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        HPLC法對不同產(chǎn)地柴胡根中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的含量測定

        2017-08-08 04:41:09馬澤剛黃春花鐘輝云
        湖北農(nóng)業(yè)科學 2017年13期
        關(guān)鍵詞:柴胡

        馬澤剛++黃春花++鐘輝云

        摘要:研究采用HPLC法對5個不同品種的柴胡(Bupleurum chinense DC.)根樣品進行了柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的定量分析。結(jié)果表明,不同品種中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d含量差異較大,這可能與柴胡的生長環(huán)境、采收年限等因素的影響有關(guān)。與傳統(tǒng)方法相比較,HPLC法不僅操作簡便、快捷,而且分析方法準確,重現(xiàn)性好。

        關(guān)鍵詞:柴胡(Bupleurum chinense DC.);HPLC;柴胡皂苷a;柴胡皂苷d

        中圖分類號:R927.2;O657.7+2 文獻標識碼:A 文章編號:0439-8114(2017)13-2519-02

        DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.13.030

        The HPLC Method for Determination of Saikosaponin a and d Content in Bupleurum from Different Habitats

        MA Ze-gang, HUANG Chun-hua, ZHONG Hui-yun

        (Department of Pharmacy, Sichuan Vocational College of Health and Rehabilitation, Zigong 643000, Sichuan,China)

        Abstract: The HPLC method for quantitative determination of saikosaponin a and saikosaponin d content in 5 Bupleurum samples from different habitats was applied. The results showed that, the saikosaponin a and d content of different varieties varied greatly, the reason of it may be related to the growing environment, harvesting years and other factors. Compared with traditional methods, the HPLC was a simple, quick, accurate method with good reproducibility.

        Key words: Bupleurum chinense DC.; high-pressure liquid chromatography; saikosaponin a; saikosaponin d

        柴胡(Bupleurum chinense DC.)為植物界傘形科柴胡屬植物,以其根入藥,是中國傳統(tǒng)中藥中非常重要和常用的藥材,其性味苦涼,微寒,歸肝、膽實經(jīng),具有和解表里,疏肝升陽,疏散退熱等功效[1]。主要治療感冒、發(fā)熱、寒熱往來、試驗性肝損傷、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng)等癥狀,在臨床上已經(jīng)用來治療慢性毒性肝炎[2]。柴胡主要含有皂苷、揮發(fā)油、植物甾醇、黃酮類、多糖等成分[3-5]。其中柴胡皂苷為柴胡主要有效成分之一,現(xiàn)代藥理研究表明,柴胡皂苷a、柴胡皂苷d活性較強[6,7]。中國柴胡資源分布廣泛,產(chǎn)地的自然環(huán)境差異大,為考察不同品種柴胡的質(zhì)量情況,本研究采用HPLC法對中國5個不同產(chǎn)地的柴胡根樣品進行了柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的定量分析,為柴胡生藥質(zhì)量評價提供一定的科學依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        柴胡皂苷a、柴胡皂苷d 標準品購于成都瑞芬思生物科技公司,經(jīng)HPLC面積歸一化法測定, 純度>98%;柴胡5個不同樣品(湖北柴胡根、劍閣柴胡根、甘肅柴胡根、青川柴胡根、馬公鄉(xiāng)柴胡根)購于成都藥材市場,經(jīng)四川衛(wèi)生康復職業(yè)學院副主任藥師鐘輝云鑒定為傘形科植物柴胡。除乙腈為色譜純外,其他試劑均為分析純,水為二次蒸餾水。高效液相色譜儀(美國Agilent公司)。

        1.2 方法

        1.2.1 色譜條件 色譜柱:ZORBAX EXTEND-C18(250 mm×4.6 mm,5.6 μm);流動相:乙腈-水,梯度洗脫,其時間程序為0-24-27-30 min,乙腈體積分數(shù)相應為25.0%-69.0%-25.0%-25.0%;柱溫30 ℃;檢測波長210 nm;流速0.8 mL/min。

        1.2.2 標準液制備 分別稱取柴胡皂苷a標準品6.3 mg,柴胡皂苷d標準品7.7 mg,用甲醇溶解,再定容至10 mL。

        1.2.3 樣品溶液的配制 稱取各樣品粗粉1 g,一共3份,加0.1 g氫氧化鈣,80%甲醇溶液50 mL,60 ℃提取0.5 h,過濾,濾液定容至50 mL。

        1.2.4 標準曲線的繪制 將柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的標準液做5、10、20、40、80倍稀釋,以峰面積為縱坐標(y),濃度為橫坐標(x)作標準曲線,進行線性回歸。各物質(zhì)的回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍見表1。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 柴胡皂苷a、柴胡皂苷d含量測定

        取樣品供試液進行HPLC測試結(jié)果見表2。由表2可知,不同品種中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d含量差異較大,其中柴胡皂苷a的含量以湖北柴胡根最高,劍閣柴胡根最低,柴胡皂苷d的含量以青川柴胡根最高,劍閣柴胡根最低。

        2.2 重復性試驗

        取湖北柴胡根6份,按“1.2.3”制備供試液,按“1.2.1”進樣進行測定,計算柴胡皂苷a的RSD為2.67%(n=6),柴胡皂苷d的RSD為2.31%(n=6)。

        2.3 加樣回收率的測定

        取1 g湖北柴胡藥材粉末,分別加入32.5、49.4 mg柴胡皂苷a、柴胡皂苷d,按“1.2.1”進行測定,測其峰面積,柴胡皂苷a的回收率為102.35%,RSD為1.04%(n=6);柴胡皂苷d的回收率為99.21%,RSD為1.31%(n=6)。

        2.4 精密度試驗

        精密吸取柴胡皂苷a、柴胡皂苷d混合標準品溶液按“1.2.1”進行測定,連續(xù)進樣6次,記錄其峰面積,計算柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的相對標準偏差。試驗測得胡皂苷a、柴胡皂苷d的RSD分別為1.8%、1.6%,表明色譜系統(tǒng)精密度符合要求。

        2.5 穩(wěn)定性試驗

        取湖北柴胡供試液室溫下放置,按上述色譜條件每隔2 h測定1次,8 h內(nèi)共測5次,記錄柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的峰面積,計算相對標準偏差。結(jié)果測得柴胡皂苷a的RSD為2.6%,柴胡皂苷d的RSD為2.1%,表明樣品在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

        3 討論

        預試驗結(jié)果表明,隨著甲醇體積分數(shù)的增加提取率增加,當甲醇體積分數(shù)達到80%的時候,提取率達到最大,加氫氧化鈣有利于提取純化柴胡皂苷a、柴胡皂苷d。與傳統(tǒng)方法相比較,本試驗的提取方法不僅操作簡便、快捷,分析方法準確,重現(xiàn)性好,而且采用了氫氧化鈣提取柴胡皂苷,提取率高,在方法上有一定的創(chuàng)新。本試驗結(jié)果表明,不同品種中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d含量差異較大,這可能與柴胡的生長環(huán)境、采收年限等因素的影響有關(guān)。本試驗樣品中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d含量均達到2010版《中國藥典》規(guī)定“柴胡中柴胡皂昔a和d的總量不得少于0.30%”。因此,所測樣品均具有一定的藥用價值。本研究采用HPLC法對5個不同品種的柴胡根樣品進行了柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的定量分析,可為柴胡的質(zhì)量評價、提取分離純化、臨床應用開發(fā)提供一定的科學依據(jù)。

        參考文獻:

        [1] 林麗珠,周岱翰,鄭心婷.中醫(yī)藥提高晚期非小細胞肺癌患者生存質(zhì)量的臨床觀察[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2006,26(5):389.

        [2] 江蘇新醫(yī)學院.中藥大辭典(下冊)[M].上海:上??萍汲霭嫔?, 1977.

        [3] 沃 源,姚 琳,孫世偉.北柴胡化學成分的研究進展[J].黑龍江醫(yī)藥,2011,21(2):215-217.

        [4] 謝東浩,蔡寶昌,安益強,等.柴胡皂昔類化學成分及藥理作用研究進展[J].南京中醫(yī)藥大學學報,2007,23(1):63-65.

        [5] 陳 瑩,譚玲玲,蔡 霞,等.柴胡屬植物化學成分研究進展[J]. 中國野生植物資源,2006,25(2):4-7.

        [6] 楊志剛,陳阿琴,孫紅祥,等.柴胡皂苷藥理作用研究進展[J].中國獸藥雜志,2005,39(5):27-30.

        [7] 黃 偉,孫 蓉.柴胡皂苷類成分化學與藥理和毒理作用研究進展[J].中藥藥理與臨床,2010,26(3):71-74.

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