn)口生蝦豁免決定的通報(bào)G/SPS/N/AUS/412/Add.22017-02-27補(bǔ)遺35澳大利亞有關(guān)暫停進(jìn)口生蝦豁免決定的勘誤通報(bào)G/SPS/N/AUS/412/Add.2/corr.12017-02-28補(bǔ)遺36澳大利亞有關(guān)修改暫停進(jìn)口生蝦豁免決定的通報(bào)G/SPS/N/AUS/412/Add.32017-04-05補(bǔ)遺37澳大利亞有關(guān)暫停進(jìn)口生蝦豁免決定的補(bǔ)遺通報(bào)G/SPS/N/AUS/412/Add.42017-04-20補(bǔ)遺

38澳大利亞有關(guān)暫停進(jìn)口生蝦豁免決定的補(bǔ)遺通報(bào)G/SPS/N/AUS/412/Add.52017-05-18補(bǔ)遺39澳大利亞有關(guān)暫停進(jìn)口生蝦豁免決定的補(bǔ)遺通報(bào)G/SPS/N/AUS/412/Add.62017-05-31補(bǔ)遺40澳大利亞有關(guān)進(jìn)口食用蝦及蝦產(chǎn)品生物安全建議的通報(bào)G/SPS/N/AUS/4222017-05-17動(dòng)物健康41哥斯達(dá)黎加有關(guān)出口魚及水產(chǎn)品相關(guān)問卷的通報(bào)G/SPS/N/CRI/1872017-03-27食品安全、動(dòng)物健康42歐盟有關(guān)制定經(jīng)第三國(guó)轉(zhuǎn)運(yùn)漁產(chǎn)品衛(wèi)生證書的通報(bào)G/SPS/N/EU/1952017-02-06食品安全43韓國(guó)有關(guān)水生生物疾病控制法案執(zhí)行規(guī)則的通報(bào)G/SPS/N/KOR/5542016-12-16動(dòng)物健康44沙特阿拉伯有關(guān)水產(chǎn)品出口企業(yè)和控制機(jī)構(gòu)要求的通報(bào)G/SPS/N/SAU/2712017-05-18食品安全45泰國(guó)有關(guān)魚類和漁業(yè)產(chǎn)品進(jìn)口許可文件類型和類別的通報(bào)G/TBT/N/THA/4922016-11-30防止進(jìn)口漁業(yè)產(chǎn)品和從事非法捕魚活動(dòng)的外國(guó)船只進(jìn)入泰國(guó)污染物管理類46南非有關(guān)食品中真菌毒素公差管理法規(guī)的通報(bào)G/TBT/N/ZAF/204/Rev.12016-09-26保護(hù)人類健康安全47南非有關(guān)食品中金屬最高水平法規(guī)的通報(bào)G/TBT/N/ZAF/2112016-09-19保護(hù)人類健康安全外來物種入侵類48歐盟有關(guān)修改外來入侵物種名單的通報(bào)G/SPS/N/EU/2012017-03-06保護(hù)國(guó)家免受有害生物的其他危害49日本有關(guān)修改外來入侵物種監(jiān)管生物名單的通報(bào)G/SPS/N/JPN/5192017-05-17動(dòng)物健康加工及產(chǎn)品類50阿曼等海灣國(guó)家有關(guān)罐裝太平洋鮭魚要求的通報(bào)G/TBT/N/ARE/359、G/TBT/N/BHR/473、G/TBT/N/KWT/355、G/TBT/N/OMN/298、G/TBT/N/QAT/471、G/TBT/N/SAU/976、G/TBT/N/YEM/752017-04-06消費(fèi)者健康

51阿曼等海灣國(guó)家有關(guān)速凍龍蝦技術(shù)法規(guī)草案的通報(bào)G/TBT/N/ARE/331、G/TBT/N/BHR/451、G/TBT/N/KWT/333、G/TBT/N/OMN/271、G/TBT/N/QAT/447、G/TBT/N/SAU/953、G/TBT/N/YEM/532016-08-25食品安全52巴西有關(guān)動(dòng)物源產(chǎn)品注冊(cè)指南的通報(bào)G/TBT/N/BRA/676/Add.12017-01-25補(bǔ)遺53巴西有關(guān)冷凍魚特性及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)法規(guī)的通報(bào)G/SPS/N/BRA/12132017-01-30食品安全54巴西有關(guān)冷凍魚質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的通報(bào)G/TBT/N/BRA/7012016-12-21質(zhì)量要求、消費(fèi)者保護(hù)和信息55巴西有關(guān)冷凍魚質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)遺通報(bào)G/TBT/N/BRA/701/Add.12017-02-20補(bǔ)遺56瑞士有關(guān)海豹產(chǎn)品上市條件的通報(bào)G/TBT/N/CHE/2132017-02-01使瑞士的措施與歐盟關(guān)于海豹產(chǎn)品貿(mào)易的適用法律保持一致,考慮到動(dòng)物福利57瑞士有關(guān)海豹產(chǎn)品上市條件的通報(bào)G/TBT/N/CHE/213.Corr.12017-02-08使瑞士的措施與歐盟關(guān)于海豹產(chǎn)品貿(mào)易的適用法律保持一致,考慮到動(dòng)物福利58埃及有關(guān)罐裝金槍魚和鰹魚標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)遺通報(bào)G/TBT/N/EGY/74/Add.22016-08-15補(bǔ)遺59埃及有關(guān)咸魚標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)遺通報(bào)G/TBT/N/EGY/1/Add.12016-08-15補(bǔ)遺60歐盟有關(guān)修改加工動(dòng)物蛋白規(guī)定的通報(bào)G/SPS/N/EU/2102017-06-02食品安全、動(dòng)物健康、保護(hù)國(guó)家免受有害生物的其它危害61歐盟有關(guān)修改魚粉及魚油定義的通報(bào)G/SPS/N/EU/2112017-06-02食品安全62印度尼西亞有關(guān)金槍魚、沙丁魚和鯖魚罐頭標(biāo)準(zhǔn)的通報(bào)G/TBT/N/IDN/1132017-02-10提高競(jìng)爭(zhēng)力、實(shí)現(xiàn)質(zhì)量保證和產(chǎn)品安全、保護(hù)人類健康63土耳其有關(guān)食品輻照法規(guī)的通報(bào)G/TBT/N/TUR/842016-11-18保護(hù)人類健康安全64烏干達(dá)有關(guān)濃縮魚蛋白規(guī)范的通報(bào)G/TBT/N/UGA/5882016-09-19促進(jìn)貿(mào)易、質(zhì)量要求、保護(hù)人類健康安全、防止欺詐行為和消費(fèi)者保護(hù)65烏干達(dá)有關(guān)炸魚規(guī)范的通報(bào)G/TBT/N/UGA/5892016-09-19促進(jìn)貿(mào)易、防止欺詐行為和消費(fèi)者保護(hù)、保護(hù)人類健康安全、質(zhì)量要求

66烏干達(dá)有關(guān)冷凍龍蝦尾規(guī)范的通報(bào)G/TBT/N/UGA/5902016-09-19促進(jìn)貿(mào)易、防止欺詐行為和消費(fèi)者保護(hù)、保護(hù)人類健康安全質(zhì)量要求67烏干達(dá)有關(guān)罐裝油浸金槍魚規(guī)范的通報(bào)G/TBT/N/UGA/5932016-11-02保護(hù)人類健康安全、防止欺詐行為和消費(fèi)者保護(hù)68美國(guó)有關(guān)暫停制定鯰魚和鯰魚產(chǎn)品自愿性等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的通報(bào)G/TBT/N/USA/1166/Add.12017-01-25補(bǔ)遺69南非有關(guān)活龍蝦強(qiáng)制規(guī)范的補(bǔ)遺通報(bào)G/TBT/N/ZAF/201/Add.12016-09-19補(bǔ)遺標(biāo)簽標(biāo)識(shí)類70厄瓜多爾有關(guān)批準(zhǔn)家用殺蟲劑標(biāo)簽技術(shù)法規(guī)的通報(bào)G/TBT/N/ECU/288/Add.12017-01-23補(bǔ)遺71美國(guó)有關(guān)修訂肉類和家禽產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)素標(biāo)簽及更新常規(guī)消費(fèi)參考量的通報(bào)G/TBT/N/USA/12642017-01-26防止欺詐行為和消費(fèi)者保護(hù)72美國(guó)有關(guān)修訂肉類和家禽產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)素標(biāo)簽及更新常規(guī)消費(fèi)參考量的補(bǔ)遺通報(bào)G/TBT/N/USA/1264/Add.12017-02-24補(bǔ)遺有機(jī)產(chǎn)品管理類73歐盟有關(guān)修訂有機(jī)水產(chǎn)動(dòng)物飼料法規(guī)的通報(bào)G/TBT/N/EU/4552017-02-16動(dòng)物健康74韓國(guó)有關(guān)促進(jìn)環(huán)境友好型農(nóng)業(yè)和漁業(yè)及管理和支持有機(jī)食品法案實(shí)施令的通報(bào)G/TBT/N/KOR/7082017-02-16保護(hù)人類健康安全75美國(guó)有關(guān)國(guó)家列表日落修訂2016的通報(bào)G/TBT/N/USA/1054/Add.12016-08-05補(bǔ)遺投入品管理類76歐盟有關(guān)保證執(zhí)行食品飼料法等法規(guī)進(jìn)行官方控制法規(guī)草案的通報(bào)G/SPS/N/EU/43/Add.22017-04-26補(bǔ)遺77肯尼亞有關(guān)羅非魚復(fù)合飼料規(guī)范的通報(bào)G/TBT/N/KEN/5042016-11-23質(zhì)量要求、保護(hù)人類健康安全檢測(cè)方法類78哥斯達(dá)黎加有關(guān)水產(chǎn)品中孔雀石綠檢測(cè)的通報(bào)G/SPS/N/CRI/1832017-01-11食品安全,動(dòng)物健康79歐盟有關(guān)飼料內(nèi)二惡英和多氯聯(lián)苯分析要求的通報(bào)G/SPS/N/EU/1782017-01-10食品安全80歐盟有關(guān)食品內(nèi)二惡英和多氯聯(lián)苯分析要求的通報(bào)G/SPS/N/EU/1792017-01-10食品安全81韓國(guó)有關(guān)邊境食品檢驗(yàn)法規(guī)擬定修改案的通報(bào)G/SPS/N/KOR/5572017-02-06食品安全

82韓國(guó)有關(guān)修訂進(jìn)口水產(chǎn)品檢驗(yàn)法規(guī)的通報(bào)G/SPS/N/KOR/5622017-04-18食品安全83韓國(guó)有關(guān)修訂食品和藥品測(cè)試實(shí)驗(yàn)室評(píng)估法規(guī)的通報(bào)G/TBT/N/KOR/7142017-04-18保護(hù)消費(fèi)者和促進(jìn)公眾健康84土耳其食品痕量元素和污染物水平控制取樣與分析方法的通報(bào)G/TBT/N/TUR/832016-11-04保護(hù)人類健康安全負(fù)責(zé)任漁業(yè)規(guī)范類85墨西哥有關(guān)海龜逃生裝置技術(shù)規(guī)范的通報(bào)G/TBT/N/MEX/3382016-12-19以保護(hù)海龜種群及減少這些生物的偶然捕獲86墨西哥有關(guān)太平洋藍(lán)鰭金槍魚水產(chǎn)養(yǎng)殖責(zé)任規(guī)范的通報(bào)G/TBT/N/MEX/3502017-02-07對(duì)為養(yǎng)殖而捕撈太平洋藍(lán)鰭金槍魚的許可權(quán)和特許權(quán)持有人是強(qiáng)制性的其他綜合型通報(bào)87澳大利亞有關(guān)進(jìn)口食品法規(guī)修改提案的通報(bào)G/SPS/N/AUS/4112016-12-22食品安全88澳大利亞有關(guān)修訂澳新食品標(biāo)準(zhǔn)法典的通報(bào)G/SPS/N/AUS/4132017-01-12食品安全89澳大利亞有關(guān)進(jìn)口食品檢驗(yàn)和分析修改提案的通報(bào)G/SPS/N/AUS/4242017-05-31食品安全90加拿大有關(guān)新聯(lián)邦食品檢驗(yàn)監(jiān)管架構(gòu)的修訂通報(bào)G/SPS/N/CAN/700/Rev.22017-01-24食品安全91加拿大有關(guān)新聯(lián)邦食品檢驗(yàn)監(jiān)管架構(gòu)的修訂通報(bào)G/TBT/N/CAN/394/Rev.22017-01-25加強(qiáng)和精簡(jiǎn)加拿大所有進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)食品的法律機(jī)構(gòu)92韓國(guó)有關(guān)食品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范修改案的通報(bào)G/SPS/N/KOR/5522016-12-15食品安全93韓國(guó)有關(guān)修改食品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的通報(bào)G/SPS/N/KOR/5562017-01-16食品安全94韓國(guó)有關(guān)修改食品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的通報(bào)G/SPS/N/KOR/5642017-05-30食品安全95美國(guó)有關(guān)鯰形目魚及其派生產(chǎn)品強(qiáng)制檢驗(yàn)的補(bǔ)遺通報(bào)G/SPS/N/USA/2171/Add.22017-05-02補(bǔ)遺96越南有關(guān)漁業(yè)法修改草案的通報(bào)G/SPS/N/VNM/872017-02-21動(dòng)物健康

(全國(guó)水產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)秘書處 供稿)

The antibacterial effect of tilmicosin on aquatic pathogenic bacteriainvitroandinvivoand toxic effect of tilmicosin onCarassiusauratusgibelio

LIU Yongtao1,2,3, LI Le3, YANG Hong1,2, AI Xiaohui1,2,3*

(1.Yangtze River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Wuhan 430223, China; 2.Hubei FreshwaterAquaculture Collaborative Innovation Center, Wuhan 430223, China; 3.Chinese Academy of Fishery Sciences, Key Laboratory ofQuality and Safety Control for Aquatic Products, Ministry of Agriculture, Beijing 100141, China)

Antibacterial effect of tilmicosin on 3 kinds of aquatic pathogenic bacteria, control effect of tilmicosin against the infection byAeromonashydrophiliatoCarassiusauratusgibelio, and toxic effect of tilmicosin onCarassiusauratusgibeliowere investigated. Eleven mass concentrations (0.125, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 16, 32, 64 and 128 mg/L) of tilmicosin were designed, and the minimum inhibitory concentration (MIC), the minimum bactericidal concentration (MBC) of tilmicosin againstAeromonashydrophilia,AeromonassobriaandVibrioanguillarumwere observed, and the ratios of MBC and MIC were calculated.Carassiusauratusgibeliowith the weight of(217.65±25.26)g were infected by intraperitoneal injection of 0.3 mL ofAeromonashydrophiliaat a concentration of 9×108CFU/mL, then they were given by oral administration of tilmicosin with the dosages of 0, 50, 100 and 150 mg/kg for three consecutive times at 1, 24 and 48 h, respectively, and protection rate of tilmicosin forCarassiusauratusgibelioinjected byAeromonashydrophiliawas calculated. Six dosages of tilmicosin (0, 260, 300, 340, 387 and 440 mg/kg) were given toCarassiusauratusby oral administration, respectively. Mortality rate was recorded, and the median lethal dose (LD50) was calculated. The MIC forAeromonashydrophilia,AeromonassobriaandVibrioanguillarumwere 4.00, 0.50 and 1.00 mg/L, respectively, the MBC were 64, 32 and 32 mg/L, and the ratios of MIC and MBC forAeromonashydrophilia,AeromonassobriaandVibrioanguillarumwere 16, 64 and 32, respectively. The doses of 100 and 150 mg/kg of tilmicosin were both effective for protecting theCarassiusauratusgibelioinfected byAeromonashydrophilia. TheLD50at 24 h, 48 h, 72 h and 96 h were 344.0, 306.3, 298.5 and 298.5 mg/kg, respectively. Tilmicosin showed the antibacterial effectinvitroto some extent, and the protective effect ofCarassiusauratusgibelioinfected byAeromonashydrophilia. But it also showed toxic effect forCarassiusauratusgibelio. It is helpful for the further development and utilization of tilmicosin in the field of aquaculture.[Chinese Fishery Quality and Standards, 2017, 7(4):51-58]

tilmicosin;Carassiusauratusgibelio; aquatic pathogenic bacteria; control effect; toxicity

AI Xiaohui, aixh@yfi.ac.cn

10.3969/j.issn.2095-1833.2017.04.008

2017-03-15；接收日期：2017-04-12

公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201503108)；中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)資助(2016JBF0104)

劉永濤(1979-)，男，博士，副研究員，研究方向?yàn)樗a(chǎn)動(dòng)物藥理和水產(chǎn)品質(zhì)量安全研究，liuyt@yfi.ac.cn 通信作者：艾曉輝，研究員，研究方向?yàn)樗a(chǎn)動(dòng)物藥理及藥殘控制技術(shù)研究，aixh@yfi.ac.cn

S91;O657.63

A

2095-1833(2017)04-0051-08