劉永進，杜博，黃蘇萍，衡先培

（1.福建中醫(yī)藥大學，福建福州350122；2.福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院，福建福州350004）

丹瓜方的急性毒性試驗

劉永進1，杜博1，黃蘇萍1，衡先培2

（1.福建中醫(yī)藥大學，福建福州350122；2.福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院，福建福州350004）

丹瓜方；急性毒性試驗；最大耐受量；小鼠

丹瓜方由新四物湯和瓜蔞薤白半夏湯化裁而來，主要由丹參、瓜蔞、郁金、赤芍、川芎、法半夏、薤白、僵蠶等組成。丹瓜方為福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院衡先培教授基于“痰瘀同治法”思路探索治療2型糖尿病的心血結晶［1］。既往研究證實，痰瘀同治的丹瓜方在降糖調脂、抗氧化、抗炎等方面療效顯著［2-4］。根據《中藥、天然藥物急性毒性研究技術指導原則》［5］對丹瓜方進行急性毒性試驗，觀察其對肝腎功能和臟器指數的影響，評估其臨床用藥的安全性。

1 材料與方法

1.1 實驗動物4～5周齡昆明小鼠40只，雌雄各半，體質量（20±2）g，由福建中醫(yī)藥大學動物實驗中心［SYXK（閩）2009-0001］提供。喂養(yǎng)條件：清潔級實驗喂養(yǎng)室，恒溫（22±2）℃，12 h光照明暗交替，分籠飼養(yǎng)，自由攝食進水。

1.2 實驗藥物、試劑及儀器①實驗藥物：丹瓜方由福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院藥劑科制備，濃稠混懸液最大濃度為3 g／mL。②實驗試劑：谷草轉氨酶（AST）試劑盒（酶標儀法）（批號：20170420）、谷丙轉氨酶（ALT）試劑盒（酶標儀法）（批號：20170422）、尿素氮（BUN）試劑盒（脲酶法）（批號：20170411）、肌酐（Cr）試劑盒（肌氨酸氧化酶法）（批號：201704 18），上述試劑盒均購自南京建成生物有限公司。③實驗儀器：infinite M200 PRO全自動酶標儀（瑞士TECAN公司），TDZ4A-WS低速臺式離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）。

1.3 分組與給藥適應性喂養(yǎng)5 d后，將40只小鼠按隨機數字表分為鹽水對照組、丹瓜方1組、丹瓜方2組、丹瓜方3組各10只。參照文獻［6］，將劑量組間比定為1∶0.7，各組用藥情況見表1。給藥當天稱重后，以一次性灌胃最大容積0.4 mL／10 g體重分別在當日8時、17時連續(xù)灌胃2次。

1.4 觀察指標

表1 分組與丹瓜方給藥情況

1.4.1 一般情況及體質量變化灌胃當天對小鼠呼吸、運動、進食、排便等行為和是否有中毒反應及死亡情況進行詳細觀察和記錄，對可能出現的死亡動物及時進行解剖。連續(xù)觀察14 d，每天稱重，記錄體重變化。

1.4.2 肝腎功能灌胃后第14 d眼眶取血，靜置4 h，經3000 r／min離心15 min后取血清，放置于-20℃冰箱備用。

1.4.3 臟器指數眼眶取血后以頸椎脫臼法處死，進行解剖，觀察其主要臟器的顏色、質地、大小等，并計算臟器指數。

臟器指數＝臟器濕重（mg）／體質量（g）

1.5 統計學方法實驗數據均采用SPSS 20.0軟件進行分析，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 給藥后一般情況觀察鹽水對照組給藥后10 min內行動遲緩，隨后恢復正常；丹瓜方1～3組給藥后15～30 min內行動遲緩，以丹瓜方3組為甚，且均較鹽水對照組明顯，但多在1 h內恢復正常。連續(xù)觀察14 d，小鼠狀態(tài)良好，未出現中毒反應、死亡等明顯異常情況。

2.2 體質量變化給藥后每日上午8時稱重，連續(xù)稱重14 d。丹瓜方2組和丹瓜方3組在灌胃后出現輕微體重減輕或體重增加不明顯，但隨后多在1～2 d內恢復正常，可能與灌胃后應激反應有關，各組體重變化無統計學差異（P＞0.05），見表2。

2.3 肝腎功能4組小鼠生化指標AST、ALT、BUN、Cr無明顯差異（P＞0.05），見表3。

2.4 病理解剖及臟器指數解剖后肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、胸腺等主要臟器，發(fā)現各組主要臟器

表2 4組小鼠給藥前后體質量比較（x±s）g

表3 4組小鼠生化指標比較（x±s）

在顏色、質地、大小等方面未存在明顯差異。各組主要臟器指數無顯著性差異（P＞0.05），見表4。

表4 4組小鼠臟器指數比較（x±s）

3 討論

丹瓜方中丹參活血化瘀兼養(yǎng)營血，瓜蔞走陽明而降濁之性向下；郁金、赤芍、川芎助血行瘀散而不易生痰，法半夏直走太陰，薤白泄陽明而升太陰，僵蠶走肝以化痰散結。全方清潤活血，化痰通絡而兼實脾之功。丹瓜方能顯著改善肝臟脂代謝，減輕肝臟脂肪沉積和纖維化，可能與丹瓜方促進肝臟AdipoR2的表達有關［7］；其能顯著改變糖尿病模型大鼠胸主動脈超微結構，對血管有明顯的保護作用［8］。此外，丹瓜方可適度促進糖尿病鼠腦組織中IGF-1表達，這為丹瓜方防治糖尿病腦病提供了思路［9］。

急性毒性試驗是目前評價臨床用藥安全性的重要方法之一，本實驗旨在客觀評價丹瓜方對小鼠生存狀態(tài)、主要臟器和肝腎功能的影響。本研究提示：丹瓜方對小鼠體重和主要臟器并未產生明顯影響，且肝腎功能指標未見明顯異常。給藥后，小鼠狀態(tài)良好，未出現死亡情況，無法計算出其半數致死量（median lethal dose，LD50）。根據急性毒性試驗指導原則，小鼠的最大耐受量大于臨床成人用藥量的100倍以上為安全［10］。丹瓜方3組以最大給藥濃度和最大灌胃容積給藥后小鼠出現輕微體重減輕和（或）增長緩慢，但未出現死亡和明顯毒副反應，即為丹瓜方最大耐受量；該組用藥量相當于臨床成人用藥的262倍，提示丹瓜方臨床用藥安全可靠。丹瓜方的基礎研究［2-4，7-9］和本次急性毒性試驗分別佐證了其良好的降糖調脂功效和較好的安全性，值得臨床進一步推廣。

［1］衡先培，楊柳清，李亮.基于代謝病肝病傳脾探索早期干預2型糖尿病的新思路［J］.中國中西醫(yī)結合雜志，2015，35（6）：746-751.

［2］衡先培，李亮，黃蘇萍，等.丹瓜方對ApoE-／-糖尿病模型小鼠糖脂代謝及血管細胞黏附分子-1及mRNA表達水平的影響［J］.中國中西醫(yī)結合雜志，2014，34（9）：1086-1095.

［3］黃蘇萍，陳燕，林妙嫻，等.丹瓜方防治轉基因糖尿病小鼠的氧化應激肝損傷［J］.福建中醫(yī)藥大學學報，2014，24（5）：16-18.

［4］藍元隆，黃蘇萍，衡先培，等.丹瓜方對GK糖尿病-動脈粥樣硬化復合模型大鼠血糖、食量和體重的影響［J］.中華中醫(yī)藥學刊，2012，30（6）：1296-1299，1453.

［5］國家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物急性毒性研究技術指導原則［S］.2005

［6］向明，季暉.藥物毒理學［M］.3版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：133-135.

［7］藍元隆，李亮，衡先培，等.丹瓜方對ApoE-／-糖尿病小鼠肝臟AdipoR2表達的影響［J］.中國中西醫(yī)結合雜志，2016，36（9）：1097-1102.

［8］黃蘇萍，林如輝，陳文列，等.丹瓜方對糖尿病大鼠胸主動脈超微結構影響的初步觀察［J］.福建中醫(yī)藥大學學報，2011，21（2）：19-22.

［9］顏群芳，陳依楚，黃蘇萍，等.丹瓜方干預ApoE-／-糖尿病模型小鼠腦組織IGF-1表達研究［J］.吉林中醫(yī)藥，2015，35（4）：404-406.

［10］陳奇.中藥藥理研究方法學［M］.3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：110-113.

R285.5

B

1000-338X（2017）03-0058-03

2017-05-12

福建省科技計劃重點項目（2014Y0063）

劉永進（1991—），男，2015級中西醫(yī)結合臨床專業(yè)碩士研究生。

黃蘇萍（1963—），女，教授，主要從事內分泌疾病的臨床與基礎研究。E-mail：hsp@fjtcm.edu.cn