舒 柯 萇 玲 廖 敏 程 韜

貴州省食品藥品檢驗(yàn)所，貴州 貴陽(yáng) 550004

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HPLC測(cè)定婦科再造丸中黃芩苷的含量

舒 柯 萇 玲 廖 敏 程 韜

貴州省食品藥品檢驗(yàn)所，貴州 貴陽(yáng) 550004

目的：建立以HPLC法測(cè)定婦科再造丸中黃芩苷含量的方法。方法：色譜柱Waters symmetry C18(250mm×4.6 mm,5μm)；以甲醇-0.2%磷酸溶液(47∶53)為流動(dòng)相；流速1mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm。結(jié)果：黃芩苷在0.1061～1.3260μg的范圍內(nèi)峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，回歸方程：Y=122.88X-2.14(r=1)，平均加樣回收率為97.3%，RSD為0.8%(n=6)。結(jié)論：所建立的含量測(cè)定方法可靠，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性良好，可用于該制劑的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)。

婦科再造丸；高效液相色譜法；黃芩苷；質(zhì)量控制

婦科再造丸由當(dāng)歸、香附、白芍、熟地黃、阿膠、茯苓、黨參、黃芩等42味中藥組成，是一個(gè)大處方的復(fù)方制劑。用于月經(jīng)先后不定期，帶經(jīng)日久，淋漓出血，痛經(jīng)，帶下等癥[1]。本品收載于國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編，中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)部分，原標(biāo)準(zhǔn)僅以測(cè)定白芍中的芍藥苷含量進(jìn)行質(zhì)量控制。黃芩作為方中佐藥，其中黃芩苷是黃芩發(fā)揮功效的主要活性成分，具有抗菌抗病毒、清除氧自由基、抗氧化、解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗腫瘤、保護(hù)心腦血管及神經(jīng)元、保肝、預(yù)防或治療糖尿病及其并發(fā)癥等作用，故本試驗(yàn)測(cè)定婦科再造丸中黃芩苷的含量，進(jìn)一步提高了該品種的可控性[2]。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀(Ultimate 3000)；KQ-500DA型數(shù)控超聲波提取儀(昆山市超聲儀器有限公司)；METTLER TOLEDO AL204電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)。

1.2 材料 黃芩苷(批號(hào)：110715-201117，中國(guó)藥品生物制品檢定院，質(zhì)量分?jǐn)?shù)91.7%)，婦科再造丸10批樣品(貴州德昌祥制藥有限公司)。甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.2%磷酸溶液(47∶53)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm；柱溫：30℃；流速：1.0mL/min，進(jìn)樣量：10μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取黃芩苷對(duì)照品適量，加甲醇制成含53.0393μg/mL的溶液，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品適量，除去糖衣，研細(xì)，取0.5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%乙醇25mL，稱(chēng)定重量，超聲(頻率34Hz，功率250W)處理45min，放冷，用60%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液，照“色譜條件”項(xiàng)下進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果供試品與黃芩苷對(duì)照品在對(duì)應(yīng)的位置出現(xiàn)色譜峰，陰性對(duì)照在該位置無(wú)色譜峰出現(xiàn)。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.5 線(xiàn)性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液(53.0393μg/mL)2、5、10、15、25μL依次注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。計(jì)算回歸方程：Y=122.88X-2.14，R=1。結(jié)果表明：黃芩苷在0.1061～1.3260μg的范圍內(nèi)對(duì)照品的進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn) 取“線(xiàn)性關(guān)系考察”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量10μL，測(cè)定黃芩苷的峰面積，計(jì)算其RSD為0.3%，結(jié)果表明，儀器精密度好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同1批樣品，按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，進(jìn)樣量10μL，測(cè)定黃芩苷的峰面積，計(jì)算其RSD為1.6%，表明該方法重現(xiàn)性好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同1樣品，按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備1份供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10h各進(jìn)樣10μL，測(cè)定黃芩苷的峰面積，計(jì)算RSD為0.9%，結(jié)果表明，供試品在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 取已測(cè)定含量的婦科再造丸(平均含量4.2251mg/g)約0.25g，精密稱(chēng)定，置于三角燒瓶中，分別精密加入對(duì)照品溶液(53.0393μg/mL)25mL，按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，計(jì)算黃芩苷的平均回收率為97.3%，RSD為0.8%。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率結(jié)果

2.10 樣品含量測(cè)定 按上述色譜條件，取婦科再造丸按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定黃芩苷的含量。結(jié)果表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

婦科再造丸為大處方制劑，藥材較多，原標(biāo)準(zhǔn)僅以測(cè)定白芍中的芍藥苷含量進(jìn)行質(zhì)量控制，使原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不夠完善。本試驗(yàn)針對(duì)制劑中的佐藥黃芩進(jìn)行研究，黃芩苷是黃芩中的主要活性成分，故選擇黃芩苷作為本制劑的質(zhì)量控制成分。

黃芩苷為一種有葡萄糖醛酸結(jié)構(gòu)的黃酮衍生物，目前普遍認(rèn)為加熱回流的提取效果最好[3]。在供試品溶液制備中，本實(shí)驗(yàn)曾以超聲回流提取和加熱回流提取進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，超聲法對(duì)黃芩苷的提取效率與傳統(tǒng)的回流提取無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同時(shí)超聲提取具有無(wú)需高溫、安全性好、操作簡(jiǎn)單易行、維護(hù)保養(yǎng)方便、提取效率高的特點(diǎn)[4-5]。故試驗(yàn)中選用超聲提取方法。對(duì)超聲提取時(shí)間進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示提取45min，樣品中黃芩苷基本提取完全，故采用超聲提取45min。該測(cè)定方法準(zhǔn)確，簡(jiǎn)單，具有較高的重現(xiàn)性。

[1]李謙，肖海濤，郝小燕.高效液相色譜法測(cè)定婦科再造丸中黃芩苷的含量[J].貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2006,31(2)：146-147.

[2]王翰華，沈岳光，陸元?jiǎng)?淺析中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中建立多指標(biāo)含量測(cè)定體系[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2010,16(10):95-96.

[3]王佩琦，王成明，盧靜華，等．正交試驗(yàn)法優(yōu)選超聲提取黃芩苷的研究[J].中醫(yī)藥學(xué)刊,2004,11(22)：2133-2134.

[4]馮亦穎，王巨存，徐學(xué)銳.HPLC法測(cè)定龍膽瀉肝丸中黃芩苷的含量[J].天津藥學(xué),2007,19(5):15-17.

[5]王玲玲，王凌，楊菲，等．RP-HPLC測(cè)定銀黃顆粒中綠原酸和黃芩苷的含量[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,12(18):124-126.

Determination of baicalin in Fukezaizao pill by HPLC

SHU Ke CHANG Ling LIAO Min CHENG Tao

Guizhou Institute for Food and Drug Control，Guiyang 550004,China

Objective To establish a HPLC to determinate the content of Baicalin in Fukezaizao pill. Methods The analysis was carried on a column of C18(Waters symmetry,250mm×4.6mm,5μm)at 30℃;methanol-0.2%Phosphoric Acid(47∶53)as mobile phase;the flow rate was 1.0mL/min;the detection wavelength was 280nm. Results A good linearity can be found in the range of 0.1061～1.3260μg with regression equation asY=122.88X-2.14,(r=1),the average recovery rate was 97.3%,RSDWas 0.8%(n=6). Conclusion This method is simple,rapid and accurate.It can be used to control the quality of Fukezaizao pill.

Fukezaizao pill;HPLC;Baicalin;Quality control

舒柯(1984-)，女，碩士研究生，研究方向?yàn)樗幤窓z驗(yàn)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。E-mail:shuke1210@163.com

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1007-8517(2017)14-0022-02

2017-05-10 編輯：陶希睿)