李紅俠，孫 寧，王 婷，郭云風(fēng)，王海潮，陳紅玲

宿州學(xué)院生物與食品工程學(xué)院，宿州，234000

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土壤施硒對(duì)大蒜抗氧化作用的影響

李紅俠，孫 寧，王 婷，郭云風(fēng)，王海潮，陳紅玲

宿州學(xué)院生物與食品工程學(xué)院，宿州，234000

在土壤中施加不同濃度的硒,研究硒對(duì)大蒜抗氧化作用的影響。結(jié)果表明：當(dāng)硒濃度為0.3 mg·L-1時(shí)，大蒜幼苗葉片中葉綠素含量、超氧化物歧化酶以及過(guò)氧化物酶的活性最高；當(dāng)硒濃度為0.2 mg·L-1時(shí)，POD的活性和葉綠素含量均較低；當(dāng)硒濃度為 0.75 mg·L-1時(shí)，大蒜葉片中葉綠素含量下降，POD 活性降低，對(duì)幼苗生長(zhǎng)有一定的抑制作用。綜合分析，土壤中施加適當(dāng)?shù)奈芴岣叽笏馊~片中葉綠素的含量、POD和SOD的活性；但高濃度(0.75 mg·L-1)硒影響大蒜葉片中葉綠素的含量，且在一定程度上抑制POD和SOD的活性；當(dāng)硒濃度為0.3 mg·L-1時(shí)，大蒜葉片中葉綠素的含量及POD和SOD的活性也較高，適宜大蒜對(duì)硒的有效吸收。

亞硒酸鈉；大蒜；抗氧化作用

微量元素硒對(duì)人體健康非常重要，因?yàn)樗侨梭w中部分抗氧化酶和硒蛋白的重要組成部分，人體內(nèi)缺硒，可能導(dǎo)致各種疾病。有研究表明，硒可以保護(hù)人的心血管和心肌的健康，具有抗氧化、防癌抗癌等多種重要的生理功能。因此，安全有效的補(bǔ)硒成為當(dāng)今食品領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[1-3]。當(dāng)今農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展趨勢(shì)以生產(chǎn)富硒農(nóng)產(chǎn)品為發(fā)展方向。國(guó)內(nèi)已有學(xué)者對(duì)硒在煙草、水稻、茄子、大蒜和生菜等作物上的肥效和積累特性作了一些探究[5-6]。本文以大蒜為研究對(duì)象，探索硒對(duì)大蒜幼苗生長(zhǎng)的影響，為硒在改善蔬菜和作物生長(zhǎng)上的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材 料

供試大蒜(AlliumsativumL.)購(gòu)于宿州市大潤(rùn)發(fā)超市，供試土壤來(lái)源于宿州學(xué)院實(shí)驗(yàn)田。

1.2 方 法

1.2.1 土壤有機(jī)質(zhì)測(cè)定

按常規(guī)分析方法測(cè)定栽培基質(zhì)速效氮、磷、鉀的含量和土壤的酸堿性：土壤有機(jī)質(zhì)21.35 g·kg-1，速效氮90.15 ·kg-1，速效磷15.42 ·kg-1，速效鉀124.51 ·kg-1，pH為7.1～7.3。

1.2.2 盆栽試驗(yàn)

以大蒜為試驗(yàn)材料,選擇大小均一、飽滿的無(wú)機(jī)械破損的大蒜蒜瓣,用10%雙氧水消毒8～10 min,流水沖洗5遍,蒸餾水沖洗4遍。沖洗好的蒜瓣播于直徑為25 cm、高為10 cm盛有0.5 kg田土的花盆里。硒以亞硒酸鈉計(jì)，試驗(yàn)設(shè)7個(gè)亞硒酸鈉濃度梯度,0、0.2、0.25、0.3、0.35 、0.5、0.75 mg·L-1，每個(gè)梯度5個(gè)重復(fù)，出苗后兩葉期開(kāi)始施于土壤中，每盆200 mL，苗期共施2次。

1.2.3 指標(biāo)測(cè)定[6]

檢測(cè)葉片中葉綠素含量、超氧化物歧化酶(SOD)和過(guò)氧化物酶(POD)的活性。

1.2.3.1 葉綠素含量的測(cè)定

(1)葉綠素的提?。簭拇笏庵仓晟线x取新鮮葉片，剪去枯葉尖，去除葉片中間稍粗些的葉脈，然后處理成小碎片。精確稱取0.50 g放進(jìn)研缽里，再加少許碳酸鈣和石英砂以及丙酮5 mL，迅速研磨成勻漿，然后添加5 mL80%的丙酮，把勻漿轉(zhuǎn)入離心管，再用80%丙酮適量洗滌研缽，一并倒入離心管，離心后棄沉淀，上清液用80%丙酮定容至20 mL。

(2)光密度的測(cè)定：取1 mL上述葉綠素提取液，加4 mL80%丙酮稀釋后轉(zhuǎn)入比色杯中，用80%丙酮對(duì)照,分別測(cè)定663和645 nm處的光密度值(OD)。按公式(1)計(jì)算葉綠素濃度(mg·L-1),根據(jù)稀釋倍數(shù)分別計(jì)算每克鮮重葉片中色素的含量。

C=8.02OD663+20.21OD645

(1)

1.2.3.2 超氧化物歧化酶(SOD)活性總?cè)~綠素濃度測(cè)定

(1)粗酶液的提取：精確稱取大蒜葉片樣品3.0 g，放到4℃預(yù)冷的研缽中，往缽體中加入4℃預(yù)冷的50 mmoL·L-1pH7.8磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉磷酸緩沖液1 mL,低溫研磨至勻漿后轉(zhuǎn)移到離心管中，再用3 mL磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉磷酸緩沖液沖洗研缽并轉(zhuǎn)入離心管，4℃，10 000 r·min-1離心20 min,上清液為粗酶液。

(2)超氧化物歧化酶活性的測(cè)定：酶反應(yīng)體系加樣次序?yàn)?0 mmoL·L-1pH7.8磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉磷酸緩沖液1.5 mL,130 mmoL·L-1甲硫氨酸溶液0.3 mL，750 μmoL·L-1每升氮藍(lán)四唑溶液0.3 mL,1 μmoL·L-1乙二胺四乙酸二鈉溶液0.3 mL，0.2 μmoL·L-1核黃素溶液0.3 mL，酶液0.1 mL,蒸餾水0.2 mL,在20 mL玻璃試管中充分混勻后，將試管在4 000 lx光下反應(yīng)8 min，其中，設(shè)2支試管作為對(duì)照(用蒸餾水代替酶液)，混勻后,將一只對(duì)照試管置于暗處，另一只對(duì)照試管和其他加酶液試管一起置于日光燈下反應(yīng)8 min，反應(yīng)結(jié)束后立即避光。以不照光對(duì)照管作為空白參比，在波長(zhǎng)560 nm處測(cè)定吸光度值。以每分鐘每克鮮重(FW)樣品的反應(yīng)體系對(duì)氮藍(lán)四唑光還原的抑制達(dá)50%時(shí)為一個(gè)超氧化物歧化酶活性單位(U)。

1.2.3.3 過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定

反應(yīng)體系加樣次序?yàn)?5 mmoL·L-1愈創(chuàng)木酚溶液3 mL，250 mmoL·L-1過(guò)氧化氫溶液0.2 mL,0.1 mL酶液，從加入酶液30 s起測(cè)定反應(yīng)體系在波長(zhǎng)470 nm處的吸光度值，連續(xù)測(cè)定10 min。以每克鮮重(FW)樣品每分鐘吸光度變化值增加0.001時(shí)為一個(gè)過(guò)氧化物酶活性單位(U)。

1.2.3.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 14.0軟件處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 土壤施硒對(duì)大蒜幼苗葉綠素含量的影響

葉綠素作為植物光合作用的主要色素，其含量的多少在一定程度上反映了植物光合能力的強(qiáng)弱。由表1可知，硒濃度在0.2～0.3 mg·L-1時(shí)大蒜葉片中葉綠素含量逐漸增加，與對(duì)照相比均達(dá)到顯著和極顯著水平，說(shuō)明硒能促進(jìn)葉綠素的合成。當(dāng)硒濃度為0.3 mg·L-1時(shí)，葉綠素含量最高，高于對(duì)照14.10%；但當(dāng)硒濃度在0.35～0.75 mg·L-1時(shí)，葉綠素含量雖高于對(duì)照，但隨硒濃度增加而逐漸降低，說(shuō)明對(duì)葉綠素合成的促進(jìn)作用逐漸降低?？梢?jiàn)，不同濃度硒處理影響大蒜葉綠素質(zhì)量分?jǐn)?shù)，從而間接影響大蒜的生長(zhǎng)。

表1 各組大蒜生理指標(biāo)含量的測(cè)定

注：*表示顯著差異(P<0.05)，**表示極顯著差異(P<0.01)。

2.2 土壤施硒對(duì)大蒜幼苗POD活性的影響

過(guò)氧化物酶(Peroxidase)與作物的光合作用、呼吸作用和生長(zhǎng)素的氧化等有密切關(guān)系，植物體內(nèi)某一時(shí)期代謝的變化可通過(guò)POD活性變化來(lái)反映。POD活性的高低與酚類物質(zhì)代謝、植物抗性密切相關(guān)。當(dāng)POD活性高時(shí)，作物的抗逆性就強(qiáng)，作物對(duì)于逆境的忍受能力也強(qiáng)。在逆境條件下，當(dāng)作物受到傷害時(shí)，總是伴隨著自由基生成量的增加，適量硒能消除過(guò)量自由基，保護(hù)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)免受紫外輻射的損傷。由表1可知，與對(duì)照相比，試驗(yàn)組葉綠素含量在顯著性水平為0.05時(shí)，差異均顯著。當(dāng)曬濃度為0.3 mg·L-1時(shí)，達(dá)到最高值，在0.01水平時(shí)，差異極顯著。當(dāng)硒濃度在0.35～0.75 mg·L-1時(shí)，處理對(duì)POD活性有一定影響。POD活性逐漸減弱，表明硒對(duì)大蒜幼苗的促進(jìn)作用也隨著降低。

2.3 土壤施硒對(duì)大蒜幼苗SOD活性的影響

SOD是自然界惟一的以氧自由基為底物的酶，是生物體內(nèi)最重要的清除活性氧自由基的酶類，在活性氧代謝中處于重要地位[7]。由表1可知，當(dāng)硒濃度為0.3 mg·L-1時(shí)，SOD值最高，在0.01水平上達(dá)到極顯著；當(dāng)硒濃度增加，SOD值雖高于對(duì)照組，達(dá)到顯著水平，但SOD值逐漸下降，說(shuō)明施硒濃度不能高于0.3 mg·L-1。

3 結(jié) 論

給大蒜施用一定濃度的硒，有利于大蒜幼苗的生長(zhǎng)。當(dāng)亞硒酸鈉溶液濃度為0.3 mg·L-1時(shí)，大蒜葉片中葉綠素含量、氧化物歧化酶和過(guò)氧化物酶的活性均較高，對(duì)大蒜的生長(zhǎng)有較好的促進(jìn)作用；當(dāng)亞硒酸鈉溶液濃度為0.2 mg·L-1時(shí)，POD的活性較低，葉綠素含量較低；當(dāng)硒濃度為0.75 mg·L-1時(shí)，硒對(duì)大蒜葉片中葉綠素含量、POD和SOD活性有一定的抑制作用。綜合分析，適當(dāng)濃度的亞硒酸鈉溶液能提高大蒜中葉綠素的含量，同時(shí)提高POD和SOD的活性；但高濃度(0.75 mg·L-1)硒酸鈉對(duì)大蒜葉片中葉綠素的含量和POD、SOD的活性有一定的抑制作用。在硒酸鈉濃度為0.3 mg·L-1時(shí)，大蒜葉片中葉綠素的含量和POD、SOD的活性較高，適宜大蒜對(duì)硒的有效吸收,說(shuō)明較低的施硒量能提高大蒜的抗氧化能力，而較高濃度施硒量抑制抗氧化作用。

[1]Li Q,Liu M,Hou J,et al.The preralence of keshan disease in China[J].International Journal of Cardiology 2013,168(2):1121-1126

[2]Yao Y,Pei F,Kang P.Selenium,iodine and the relation with Kashin-Beck disease[J].Nutrition 2011,27(11-12):1095-1100

[3]荀黎紅，吳叢雅.硒與癌癥的關(guān)系研究現(xiàn)狀[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)：醫(yī)學(xué)地理分冊(cè)，2006(3)：100-102

[4]滕世輝，李曉霞.對(duì)葉面噴硒對(duì)稻米產(chǎn)量和含硒量影響研究初報(bào)[J].農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào)，2015，5(11):1-3

[5]劉中良,涂清芳,姜自紅,等.設(shè)施水培大蒜栽培管理技術(shù)[J].濱州職業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào),2012,9(1):62-66

[6]張志良.植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].北京:高等教育出版社, 2015:133-135

[7]郝建軍，康宗利，于洋.植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].北京：化學(xué)工出版社，2007：101-102

(責(zé)任編輯：劉小陽(yáng))

10.3969/j.issn.1673-2006.2017.05.035

2017-01-20

宿州學(xué)院“教師教學(xué)發(fā)展研究項(xiàng)目”(2016FZ3)；宿州學(xué)院“第十屆大學(xué)生科學(xué)研究項(xiàng)目”(KYLXLKYB16-22)；安徽省高?！皟?yōu)秀青年人才支持計(jì)劃一般項(xiàng)目”(gxyq2017091);宿州學(xué)院自然科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目“含二氫吡唑骨架的香豆素衍生物的設(shè)計(jì)、合成及生物活性研究”(2016yzd04)。

李紅俠(1971-)，女，安徽蕭縣人，碩士，研究方向：植物生理。

S633.4

：A

：1673-2006(2017)05-0122-03