白玲玲, 劉行風(fēng), 陳政瑜, 周瑩瑩, 劉 麗, 張艷菊*, 張 奧, 楊 森

(1. 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院, 哈爾濱 150030; 2. 黑龍江省哈爾濱市阿城區(qū)種子服務(wù)中心, 哈爾濱 150039)

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基于SRAP標(biāo)記的黃瓜霜霉菌遺傳多樣性分析

白玲玲1, 劉行風(fēng)1, 陳政瑜1, 周瑩瑩2, 劉 麗1, 張艷菊1*, 張 奧1, 楊 森1

(1. 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院, 哈爾濱 150030; 2. 黑龍江省哈爾濱市阿城區(qū)種子服務(wù)中心, 哈爾濱 150039)

本研究對(duì)來(lái)自黑龍江、遼寧、河北、山東、江蘇5個(gè)省12個(gè)黃瓜主產(chǎn)區(qū)的77個(gè)黃瓜霜霉菌菌株,采用SRAP分子標(biāo)記進(jìn)行了遺傳多樣性分析。從35對(duì)SRAP引物中篩選出10對(duì)引物,共產(chǎn)生9 554條擴(kuò)增條帶,其中9 132條表現(xiàn)多態(tài)性,占95.6%?；赟RAP分子標(biāo)記,77個(gè)黃瓜霜霉菌菌株的遺傳距離為0.60～1.00,表明黃瓜霜霉菌具有豐富的遺傳多樣性。通過(guò)聚類(lèi)分析,77個(gè)黃瓜霜霉菌菌株聚類(lèi)為8個(gè)類(lèi)群,并且來(lái)自相同地區(qū)的菌株大多數(shù)聚集于同一類(lèi)群中,表明黃瓜霜霉菌群體的遺傳多樣性與其地理來(lái)源密切相關(guān)。

黃瓜霜霉病; 分子標(biāo)記; SRAP; 群體遺傳

由藻物界卵菌門(mén)古巴假霜霉菌Pseudoperonosporacubensis(Berkeley & Curtis) Rostovzev侵染引起的霜霉病是黃瓜生產(chǎn)上的重要葉部病害。該病害廣泛分布于世界各地,在適宜條件下,傳播流行速度極快,一到兩周時(shí)間即可造成葉片全部枯死,對(duì)黃瓜生產(chǎn)威脅極大[1-2]。

目前,國(guó)內(nèi)外學(xué)者利用不同的分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)黃瓜霜霉菌遺傳多樣性開(kāi)展了相應(yīng)的研究。Wang等[3]通過(guò)對(duì)rDNA-ITS序列進(jìn)行研究認(rèn)為,黃瓜霜霉菌在種內(nèi)保持高度的遺傳一致性,而種間遺傳存在差異且與親緣關(guān)系有密切的關(guān)系。Sarris等[4]利用AFLP對(duì)來(lái)自捷克、克里特島、法國(guó)和荷蘭的黃瓜霜霉菌菌株進(jìn)行了遺傳多樣性研究,發(fā)現(xiàn)霜霉菌菌株被劃分為2個(gè)獨(dú)立的類(lèi)群,一個(gè)類(lèi)群為捷克、法國(guó)和荷蘭的所有菌株;另一個(gè)類(lèi)群為克里特島的菌株,分析表明，菌株遺傳多樣性與其地理起源、寄主品種、致病型和對(duì)殺菌劑抗性有關(guān)。Quesada-Ocampo等[5]通過(guò)對(duì)黃瓜霜霉菌的群體遺傳結(jié)構(gòu)分析,構(gòu)建了全球第一個(gè)黃瓜霜霉菌群體遺傳結(jié)構(gòu)圖。Polat等[6]采用ISSR和SRAP分子標(biāo)記對(duì)以色列、捷克和土耳其的87個(gè)黃瓜霜霉菌菌株進(jìn)行分析,證實(shí)菌株間具有顯著的遺傳多樣性,采自土耳其和捷克的菌株表現(xiàn)出一致的遺傳背景,而以色列的菌株則明顯不同,認(rèn)為可能是由于菌株遷移或有性生殖現(xiàn)象引起的。在中國(guó),劉艷玲等[7]對(duì)中國(guó)12個(gè)城市的34株黃瓜霜霉菌的rDNA-ITS序列進(jìn)行SNP分析表明,菌株來(lái)源與地理區(qū)域存在一定的相關(guān)性,菌株間在遺傳上存在較大的差異。張艷菊等[8]利用27個(gè)RAPD隨機(jī)引物對(duì)18株黃瓜霜霉菌進(jìn)行全基因組DNA的PCR擴(kuò)增,獲得RAPD標(biāo)記共230個(gè),發(fā)現(xiàn)各菌株之間的相似性系數(shù)較低,在基因組DNA 水平上存在差異,具有豐富的遺傳多樣性。

相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性(sequence-related amplified polymorphism, SRAP)是一種基于PCR的分子標(biāo)記技術(shù)[9],具有快速、可靠、高效、低成本、無(wú)需知道基因組的序列信息等優(yōu)點(diǎn)[10],已經(jīng)成功應(yīng)用于遺傳多樣性分析、遺傳圖譜的構(gòu)建、重要性狀的基因定位等方面的研究。Tang等[11]采用ISSR和SRAP分子標(biāo)記,對(duì)中國(guó)的34株栽培木耳Auriculariaauricula的遺傳多樣性進(jìn)行了分析,認(rèn)為SRAP的分類(lèi)更細(xì),內(nèi)容更豐富。Liu等[12]采用RAPD、ISSR和SRAP三種標(biāo)記對(duì)香菇Lentinulaedodes的遺傳多樣性進(jìn)行了分析,成功轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記。Zhang等[13]利用ISSR和SRAP分子標(biāo)記對(duì)金頂側(cè)耳Pleurotuscitrinopileatus進(jìn)行了遺傳多樣性分析,并建立了其系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù),利用SRAP分子標(biāo)記將菌株分為了6個(gè)類(lèi)群,表現(xiàn)出較高的遺傳多樣性水平。Zhang等[14]利用SRAP標(biāo)記分析了豬苓Polyporusumbellatus的遺傳多樣性。Ma等[15]對(duì)中國(guó)東北的13個(gè)地區(qū)的松口蘑Tricholomamatsutake進(jìn)行了遺傳多樣性鑒定,發(fā)現(xiàn)菌株間的遺傳距離與地理隔離具有極高的正相關(guān)性。

本文利用SRAP分子標(biāo)記對(duì)采自我國(guó)5個(gè)省12個(gè)黃瓜主產(chǎn)區(qū)的黃瓜霜霉菌群體進(jìn)行遺傳多樣性研究,了解霜霉菌遺傳多樣性和演化關(guān)系,為有效防治黃瓜霜霉病提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

2014年至2015年,在黃瓜霜霉病盛發(fā)期,從黑龍江、遼寧、山東、河北、江蘇5個(gè)省12個(gè)黃瓜主產(chǎn)區(qū)的溫室大棚中采集77個(gè)黃瓜霜霉病樣品(表1),用于SRAP分析。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 DNA提取

黃瓜霜霉菌基因組DNA的提取采用CTAB方法[15],稍加改良。DNA的純度與濃度使用紫外分光光度計(jì)(DU600,Beckman,美國(guó))檢測(cè)后,置于-20℃保存待用。

1.2.2 SRAP反應(yīng)體系和反應(yīng)程序

PCR反應(yīng)總體積為20 μL,其中10×PCR Buffer (含20 mmol/L Mg2+) 2.0 μL,dNTPs(各2.5 mmol/L) 2 μL,Taq酶(5U/μL)0.3 μL,ddH2O 12.7 μL,上下游混合引物(10 μmol/L)1 μL, 模板DNA(50 ng/μL)2 μL。反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性30 s;94℃變性1 min,35℃退火30 s,72℃擴(kuò)展1 min,進(jìn)行3個(gè)循環(huán);然后94℃變性1 min,50℃退火1 min,72℃擴(kuò)展1 min,進(jìn)行35個(gè)循環(huán);72℃延伸10 min;4℃保存。

1.2.3 SRAP引物篩選

7個(gè)SRAP上游引物和5個(gè)SRAP下游引物(表2)由上海生物工程有限公司合成,隨機(jī)組合成35對(duì)引物,選取3個(gè)模板DNA分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增,篩選擴(kuò)增條帶清晰,重復(fù)性和多態(tài)性顯著的引物,用于本研究黃瓜霜霉菌遺傳多樣性分析。

1.2.4 SRAP分析

在PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中加入2 μL加樣緩沖液,用8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠檢測(cè)。凝膠大小為180 cm×120 cm×1 mm,電泳緩沖液為1×TBE,每個(gè)點(diǎn)樣孔加2.0 μL樣品,180V恒壓下電泳約1.0 h。電泳結(jié)束后,進(jìn)行銀染。先將膠放入固定液中,輕搖7～8 min;倒掉固定液,加入滲透液,輕搖10 min左右;倒掉滲透液,蒸餾水水洗30 s;倒掉蒸餾水后,加入顯色液,輕搖至DNA條帶顯出為止;倒掉顯色液,用蒸餾水洗1次;倒掉蒸餾水,加入終止液終止反應(yīng);統(tǒng)計(jì)帶型并照相。

1.2.5 數(shù)據(jù)分析

在PAGE膠上同一位置,出現(xiàn)條帶的記為“1”,無(wú)條帶的記為“0”,生成“0”和“1”組成的原始矩陣。利用軟件NTSYS-PC(ver. 2.1)中的SIMQUAL程序計(jì)算菌株間相似系數(shù)(similarity coefficient),獲得相似系數(shù)矩陣。利用其中的SAHN程序和UPGMA方法進(jìn)行聚類(lèi)分析,通過(guò)Tree Plot模塊建立聚類(lèi)分析樹(shù)狀圖。

表1 黃瓜霜霉菌菌株名稱(chēng)及來(lái)源

Table 1 Name ofPseudoperonosporacubensisisolates and their origins

編號(hào)Number菌株名稱(chēng)Isolatecode年份Year來(lái)源Origin編號(hào)Number菌株名稱(chēng)Isolatecode年份Year來(lái)源Origin1Pc-hlj12014黑龍江省,哈爾濱市40Pc-hb32014河北省,滄州市2Pc-hlj22014黑龍江省,哈爾濱市41Pc-hb42014河北省,廊坊市3Pc-hlj32014黑龍江省,哈爾濱市42Pc-hb52014河北省,廊坊市4Pc-hlj42014黑龍江省,哈爾濱市43Pc-hb82015河北省,滄州市5Pc-hlj52014黑龍江省,哈爾濱市44Pc-hb92015河北省,滄州市6Pc-hlj62014黑龍江省,哈爾濱市45Pc-hb102015河北省,滄州市7Pc-hlj72014黑龍江省,哈爾濱市46Pc-hb112015河北省,滄州市8Pc-hlj82014黑龍江省,哈爾濱市47Pc-hb122015河北省,滄州市9Pc-hlj92014黑龍江省,哈爾濱市48Pc-hb132015河北省,滄州市10Pc-hlj112014黑龍江省,哈爾濱市49Pc-hb162015河北省,石家莊市11Pc-hlj122014黑龍江省,哈爾濱市50Pc-hb172015河北省,石家莊市12Pc-hlj132015黑龍江省,哈爾濱市51Pc-hb182015河北省,石家莊市13Pc-hlj142015黑龍江省,哈爾濱市52Pc-hb192015河北省,石家莊市14Pc-hlj152015黑龍江省,哈爾濱市53Pc-hb202015河北省,石家莊市15Pc-hlj212014黑龍江省,哈爾濱市54Pc-hb212015河北省,石家莊市16Pc-hlj222014黑龍江省,哈爾濱市55Pc-hb222015河北省,石家莊市17Pc-hlj232014黑龍江省,哈爾濱市56Pc-hb232015河北省,石家莊市18Pc-hlj242014黑龍江省,哈爾濱市57Pc-sd12014山東省,壽光市19Pc-hlj252014黑龍江省,哈爾濱市58Pc-sd22014山東省,壽光市20Pc-hlj272014黑龍江省,哈爾濱市59Pc-sd52015山東省,壽光市21Pc-hlj282014黑龍江省,哈爾濱市60Pc-sd62015山東省,壽光市22Pc-ln12014遼寧省,沈陽(yáng)市61Pc-sd72015山東省,壽光市23Pc-ln22014遼寧省,沈陽(yáng)市62Pc-sd82015山東省,壽光市24Pc-ln62015遼寧省,沈陽(yáng)市63Pc-sd92015山東省,壽光市25Pc-ln72015遼寧省,沈陽(yáng)市64Pc-sd102015山東省,壽光市26Pc-ln82015遼寧省,沈陽(yáng)市65Pc-sd112015山東省,壽光市27Pc-ln102015遼寧省,沈陽(yáng)市66Pc-sd122015山東省,壽光市28Pc-ln272015遼寧省,盤(pán)錦市67Pc-sd132015山東省,壽光市29Pc-ln282015遼寧省,盤(pán)錦市68Pc-sd142014山東省,臨沂市30Pc-ln312015遼寧省,盤(pán)錦市69Pc-sd152014山東省,臨沂市31Pc-ln332015遼寧省,凌源市70Pc-sd172014山東省,臨沂市32Pc-ln342015遼寧省,凌源市71Pc-sd192014山東省,臨沂市33Pc-ln352015遼寧省,凌源市72Pc-sd202014山東省,臨沂市34Pc-ln362015遼寧省,凌源市73Pc-sd222015山東省,泰安市35Pc-ln372015遼寧省,凌源市74Pc-sd272015山東省,泰安市36Pc-ln412014遼寧省,鞍山市75Pc-sd282015山東省,泰安市37Pc-ln422014遼寧省,鞍山市76Pc-js12014江蘇省,連云港市38Pc-hb12014河北省,滄州市77Pc-js22014江蘇省,連云港市39Pc-hb22014河北省,滄州市

2 結(jié)果與分析

2.1 黃瓜霜霉菌基因組DNA的提取

所提取的黃瓜霜霉菌基因組DNA經(jīng)1%(w/v)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)(圖1),顯示條帶清晰完整,無(wú)拖尾現(xiàn)象,DNA無(wú)降解,可滿(mǎn)足SRAP分子標(biāo)記研究。

2.2 黃瓜霜霉菌SRAP-PCR結(jié)果

采用上、下游引物自由組合的35對(duì)引物對(duì)霜霉菌菌株進(jìn)行PCR擴(kuò)增,從中篩選出10對(duì)多態(tài)性好、帶型清晰的引物組合(表3)。利用這10對(duì)引物對(duì)77個(gè)黃瓜霜霉菌菌株進(jìn)行SRAP分析,總共擴(kuò)增出條帶9 554條,大小為100～5 000 bp不等,其中9 132條為多態(tài)性條帶,多態(tài)性比率為95.6%。引物組合Me9/Em14擴(kuò)增出的條帶數(shù)最多,達(dá)1 406條;引物組合Me2/Em4擴(kuò)增出的條帶數(shù)最少。每個(gè)SRAP引物對(duì)擴(kuò)增出的平均條帶數(shù)為955條(表3)。

圖1 1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)部分黃瓜霜霉菌基因組DNAFig.1 Detection of genomic DNA of some Pseudoperonospora cubensis isolates based on ethidium bromide-stained 1% agarose gel

上游引物名稱(chēng)Forwardprimer引物序列(5'-3')Primersequence(5'-3')下游引物名稱(chēng)Reverseprimer引物序列(5'-3')Primersequence(5'-3')Me2TGAGTCCAAACCGGAGCEm4GACTGCGTACGAATTCAGMe3TGAGTCCAAACCGGTGTEm7GACTGCGTACGAATTCACMe4TGAGTCCAAACCGGAATEm9GACTGCGTACGAATTATGMe6TGAGTCCAAACCGGATGEm10GACTGCGTACGAATTCAAMe8TGAGTCCAAACCGGAGCEm14GACTGCGTACGAATTGTCMe9TGAGTCCAAACCGGAAGMe12TGAGTCCAAACCGGTAG

表3 10對(duì)引物組合對(duì)77個(gè)黃瓜霜霉菌菌株SRAP擴(kuò)增結(jié)果

Table 3 SRAP-PCR amplification of 77 isolates ofPseudoperonosporacubensisusing 10 primer pairs

引物編號(hào)Primercode引物組合Primercombination總條帶數(shù)/條Totalofband多態(tài)性條帶數(shù)目/條Polymorphicband多態(tài)性比率/%PercentageofpolymorphicbandSRAP-1Me8/Em10692692100SRAP-2Me8/Em1457850086.5SRAP-3Me2/Em4569569100SRAP-4Me2/Em998190492.2SRAP-5Me4/Em1485658868.7SRAP-6Me6/Em4895895100SRAP-7Me6/Em711301130100SRAP-8Me12/Em1012211221100SRAP-9Me3/Em412271227100SRAP-10Me9/Em1414061406100

2.3 SRAP聚類(lèi)分析

利用軟件NTSYS-PC(ver. 2.1)對(duì)供試的77個(gè)黃瓜霜霉菌菌株基因組DNA的SRAP-PCR擴(kuò)增條帶的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,獲得這些菌株間的聚類(lèi)分析樹(shù)狀圖(圖2)。由圖可見(jiàn),黃瓜霜霉菌群體遺傳多樣性比較豐富,遺傳分化較大,菌株間的相似系數(shù)在0.60～1.00之間,在相似系數(shù)為0.73時(shí)(圖2),所有菌株被分為8個(gè)類(lèi)群,第一類(lèi)群為黑龍江的所有菌株共21個(gè),占總菌株數(shù)的27.3%;第二類(lèi)群為江蘇的2個(gè)菌株(Pc-js1和Pc-js2),占總菌株數(shù)的2.6%;第三類(lèi)群為遼寧的16個(gè)菌株,占總菌株數(shù)20.8%;第四類(lèi)群為河北的所有菌株(19個(gè))和山東的部分菌株(10個(gè)),共29株,占總菌株數(shù)的37.7%;第五類(lèi)群為山東的2個(gè)菌株(Pc-sd1和Pc-sd5),第六類(lèi)群為山東菌株P(guān)c-sd8和Pc-sd9;第七類(lèi)群為山東菌株P(guān)c-sd19;第八類(lèi)群為4個(gè)山東菌株P(guān)c-sd2、Pc-sd13、Pc-sd12和Pc-sd17。

圖2 77株黃瓜霜霉菌菌株基于SRAP標(biāo)記的聚類(lèi)分析圖Fig.2 Dendrogram of 77 isolates of Pseudoperonospora cubensis based on analysis of genetic similarity of the pathogenic populations using SRAP markers

3 討論

SRAP分子標(biāo)記技術(shù)是利用一對(duì)設(shè)計(jì)獨(dú)特的引物擴(kuò)增基因閱讀框區(qū)域(opening read frame, ORF),上游引物特異性擴(kuò)增外顯子區(qū)域,下游引物特異性擴(kuò)增內(nèi)含子及啟動(dòng)子區(qū)域。本研究對(duì)5個(gè)省12個(gè)黃瓜主產(chǎn)區(qū)的77個(gè)黃瓜霜霉菌菌株的SRAP進(jìn)行了研究,從分子水平上揭示出黃瓜霜霉菌群體遺傳多樣性比較豐富。聚類(lèi)結(jié)果表明,來(lái)自黑龍江、遼寧、江蘇和河北的所有菌株分別聚類(lèi)于同一類(lèi)群內(nèi),來(lái)自山東的菌株則聚類(lèi)于5個(gè)不同的類(lèi)群。此研究結(jié)果一方面表明基于SRAP分析的黃瓜霜霉菌群體遺傳多樣性與其地理來(lái)源存在密切的相關(guān)性,同一地區(qū)來(lái)源的菌株歸于相同的類(lèi)群;另一方面也可以看出,來(lái)自山東的菌株具有較高的遺傳多樣性。

突變和有性生殖被認(rèn)為是病菌發(fā)生變異的主要原因。由于病菌發(fā)生變異,產(chǎn)生新的基因型,從而使菌株表現(xiàn)豐富的遺傳多樣性。2012年Zhang等[17]在黑龍江、吉林、遼寧、河北、山東、寧夏、陜西和青海省發(fā)現(xiàn)了卵孢子的存在,并證實(shí)越冬后的卵孢子翌年仍具有活性,可以作為黃瓜霜霉病的初侵染源。2013年Cohen等[18]報(bào)道來(lái)自我國(guó)山東、北京和黑龍江的菌株同時(shí)存在兩種交配型A1和A2,進(jìn)一步證實(shí)在這些地區(qū)病菌在自然條件下發(fā)生有性生殖。Zhang等和Cohen等的研究均在山東省發(fā)現(xiàn)病菌存在有性生殖,表明進(jìn)行有性生殖以及異宗配合的病菌,由于發(fā)生了遺傳物質(zhì)的重組,因此比不進(jìn)行有性生殖的病菌具有更大的變異性,產(chǎn)生具有更強(qiáng)適應(yīng)性、更多樣化的新侵染性后代。這些新的后代往往具有相對(duì)強(qiáng)的侵染性和復(fù)雜的毒力結(jié)構(gòu),并逐漸取代適應(yīng)性和侵染性較弱的種群,成為優(yōu)勢(shì)種群,使病害發(fā)生更加嚴(yán)重。張艷菊等[19]于2015年報(bào)道,相比于黑龍江、吉林、遼寧、北京等省份采集的菌株，來(lái)自山東省的黃瓜霜霉菌菌株對(duì)殺菌劑嘧菌酯的抗性水平最高,其原因可能是因?yàn)殚L(zhǎng)期大量使用嘧菌酯使菌株產(chǎn)生了抗藥性,這也從另一方面解釋了來(lái)自山東的病菌具有較高遺傳多樣性的原因。

迄今為止,教科書(shū)及多數(shù)學(xué)者對(duì)黃瓜霜霉病的初侵染源還未形成定論,認(rèn)為由于北方高寒地區(qū)冬季沒(méi)有黃瓜種植,推測(cè)這一地區(qū)的初侵染源可能是由發(fā)病較早的地區(qū)隨季風(fēng)吹來(lái)的孢子囊釋放游動(dòng)孢子侵染所致。但是,Zhang等[17]的研究結(jié)果表明黑龍江、吉林、遼寧、河北、山東、寧夏、陜西和青海省等地黃瓜霜霉菌均發(fā)現(xiàn)存在卵孢子,并可作為黃瓜霜霉病發(fā)生的初侵染源。Cohen等[18]的報(bào)道也有力地支持了Zhang等[17]的結(jié)論。本研究通過(guò)對(duì)黃瓜霜霉菌遺傳多樣性的研究,發(fā)現(xiàn)同一地區(qū)菌株相似性較高,而不同地區(qū)菌株間相似性較低,從分子水平證實(shí)黃瓜霜霉菌與地理來(lái)源存在相關(guān)性。

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(責(zé)任編輯：楊明麗)

會(huì) 訊

第二十四屆國(guó)際果樹(shù)病毒及嫁接傳播病害研究理事會(huì)(International Council for the Study of Virus and other Graft Transmissible Diseases of Fruit Crops，ICVF)于2017年6月4-9日在希臘瑟薩洛尼基召開(kāi)。來(lái)自世界各地的近100位學(xué)者參加了會(huì)議。中國(guó)大陸有兩人參加了此次會(huì)議，分別是華中農(nóng)業(yè)大學(xué)的王國(guó)平教授以及中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所的李世訪研究員。該次大會(huì)包括40個(gè)口頭報(bào)告以及37個(gè)墻報(bào)，內(nèi)容涉及植物病毒、類(lèi)病毒和植原體等方面。其中6位學(xué)者作了特邀大會(huì)報(bào)告，題目分別為：

1、希臘果樹(shù)的栽培生產(chǎn)現(xiàn)狀及展望

2、希臘果樹(shù)病毒研究概況介紹

3、侵染果樹(shù)的類(lèi)病毒：從接種到高通量測(cè)序(NGS)

4、NGS技術(shù)在植物病毒研究中的應(yīng)用以及對(duì)果樹(shù)無(wú)病毒種苗調(diào)運(yùn)產(chǎn)生的影響

5、果樹(shù)植原體病害

6、通過(guò)抑制寄主植物DICER的表達(dá)打破植物的防御系統(tǒng)

此次大會(huì)的一個(gè)顯著特點(diǎn)就是NGS技術(shù)在果樹(shù)病毒及果樹(shù)病毒病害研究中的廣泛應(yīng)用。近乎一半的報(bào)告不論是口頭報(bào)告還是墻報(bào)中都提到了NGS技術(shù)，說(shuō)明該技術(shù)在研究果樹(shù)病毒上的應(yīng)用空間還很大。會(huì)議期間參觀了希臘瑟薩洛尼基附近的果園，考察了李痘病毒和桃潛隱花葉類(lèi)病毒的發(fā)生分布以及危害狀況。會(huì)后對(duì)ICVF的學(xué)術(shù)委員會(huì)進(jìn)行了改選，新增委員5人。經(jīng)過(guò)投票確定，第25屆ICVF會(huì)議將于2020年在荷蘭召開(kāi)。

(李世訪,中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所 北京 100193)

Genetic diversity ofPseudoperonosporacubensisbased on SRAP markers

Bai Lingling1, Liu Xingfeng1, Chen Zhengyu1, Zhou Yingying2, Liu Li1, Zhang Yanju1, Zhang Ao1, Yang Sen1

(1.CollegeofAgriculture,NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150030,China; 2.SeedServiceCenterofAchengDistrictinHarbin,HeilongjiangProvince,Harbin150039,China)

The genetic diversity ofPseudoperonosporacubensisisolates sampled from diseased cucumber plants in 12 major cucumber-producing regions of 5 provinces, including Heilongjiang, Liaoning, Hebei, Shandong, and Jiangsu in China, was analyzed by sequence-related amplified polymorphism (SRAP). Ten out of 35 SRAP primers used in the present study produced genomic DNA polymorphism in 77P.cubensisisolates, amplifying a total of 9 554 bands, 9 132 of which were polymorphic, accounting for 95.6%. The genetic distance of the 77P.cubensisisolates ranged from 0.60 to 1.00 based on analyses of the SRAP markers. The results showed that theP.cubensispopulations presented a high genetic diversity and 77 isolates could be classified into 8 groups. Most of the isolates from the same area were clustered in the same group by using the UPGMA method, suggesting that the genetic diversity ofP.cubensisisolates was related to their geographical origins.

cucumber downy mildew; molecular marker; SRAP; population genetics

2017-02-19

2017-04-05

國(guó)家自然科學(xué)基金 (31171792);黑龍江省自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(ZD2016003)

S 436.421.11

A

10.3969/j.issn.0529-1542.2017.04.027

* 通信作者 E-mail: zhangyanju1968@163.com